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1、免疫血液学基础原理,2,抗原(antigen),免疫原(immunogen)是能够刺激机体免疫系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞结合,产生免疫反应。,3,完全抗原(antigen,complete) 具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为完全抗原。 半抗原 (hapten) 缺乏免疫原性而只有反应原性的抗原称为半抗原。,4,抗原的基本特征,1、外源性2、分子量大,结构复杂3、特异性 免疫原性(immunogenicity)4、抗原性 反应原性(specificity),5,抗原抗体反应的特异性,6,抗原的功能,抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液
2、免疫(humoral response)或细胞免疫(cell-mediated response) 反应。 前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液中;后者由淋巴细胞介导,出现延迟性超过敏反应或排斥移植物的生物效应。,7,影响抗原免疫原性的因素,种属间的抗原性 同种间的抗原差异 个体间的差别进入途径抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺激频率,8,红细胞血型抗原,红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面,有不同的外部形态,有或没有某一个抗原成份,形成了不同的血型。 红细胞血型抗原必须是用相应抗体检测到的红细胞表面抗原,属于遗传性状。,9,红细胞血型抗原的生化结构,由结合到蛋白或脂上的碳水化合物 carb
3、ohydrat 决定 ABO 、 Lewis 、 Hh 、 P、 Ii等由蛋白的氨基酸序列决定 MNSs、 Rh、 Kell、 Kidd等大多数血型抗原,10,血型系统(blood group system) 由单一基因座位控制,或是由二个或更多的紧密连 锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制血型集合(blood group collection) 抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合高、低抗原频率组 ( high and low frequency antigens ),11,高频抗原 (high frequency antigens) 为大多数人所具有的血型抗原,表示1000个人中至
4、少有999人存在此抗原。低频抗原 (low frequency antigens) 为少数人所具有的血型抗原,表示 1000个人中最多只有1人有此抗原。又称为私有血型组抗原。,12,血型系统的概念,一般说,血型系统是指一系列等位基因及其修饰基因,它们产生遗传上、化学上有关的、血清上可区别的抗原.,13,血型系统的确立,对发现的抗原进行研究,如果发现的抗原在已发现的各血型系统中呈均匀分布,也就是说该抗原与已知的血型系统间无遗传关系,就可将该抗原确立为一个血型系统,14,发现血型系统的方法,同种免疫 异种免疫两点注意:1 、某些血型系统的命名和该系统的遗 传关系有矛盾。 2、 血型抗原一般用相应抗
5、体捡出,是 是血型系统的建立是依据抗原,而 不是根据抗体。,15,抗体(antibody),抗体是机体对外来抗原刺激所产生的一组具有免疫功能的球蛋白,即免疫球蛋白( immunoglobulin, Ig )。,16,17,18,抗体的分类,按产生的原因和条件大致可分为三类天然抗体 natural antibody 免疫抗体 immune antibody自身抗体 autoantibody,19,自然状态下的红细胞,21,22,23,按抗体与抗原反应的最适温度,分为两种冷型抗体 cold antibody温型抗体 warm antibody,24,25,按免疫球蛋白的生物化学特性分为五类 IgG
6、 IgM IgA IgE IgD,26,IgG的四种亚类,27,IgG和IgM免疫球蛋白的特征,28,补体 complement,补体是存在于人和动物血清中的一种正常成分,由球蛋白、糖和磷脂结合而成,约占血清球蛋白总量的10。它能补助各种特异性抗体溶解相应的细菌和细胞。,29,补体系统 complement system,补体是由20多种血清蛋白成分组成的具有类似酶性质的一组复杂的血清蛋白系统。各成分均以不活动的酶原形式存在于血清中,只有被激活后,把酶原变成酶,才能发挥其生物活性作用,所以也叫做补体系统。,30,补体的性质,补体的性质是非特异性,不稳定,易被紫外线、机械振荡、化学药物以及加热破
7、坏其活性 。,31,32,补体溶解细胞的机理,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,免疫应答immunity responsion,免疫应答是机体受外来抗原刺激后所引起的免疫活性细胞与之相互作用的一系列复杂的免疫过程。 参与免疫应答的细胞主要有巨噬细胞、B淋巴细胞和T 淋巴细胞。,45,免疫的分类,根据抗原的来源不同可分为三类同种免疫 alloimmunization 异种免疫 heterogeneous immunization 自身免疫 autoimmunization,46,根据介导细胞不同可分为两大类体液免疫 由B淋巴细胞介导 初次免疫应答 二次免疫应
8、答细胞免疫 由T淋巴细胞介导,47,48,49,抗原抗体反应,抗原抗体反应是机体防御系统功能的一部分,借以排除外来物质对机体的损害,维持机 体内环境的平衡稳定,健康生存。 不相宜的抗原抗体反应也会给机体带来严 重损害,甚至危及生命。,50,临床较为常见的抗原抗体反应有形成分(红细胞、白细胞和血小板)与抗体之间的抗原抗体反应各型蛋白(蛋白型别不同)与特异性抗体之间的过敏性抗原抗体反应,51,抗原抗体反应常用的检测方法,凝集反应 agglutination 凝集原 agglutingen 凝集素 agglutinin 溶血反应 hemolysis 溶血原 hemolysinogen 溶血素 hem
9、olysin沉淀反应 precipitation 沉淀原 precipitnogen 沉淀素 precipition,52,凝集反应的原理,是抗体分子在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥,使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。 直接凝集 direct agglutination 间接凝集 indirect agglutination,53,IgM抗体造成的直接凝集,54,55,间接凝集反应的两个阶段,第一阶段致敏阶段,第二阶段 真凝集阶段,56,IgG抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反应,57,试管中红细胞凝集强度的判断,58,红细胞凝集反应结果的判读评分标准,4+ 1个凝块,背景清晰,无游离红
10、细 3+ 23个凝块,背景清晰,无游离红细 2+ 多个小凝块,背景清晰,无游离红细 1+ 无数的小颗粒,背景混浊,有游离红细胞 W+ 镜下较少凝集,有较多的游离红细胞阴性 肉眼观察不到凝集,镜下全为游离红细胞,59,红细胞凝集反应中的特殊现象,缗钱状凝集 rouleaux formation 混合凝集 mixed field agglutination,60,影响红细胞凝集反应的因素,抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度红细胞间距离,61,常用红细胞抗原和抗体鉴定试验,生理盐水法 saline agglutination test抗球蛋白试验 antiglobulin t
11、est , Coombs 蛋白水解酶试验 enzyme-treated cell agglutination低离子强度试验 low ionic- strength solution, LISS聚凝胺试验 polybrene technique 凝胶试验 gel technique 吸收放散试验 absorption elution test,62,红细胞血型学技术的发展,以DNA为基础的血型基因定型技术PCR-RFLP 聚合酶链反应-限止性片段长度多态性polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphismPCR-S
12、SP 聚合酶链反应-序列特异性引物polymerase chain reaction sequence specific primer,63,红细胞血型学技术的发展,PCR-SSOP 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针polymerase chain reaction sequence specific oligonucleotide probeSBT DNA序列测定,DNA sequencing荧光流式细胞技术,64,血型的遗传方式,一、常染色体显性或等显性遗传 autosomal dominant inheritance 常染色体显性 等显性二、常染色体隐性遗传 autosomal recessive inheritance三、X连锁显性或等显性遗传 sex-linked inheritance四、血型群体遗传学 Blood group population genetics,65,常染色体显性性状,:男性, :女性, :无性状, :有性状 :性状携带者 :随机配偶 :近亲配偶,66,常染色体隐性性状,67,性联显性性状,68,HardyWeinberg平衡法则 H-W law genetic equilibrium 在一个较大和随机交配的群体中,在无迁移、无选择、无突变的情况下,群体中各种基因频率和基因型频率(一般需传一代后)将保持世代不变,具有恒定性。,