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1、1幽门螺杆菌感染及环氧合酶2 表达与胃癌变的关系【摘要 】 目的: 探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2) 的表达与胃癌发生、发展的关系. 方法: 胃癌(GC)标本 80 例,非典型增生(Dys) 40 例,萎缩性胃炎(CAG) 30 例,肠上皮化生 (IM) 30 例,浅表性胃炎(CSG) 30 例,应用免疫组化方法测定 COX2蛋白的表达,用亚甲兰染色检测H.pylori. 结果: CSG,GC 中 H.pylori 阳性和阴性病例 COX2表达差异无统计学意义(P0.05), 但在 CAG,IM,Dys 中的H.py
2、lori 阳性病例中 COX2表达高于 H.pylori 阴性病例(52.9% vs 7.6%, 52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%). 结论: H.pylori感染诱导 COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 【关键词】 胃肿瘤 癌前状态 螺杆菌 幽门 前列腺素内过氧化物合酶0 引言胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程. 至今,病因还没有完全研究清楚,但近年的大量研究证实,H.pylori 感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一,H.pylori 感染诱导一个复杂免疫2反应,首先炎细胞聚集,然后导致增生,细胞因子释放,最终导致分子改变. 在被 H.pylori 上
3、调的靶基因中,COX2 在胃癌进程中起重要作用,因此,COX2 与肿瘤的关系倍受关注,COX2 是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义. H.pylori 感染及其诱导的 COX2表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚. 我们检测 chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal metaphasia,dysplasia 和 gastric carcinoma标本中的 H.pylori 感染和 COX2蛋白的表达,探讨 H.pylori
4、 感染及其诱导的 COX2在不同胃黏膜病变中的表达情况,探讨其表达与胃癌发生、发展的关系,为胃癌的早期诊断及治疗提供依据.1 对象和方法1.1 对象 200501/200612病理确诊存档组织蜡块,术前未放、化疗,年龄 2890(中位 58)岁. 男 125 例,女 85 例. 其中 GC标本 80 例,CSG 30 例,CAG 30 例,IM 30 例,Dys 40 例. 常规制备 4 m连续切片 4 张,兔抗人 COX2多克隆抗体、免疫组化SABC 试剂盒及 DAB 显色试剂盒,均购自武汉博士德生物工程有限公司. 亚甲兰溶液配制:亚甲兰 11 g,硼酸 1 g 加蒸馏水 100 mL.1.
5、2 方法免疫组织化学染色采用 SABC 法: 新鲜配置 H2O2 孵3育;微波修复抗原;滴加 BSA 封闭液,室温 30 min. 甩去多余液体,不洗;每张切片加 1 滴或 50 L第一抗体,4孵育过夜;滴加二抗,37下孵育 20 min,PBS 冲洗,5 min3 次;滴加试剂SABC,37下孵育 20 min; PBS 冲洗,5 min3 次;DAB 显色:每张切片加 2 滴或 100 L新鲜配制的 DAB 溶液,显微镜下观察510 min; 蒸馏水冲洗;自来水冲洗,苏木素复染,盐酸酒精分化,中性树胶封片. COX2阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布,间质细胞(炎性细胞、内皮细
6、胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达,通过光学显微镜每张切片摄取 5 个高倍视野,计数阳性细胞个数,计算阳性细胞率, 以5%为 0 分,6%25%为 1 分,26%50%为 2 分,51%75%为 3 分,76%100%为 4 分,着色强度 0 分为阴性,1 分为浅棕黄色(弱阳性),2 分为棕黄色(阳性),3 分为深棕黄色(强阳性). 每张切片的染色积分以这两者的乘积表示. 另 HP 染色:石蜡切片 61 烤片 40 min,脱蜡,梯度水化. 亚甲兰溶液中染色 1 min. 水洗凉干后用中性树胶封固. H.pylori 在 400 倍高倍镜下观察,以切片中腺腔内找到深兰色单个或多个
7、聚集的短棒状、弧状、 “S”状杆菌为阳性( +) ,否则为阴性.统计学处理:组间率的比较采用 2检验或精确概率法,P0.05 为差异有统计学意义 .2 结果42.1 胃黏膜感染率在 CSG,CAG,IM ,Dys,GC 中 H.pylori 感染率分别为 23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG, IM,Dys 的 H.pylori 感染率与 CSG 相比差异有统计学意义(2=6.94,2=6.71,2=10.60, P0.05).2.2 胃黏膜 COX2的表达率 COX2在CSG, CAG,IM,DYS,
8、GC 中的阳性表达率分别为 10%(3/30) ,33.3%(10/30),36.6%(11/30),57.5%(23/40),72.5%(58/80),CAG,IM , Dys 的 COX2阳性表达率与 CSG 相比差异有统计学意义(2=4.81,2=5.96,2=16.57,P0.05, 图 1). GC 的阳性表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义(2=34.50,P0.01).2.3 胃黏膜感染与 COX2表达的关系 CSG,GC 中阳性和阴性病例 COX2阳性表达率差异无统计学意义(28.6% vs 4.0%,85.7% vs 65.4%),但在 CAG,IM ,DYS 中的阳性病
9、例中 COX2表达率高于阴性病例(52.9% vs 7.6%,52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%).A: CAG; B: Dys; C: IM; D: 阴性对照; E: GC 高分化; F: GC 中分化.5图 1 胃黏膜 COX2表达 SABC 4003 讨论H.pylori 已被认为是慢性活动性胃炎、十二指肠球部溃疡的重要致病因素,是胃癌的高危因素1. 胃癌是经过炎细胞浸润CAGIMDysGC的演变过程2. 我们的实验结果显示,H.pylori 在 CAG,IM,Dys 的感染率与 CSG 相比差异有统计学意义(P0.05). 胃癌 H.pylori 感染率为 35%
10、(28/80),低于CAG,IM 和 Dys 的检出率,其原因可能是由于胃癌的发生改变了胃黏膜组织结构和胃内微环境,尤其是胃癌表面的坏死组织,不利于H.pylori 继续生长或胃癌组织释放其中的破坏因子使局部 H.pylori破坏崩解所致.COX 有 2 种亚型: 结构型 COX1和诱生型 COX2,本研究结果显示,COX2 在 CAG,IM,Dys 中的表达率与 CSG 相比差异有统计学意义(P0.05 ). 在 GC 中的表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义(P0.01 ) ,提示 COX2表达可能是 CSG 发展到 GC 的分子标志.6许多研究证实 H.pylori 是诱导 COX2
11、表达的重要因素, H.pylori 感染和 COX2的表达有明显的相关性3 ,在 H.pylori感染的胃黏膜中 COX2 mRNA 和蛋白表达明显增加4 ,进一步说明了 H.pylori 和 COX2有着明显的相关性5 ,樊薇等6研究结果显示,在 H.pylori 感染的胃黏膜疾病中,COX2 阳性表达率高于非 H.pylori 感染的胃黏膜病变 ,且差异有统计学意义(P0.01),且在胃癌组二者差异亦有统计学意义(P0.05) ,但在 CAG,IM 和DYS 的胃黏膜中 H.pylori 阳性病例的 COX2表达率高于 H.pylori阴性病例(P0.05),提示 H.pylori 感染诱
12、导 COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 因此,在根除 H.pylori 感染的同时应用非甾体类抗炎药物可能对胃癌的防治起重要作用,这为肿瘤化学预防和治疗提供了新思维.【参考文献】 1 Mori N, Nada A, Hirayama T, et al. Activation of intercellular adhesion molecule expression by helicobacter pylori is regulated by NFkB in gastric epithelial cancer 7cellsJ. Infect Immun,2000,68(4):1806-181
13、4.2 Honda S, Fujioka T, Tokieda M, et al. Development of Helicobacter pylori induced gastric carcinoma in Mongolian gerbilsJ. Carcer Res,1998,58:4255-4259.3 Uefuji K, Ichikura T, Schinomiya N, et al. Induction of apoptosis by JTE522, aspecific cyclooxygenase2 inhibitor, in human gastric cancer cell
14、linesJ. Anticancer Res, 2000,20(5):4279-4284.4 Guo XL, Wang LE, Du SY, et al. Association of cyclooxygenase2 expression with Hp cagA infection in gastric canceJ. World J Gastroenterol, 2003, 9(4):246-249.5 Sung JJ, Leung WK, Go MY, et al. Cyclooxygenase2 expression in Hp associated premalignant and malignant gastric lesions J. Am J Pathol, 2000,157(3):729-735.6 樊薇,周涛, 程宝泉, 等. HP 感染及 COX2的表达与胃癌及癌前病变关系的研究J. 山东大学学报,2006,44(7):704-705.