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1、1幽门螺杆菌感染及环氧合酶2 表达与胃癌变的关系【摘要 】 目的： 探讨胃黏膜幽门螺杆菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、环氧合酶2(COX2) 的表达与胃癌发生、发展的关系. 方法： 胃癌(GC)标本 80 例，非典型增生(Dys) 40 例，萎缩性胃炎(CAG) 30 例，肠上皮化生 (IM) 30 例，浅表性胃炎(CSG) 30 例，应用免疫组化方法测定 COX2蛋白的表达，用亚甲兰染色检测H.pylori. 结果： CSG，GC 中 H.pylori 阳性和阴性病例 COX2表达差异无统计学意义(P0.05), 但在 CAG，IM，Dys 中的H.py
2、lori 阳性病例中 COX2表达高于 H.pylori 阴性病例（52.9% vs 7.6%， 52.6% vs 9.0%，67.9% vs 33.3%）. 结论： H.pylori感染诱导 COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 【关键词】 胃肿瘤 癌前状态 螺杆菌 幽门 前列腺素内过氧化物合酶0 引言胃癌的发生是一个多阶段、多因素的复杂发展过程. 至今，病因还没有完全研究清楚，但近年的大量研究证实，H.pylori 感染是胃癌病因中最重要的环境因素之一，H.pylori 感染诱导一个复杂免疫2反应，首先炎细胞聚集，然后导致增生，细胞因子释放，最终导致分子改变. 在被 H.pylori 上
3、调的靶基因中，COX2 在胃癌进程中起重要作用，因此，COX2 与肿瘤的关系倍受关注，COX2 是一种诱导型酶,其与肿瘤的发生、发展有密切关系,并且可作为预防、治疗肿瘤的靶分子,对其检测具有重要的临床意义. H.pylori 感染及其诱导的 COX2表达在胃黏膜病变转变过程中的相关性尚不清楚. 我们检测 chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal metaphasia,dysplasia 和 gastric carcinoma标本中的 H.pylori 感染和 COX2蛋白的表达，探讨 H.pylori
4、 感染及其诱导的 COX2在不同胃黏膜病变中的表达情况，探讨其表达与胃癌发生、发展的关系，为胃癌的早期诊断及治疗提供依据.1 对象和方法1.1 对象 200501/200612病理确诊存档组织蜡块，术前未放、化疗，年龄 2890（中位 58）岁. 男 125 例，女 85 例. 其中 GC标本 80 例，CSG 30 例，CAG 30 例，IM 30 例，Dys 40 例. 常规制备 4 m连续切片 4 张，兔抗人 COX2多克隆抗体、免疫组化SABC 试剂盒及 DAB 显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程有限公司. 亚甲兰溶液配制：亚甲兰 11 g，硼酸 1 g 加蒸馏水 100 mL.1.
5、2 方法免疫组织化学染色采用 SABC 法： 新鲜配置 H2O2 孵3育；微波修复抗原；滴加 BSA 封闭液，室温 30 min. 甩去多余液体，不洗；每张切片加 1 滴或 50 L第一抗体，4孵育过夜；滴加二抗，37下孵育 20 min，PBS 冲洗，5 min3 次；滴加试剂SABC，37下孵育 20 min; PBS 冲洗，5 min3 次；DAB 显色：每张切片加 2 滴或 100 L新鲜配制的 DAB 溶液，显微镜下观察510 min; 蒸馏水冲洗；自来水冲洗，苏木素复染，盐酸酒精分化，中性树胶封片. COX2阳性染色主要位于细胞胞质中,呈棕黄色弥漫性分布，间质细胞(炎性细胞、内皮细
6、胞及成纤维细胞)和平滑肌细胞中亦可见散在部分表达，通过光学显微镜每张切片摄取 5 个高倍视野，计数阳性细胞个数，计算阳性细胞率， 以5%为 0 分,6%25%为 1 分,26%50%为 2 分,51%75%为 3 分,76%100%为 4 分，着色强度 0 分为阴性,1 分为浅棕黄色（弱阳性）,2 分为棕黄色（阳性）,3 分为深棕黄色（强阳性）. 每张切片的染色积分以这两者的乘积表示. 另 HP 染色：石蜡切片 61 烤片 40 min，脱蜡，梯度水化. 亚甲兰溶液中染色 1 min. 水洗凉干后用中性树胶封固. H.pylori 在 400 倍高倍镜下观察，以切片中腺腔内找到深兰色单个或多个
7、聚集的短棒状、弧状、 “S”状杆菌为阳性（ +） ，否则为阴性.统计学处理：组间率的比较采用 2检验或精确概率法，P0.05 为差异有统计学意义 .2 结果42.1 胃黏膜感染率在 CSG，CAG，IM ，Dys，GC 中 H.pylori 感染率分别为 23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG， IM，Dys 的 H.pylori 感染率与 CSG 相比差异有统计学意义（2=6.94,2=6.71,2=10.60, P0.05）.2.2 胃黏膜 COX2的表达率 COX2在CSG， CAG，IM，DYS，
8、GC 中的阳性表达率分别为 10%（3/30） ，33.3%(10/30)，36.6%(11/30)，57.5%(23/40)，72.5%(58/80)，CAG，IM ， Dys 的 COX2阳性表达率与 CSG 相比差异有统计学意义（2=4.81，2=5.96，2=16.57，P0.05, 图 1）. GC 的阳性表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义（2=34.50，P0.01）.2.3 胃黏膜感染与 COX2表达的关系 CSG，GC 中阳性和阴性病例 COX2阳性表达率差异无统计学意义(28.6% vs 4.0%，85.7% vs 65.4%)，但在 CAG，IM ，DYS 中的阳性病
9、例中 COX2表达率高于阴性病例（52.9% vs 7.6%,52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%）.A: CAG; B: Dys; C: IM; D: 阴性对照; E: GC 高分化; F: GC 中分化.5图 1 胃黏膜 COX2表达 SABC 4003 讨论H.pylori 已被认为是慢性活动性胃炎、十二指肠球部溃疡的重要致病因素，是胃癌的高危因素1. 胃癌是经过炎细胞浸润CAGIMDysGC的演变过程2. 我们的实验结果显示,H.pylori 在 CAG，IM，Dys 的感染率与 CSG 相比差异有统计学意义（P0.05）. 胃癌 H.pylori 感染率为 35%
10、(28/80)，低于CAG，IM 和 Dys 的检出率,其原因可能是由于胃癌的发生改变了胃黏膜组织结构和胃内微环境,尤其是胃癌表面的坏死组织,不利于H.pylori 继续生长或胃癌组织释放其中的破坏因子使局部 H.pylori破坏崩解所致.COX 有 2 种亚型： 结构型 COX1和诱生型 COX2，本研究结果显示，COX2 在 CAG，IM，Dys 中的表达率与 CSG 相比差异有统计学意义（P0.05 ）. 在 GC 中的表达率与 CSG 相比差异亦有统计学意义（P0.01 ） ，提示 COX2表达可能是 CSG 发展到 GC 的分子标志.6许多研究证实 H.pylori 是诱导 COX2
11、表达的重要因素, H.pylori 感染和 COX2的表达有明显的相关性3 ，在 H.pylori感染的胃黏膜中 COX2 mRNA 和蛋白表达明显增加4 ，进一步说明了 H.pylori 和 COX2有着明显的相关性5 ，樊薇等6研究结果显示,在 H.pylori 感染的胃黏膜疾病中,COX2 阳性表达率高于非 H.pylori 感染的胃黏膜病变 ,且差异有统计学意义(P0.01),且在胃癌组二者差异亦有统计学意义(P0.05) ，但在 CAG,IM 和DYS 的胃黏膜中 H.pylori 阳性病例的 COX2表达率高于 H.pylori阴性病例(P0.05),提示 H.pylori 感染诱
12、导 COX2表达发生在胃癌形成的早期阶段. 因此，在根除 H.pylori 感染的同时应用非甾体类抗炎药物可能对胃癌的防治起重要作用，这为肿瘤化学预防和治疗提供了新思维.【参考文献】 1 Mori N, Nada A, Hirayama T, et al. Activation of intercellular adhesion molecule expression by helicobacter pylori is regulated by NFkB in gastric epithelial cancer 7cellsJ. Infect Immun,2000,68(4):1806-181
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14、linesJ. Anticancer Res, 2000,20(5):4279-4284.4 Guo XL, Wang LE, Du SY, et al. Association of cyclooxygenase2 expression with Hp cagA infection in gastric canceJ. World J Gastroenterol, 2003, 9(4):246-249.5 Sung JJ, Leung WK, Go MY, et al. Cyclooxygenase2 expression in Hp associated premalignant and malignant gastric lesions J. Am J Pathol, 2000,157(3):729-735.6 樊薇,周涛, 程宝泉, 等. HP 感染及 COX2的表达与胃癌及癌前病变关系的研究J. 山东大学学报,2006,44(7):704-705.
