平原兔急进高原后睾丸组织的病理变化

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1、1平原兔急进高原后睾丸组织的病理变化作者:袁延年 马全福 曾祥福 罗莉 张继华 李全民 潘惠娟【关键词】 高原后睾为探讨急进高原后平原兔睾丸组织的病理变化特点,对直接迁饲到海拔 4200m 地区及先在较低海拔地区(2260m )短期适应后再迁饲 4200m 地区,且不同时间的平原兔睾丸标本进行病理观察,报告如下。 1 资料与方法1.1 一般资料 平原地区(海拔 31.2m)健康同龄雄性大白兔 5 只,高原地区(海拔 2260m)健康同龄大白兔 2 只,兔龄 6个月,体重 2.53.5kg。迁饲高原前后相同方式和饲料喂养。1.2 分组 A 组 5 只为平原兔。其中 A l 为平原对照组,原饲养地

2、区海拔 31.2m,就地宰杀;A 2 、A 3 、A 4 各 1 只,直接迁饲到海拔 4200m 地区,分别于 24h、7d 及 30d 后宰杀;A 5 (1 只) ,先在较低海拔地区(2260m )饲养 20d 后再迁饲 4200m 地区 7d后宰杀。2B 组 2 只为高原兔,原饲养地区海拔 2260m。其中 B 1 (1 只)为高原对照组,就地宰杀。 B 2 (1 只)直接迁饲到海拔4200m 地区,于 24h 后宰杀。1.3 标本处理 各组均钝性致死后立即留取标本,热缺血时间不超过 15min。标本以 10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,常规切片,行 HE 染色,低倍和高倍光镜观察。1.4 细

3、胞计数 支持细胞因其数量较少,计数方便,本组采用人工计数,计每视野数及 10 个视野总数;生殖细胞则采用图文病理观察软件,计算机统计 5 个视野细胞数总数。1.5 生殖细胞与支持细胞比率 1 计算 5 个视野中 2 种细胞数目之比。1.6 胶原纤维及粘液染色 采用苦味酸法及 PAS,观察胶原纤维及 PAS 阳性物密度 2 。由于染色方法繁杂,本文不予详述。1.7 生殖细胞成分及精子发生与精子密度评分(Acker-manS 评分) 1 计算 5 个小管断面精子数,并观察生殖细胞3成分,按以下标准计 110 分:10 分,精子完好,小管结构完整。9 分,有许多精子,但精子发生不规律。8 分,仅见少

4、量精子。7 分,无精子,但有许多精子细胞。6 分,仅见少量精子细胞。 5 分,无精子及精子细胞,但有许多精母细胞。4 分,仅见少量精母细胞。3 分,仅见少量精原细胞。2 分,无生精细胞。 1 分,无生精细胞或支持细胞。2 结果 胶元纤维染色及 PAS 阳性物各组差异无显著性。2.1 支持细胞计数见表 1。表 1 支持细胞计数(略)2.2 曲细精管内细胞总数场参数计数,见表 2。表 2 曲细精管内细胞计数(略)2.3 生殖细胞与支持细胞比率,见表 3。 表 3 生精细胞与支持细胞比率 (略)4A l :睾丸左右各 1 个,成不规则蝌蚪形,长约 4.5cm,最宽处约 1.0cm,与附睾、输精管相连

5、续。新鲜标本呈紫红色,鲜艳、光滑,光镜下切面间质组织、曲细精管清晰可辨,结构完整,曲细精管内可见大量不同发育时期的生精细胞及支持细胞。其中,支持细胞呈不规则长锥体形,核椭圆形或不规则形,核仁明显。间质细胞丰富,并有成堆现象。AckermanS 评分 10 分。A 2 :曲细精管上皮内可见精原细胞、初级精母细胞及精子细胞但大部分曲细精管内的初级精母细胞减少,精子细胞明显减少,无精子。小睾丸间质内血管充血,间质细胞减少。AckermanS 评分 7 分。A 3 :各级生精细胞明显减少,无精子,间质细胞减少,无成堆现象。AckermanS 评分 6 分。A 4 :曲细精管内各级生精细胞存在,大部分管

6、腔内有精子生成。AckermanS 评分 8 分。A 5 :曲细精管紧密排列,间质成分减少,曲细精管内各级生精细胞存在,多少不一,部分管腔内有少量精子生成。AckermanS 评分 8 分。B 1 :与 A l 相比,切面间质组织轻度充血、曲细精管结构完整,曲细精管内可见大量生精细胞及支持细胞,精子丰富。富含间质细胞,但无成堆现象。AckermanS 评分 9 分。B 2 :部分曲细精管内各级生精细胞明显减少,无精子细胞,睾丸间质内血管充血明显,间质细胞减少(极少) 。AckermanS 评分 6 分。53 讨论评价动物生殖功能的一个重要依据,就是观察睾丸曲细精管内生殖细胞的数目,换句话说,就

7、是只有保持一定数量的生殖细胞才能维持正常的生殖能力 3 。尤其是要保证一定数量的成熟精子。本组实验结果显示,兔睾结构同人睾基本相似,睾丸实质主要由曲细精管和细胞间质组成,健康平原兔睾丸组织结构完整,内有大量生精细胞及支持细胞,足以维持正常的生殖能力。而平原兔急进高海拔地区后(海拔 4200m) ,曲细精管内生殖细胞数量急剧减少,急进 24h 及 7d 的兔睾标本内甚至无精子存在, AckermanS评分 7 分以下。而且由 2260m 地区急进 4200m 地区的高原兔睾有同样的表现(AckermanS 评分 6 分) 。但当平原兔先在较低海拔(2260m)地区 20d 后再送到 4200m

8、地区,并饲养较长时间(30d)后,这种改变似有逆转,表现为曲细精管内已有精子生成,如 A 4 和 A 5 的 AckermanS 评分达 8 分以上。虽然本组缺乏人睾实验依据,但理论上两者应是相似的,即任何原因的睾丸生殖细胞数量的减少,都是反映睾丸生殖功能低下的主要原因之一。支持细胞是睾丸曲细精管内生精上皮主要的组织成分,其主要功能有:( 1)支持和保障生精细胞的发育,促进生精细胞的移动和释放精子;(2)其内分泌功能可保障雄性生殖器官的正常分化及发育; ( 3)通过受体接受促卵泡刺激素(FSH)和睾酮的调节 64,5 。支持细胞数量或结构的改变,必将影响睾丸生理功能的稳定。本组支持细胞人工记数

9、显示,A 2 、A 3 支持细胞数目均高于 A 1 ,而 A 4 、A 5 则相反。该现象目前尚无明确的理论依据加以说明,可能与进驻高原时间(高原适应期)有关。为判断支持细胞数量的减少对精子发生的影响程度,本组计算了同视野内生殖细胞数与支持细胞数的比率人睾生殖细胞数与支持细胞数的比率较为稳定,约为 13:1,本实验由于条件所限,仅测得 5 个视野、每视野约 5 个小管断面。其中平原组比率为 7.8,A 2 为 6.9,A 3 为 2.1,A 4 为 12.1, A 5 为 1.5,B 1 为 7.6。假定本组实验数据可靠,那么,不稳定的比率说明低氧环境对睾丸精子发生程度的影响是可信的。动物睾丸

10、是合成雄性激素(睾酮全部来自睾丸)的重要场所,其中最重要的是间质细胞,其内分泌功能及细胞膜上的促黄体生成激素(LH)等可以合成和分泌睾酮、双氢睾酮(DHT)等。间质细胞膜上还存在促性腺激素释放素及其类似物的受体 4 。本组虽未检测睾酮、DHT 含量及外周血浓度,但理论上间质细胞和支持细胞(具有合成与分泌雄性激素结合蛋白(ABP) 、转运和浓缩睾酮和DHT)的减少,势必会影响到睾酮、DHT 的合成,外周血中浓度降低。而文献资料表明,高原人睾酮、DHT 均高于平原人,并与海拔成正比。本组结论与之相反。由于实验条件及时间所限,尚不清楚该现象是否与动物居留高原时间有关,或存在细胞器微观结构改变7等因素

11、。以往文献中已观察到动物对高原低氧环境有一定的适应能力,如表现在免疫力、细胞微观结构等方面 68 ,本组结果支持该理论,即动物进入高原后通过一定时间的饲养,其组织急性损伤是可以逆转的。参考文献1 回允中(译).阿克曼外科病理学,第 8 版,沈阳:辽宁教育出版社,1999,1257-1259.2 丁晓育,陈淑敏. 不育睾丸活检病理,免疫组化及组织化学研究. 临床泌尿外科杂志,1998 ,13(7 ):324-326.3 成令忠. 组织学与胚胎学,第 3 版.北京:人民卫生出版社,1994,214-220.4 吴阶平 .泌尿外科 .济南:山东科学技术出版社,1993,679-680.5 De Fr

12、anca LR,Andrzej Bartke KE.Strtoli cells in testis containing of lacking germ cells:a comparative study of 8paracrine effects using the W(C-kit)gene mutant mouse model.The Anatomical Rrecrd,1994,240:225.6 孙宏夫,王建国,董玉宁,等. 平原地区狗急进高原后的肾脏电镜观察.高原医学杂志,1986 ,1:1-4.7 Roach JM,Muza SR,Rock PB,et a1.Urinary leukotriene E4levels in-crease upon exposure to hypobariC hypoxia.Chest,1996,110(4 ):946-951.8 Chien CT,FUTC,WUMS.Role of renal nerves in volume expansion in chronic hypoxic rats.Ren PhysiolBiochem,1995,18(3 ):153-160.

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