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1、第十三章 免疫细胞分离及检测技术 一、选择题 (一)、A1型题（标准题） 1.外周血单个核细胞是指： A.单核细胞 B.淋巴细胞 C.单核细胞和淋巴细胞 D.吞噬细胞 E.中性粒细胞以外的细胞 2.Ficoll淋巴细胞分离液的密度为： A.1.0301.035 B.1.035 C.1.077 D.1.0751.092 E.1.092 3. Ficoll分离法分离PBMC时,理想的PBMC层位于: A.血浆层顶部 B.血浆与分离液交界处 C.局限在血浆层 D.分离液中部 E.管底 4.将 PBMC悬液注入装有玻璃纤维的层析柱中,先从柱上洗脱下来的细胞主要是: A.淋巴细胞 B.单核细胞 C. B
2、细胞 D. T细胞 E. PBMC中混入的杂质细胞 5.在PBMC悬液中加入直径为3m的羟基铁颗粒,置37,充分反应后,沉于有磁铁的管底的是: A.淋巴细胞 B.单核细胞 C. B细胞 D. T细胞 E. PBMC中混入的杂质细胞 6.将PBMC悬液倾于玻璃培养瓶中,37静置1小时,未贴壁的细胞主要是: A.淋巴细胞 B.单核细胞 C. B细胞 D. T细胞 E. PBMC中混入的杂质细胞 7.Percoll分离液法常用来分离： A.红细胞 B.白细胞 C.单个核细胞 D. T细胞和B细胞 E. 单核细胞和淋巴细胞 8.E花环沉淀试验是用于分离 A.红细胞 B.白细胞 C.单个核细胞 D. T
3、细胞和B细胞 E. 单核细胞和淋巴细胞 9. 将PBMC悬液加入尼龙毛柱内，充分反应后进行灌洗，洗脱下来的细胞是： A. B细胞 B. T细胞 C.单核细胞 D.T细胞+B细胞 E.T细胞+单核细胞 10淋巴细胞活力的表示常用： A.淋巴细胞浓度 B.活细胞浓度 C.活细胞占总细胞的百分比 D.活细胞与总细胞的比值 E.T、B淋巴细胞比例 11经台盼兰染色后，活细胞呈： A.不着色 B.蓝色 C.紫色 D.红色 E.天青色 12利用CD3McAb致敏红细胞作玫瑰花环试验，主要用来检测： A.T细胞 B.B细胞 C.单核细胞 D.树突细胞 E.中性粒细胞 13用来鉴定、检测或计数T细胞的最理想的
4、诊断试剂是： A.T细胞标志性抗原 B.T细胞标志性抗原的单克隆抗体 C.T细胞标志性抗原的多克隆抗体 D.T细胞标志性抗原的受体 E.T细胞标志性CD抗原 14B细胞表面特有的表面标志是： A.CD4 B.CD8 C.CR3 D.SmIg E.FcR 15.下列哪种是NK细胞特有的表面抗原？ A.CD2 B.CD16 C.CD56 D.CD39 E.无特异表面抗原 16.仅作用于T细胞的非特异性刺激物是： A.PWM B.PHA C.LPS D.ConA E.EBV 17既作用于T细胞又作用B细胞的非特异性刺激物是： A.PWM B.PHA C.LPS D.可溶性SPA E.EBV 18T细
5、胞亚群功能的判定主要根据： A.CD4/CD8 B.T细胞亚群计数 C.T细胞表面标志数目的多少 D.T细胞浆内酸性磷酸酶的水平 E.T细胞分泌的有关细胞因子水平 19溶血空斑试验主要是用来检测何种细胞的的功能？ A.T细胞 B.B细胞 C.中性粒细胞 D.吞噬细胞 E.NK细胞 20淋巴细胞功能体内试验的方法主要是： A.转化试验 B.对异物排斥反应的能力 C.迟发型超敏反应 D.淋巴细胞计数 E.血清中Ig浓度的检测 21正常情况下，健康人外周血经PHA刺激后，淋巴细胞转化率为： A.90% 22采用放射性核素法检测T淋巴细胞转化功能时，3H-TdR加入至培养基的时间是： A.G0期 B.
6、G1期 C.G2期 D.M期 E.S期 23测定NK细胞常根据其杀伤肿瘤细胞的功能来判断，靶细胞常选用： A.HeLa B.YAC C.K562 D.Mccoy E.Vero 24某亲和层析板包被有抗Ig抗体，此亲和层析板将吸附： A.B细胞 B.T细胞 C.NK细胞 D.淋巴细胞 E.吞噬细胞 25运用磁球分离法分离目的细胞时，若使用CD3McAb包被的磁球与淋巴细胞悬液充分作用后，将其移入一置于强磁场中的层析柱中，则最先洗脱下来的是： A.游离的T细胞 B.游离的B细胞 C.未结合细胞的磁球 D.与磁球结合的T细胞 E.与磁球结合的B 细胞 26Ficoll淋巴细胞分离法是一种： A.差速
7、密度梯度离心法 B.连续密度梯度离心法 C.亲和层析法 D.离子交换层析法 E.自然沉降法 27Ficoll淋巴细胞分离液的主要成分是： A.聚蔗糖 B.泛影葡胺 C.聚乙二醇 D.聚蔗糖+聚乙二醇 E.聚蔗糖+泛影葡胺 28Percoll分离液的主要成分是： A.聚蔗糖 B.泛影葡胺 C.聚乙二醇 D.聚乙烯吡咯烷酮 E.经聚乙烯吡咯烷酮处理的硅胶颗粒 29磁铁吸引法分离单核细胞和淋巴细胞的原理是： A.单核细胞吞噬磁铁颗粒，被管底磁铁吸引沉于管底 B.磁铁颗粒是单核细胞的一种趋化因子，单核细胞被管底磁铁吸引沉于管底 C.淋巴细胞吞噬磁铁颗粒，被管底磁铁吸引沉于管底 D.磁铁颗粒是淋巴细胞的
8、一种趋化因子，淋巴细胞被管底磁铁吸引沉于管底 E.单核细胞对磁铁的粘附能力大于淋巴细胞，故单核细胞沉于管底 30用MTT法判定淋巴细胞转化情况，其评价指标是： A.试验孔OD值 B.每分钟脉冲数 C.刺激指数 D.着色细胞数 E.着色细胞数与所计数的总细胞数之比 (二)、A1型题(否定题) 1下列哪项不是淋巴细胞分离液的基本要求? A.对细胞无毒 B.基本等渗 C.无色 D.不溶于血浆 E.有合适比重 2下列哪种不是T细胞表面的CD抗原？ A.CD2 B.CD3 C.CD4 D.CD8 E.CD19 3下列哪种不是B细胞的表面受体？ A.绵羊红细胞受体 B.Fc受体 C.补体受体 D.EBV受
9、体 E.SmIg 4下列哪项不是转化的淋巴细胞的特点？ A.细胞体积变大 B.核仁明显，核染色质疏松 C.可见有丝分裂 D.胞浆极少，天青色 E.浆内可见空泡 5关于淋巴细胞的保存，下列哪项不对？ A.保存于含10%20%灭活小牛血清的基础培养基中 B.短期保存，置4冰箱 C.长期保存，应放入液氮罐 D. 细胞冷冻和解冻时均应缓慢 E. 冷冻过程中要加冷冻保护剂 6用来分离淋巴细胞的磁球的特点不对的是： A.微球核心一般为金属小颗粒 B.表面可结合不同的生物大分子物质 C.磁球表面包被免疫物质者称为免疫磁球 D.免疫磁球具有免疫配基性质和磁响应性质 E.细胞与磁球结合后，其活性将被破 坏 7反
10、向间接溶血空斑实验中，下列哪项试剂非必需？ A.淋巴细胞（待检） B.IL-2 C.抗人IgG抗体 D.SPA致敏的SRBC E.补体 8下列哪项不是酶联免疫斑点试验检测B 细胞功能的优点？ A.可同时进行B细胞计数 B.可检测抗体分泌细胞 C.可检测抗体的分泌量 D.稳定、特异 E.可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌 (三)、B1型题（配伍题） 问题13 A.E花环法 B.3H-TdR掺入法 C.Boyden小室法 D.酶释法 E.溶血空斑试验 1.T细胞功能检测： 2.B细胞功能检测： 3.NK细胞功能检测 二、填空题： 1PBMC包括( )和( )。 2B细胞表面特异的标志有( )。
11、 3在反向溶血空斑试验中，每一个空斑代表( )。 4淋巴细胞转化情况的判定方法有( )和 ( )。 5常用的淋巴细胞活力的测定的方法是( )。 三、名词解释 1PBMC 2SmIg 四、简答题 1从PBMC中分离淋巴细胞的方法有哪些？ 2检测B细胞抗体分泌功能的方法有哪些？ 3NK细胞有哪些主要功能？如何进行其功能检测。 4何谓淋巴细胞活力？常用的检测方法有哪些？ 5简述未转化和转化的淋巴细胞的形态特征？ 五、论述题 1简述T细胞转化试验的基本原理，如何评价其转化情况？ 2简述Ficoll分离法分离PBMC的基本原理，分离过程需注意哪些事项？ 标准答案: 一、选择题 (一)、A1型题（标准题）
12、 1.C 2.C 3.B 4.A 5.B 6.A 7.E 8.D 9.B 10.C 11.A 12.A 13.B 14.D 15.E 16.B 17.A 18.E 19.B 20.C 21.C 22.E 23.C 24.A 25.B 26.A 27.E 28.E 29.A 30.C (二)A1型题(否定题) 1.C 2.E 3.A 4.D 5.D 6.E 7.B 8.A (三)、B1型题（配伍题） 1.B 2.E 3.D 二、填空题 1. 淋巴细胞 单核细胞 2. SmIg 3. 一个Ig分泌细胞 4. 形态法 放射性核素法 5. 台盼蓝染色法 三、名词解释 1PBMC：即外周血单个核细胞,包
13、括淋巴细胞和单核细胞。 2SmIg：是B细胞表面的膜免疫球蛋白，是B细胞特有的表面标志，是鉴定B细胞可靠的指标。 四、简答题 1 从PBMC中分离淋巴细胞的方法有：（1）贴壁粘附法；（2）吸附柱过滤法；（3）磁铁吸引法；（4）Percoll分离液法。 2 B细胞抗体分泌其功能检测方法有：（1）检测血清中各抗体水平；（2）反向溶血空斑试验；（3）酶联免疫斑点试验。 3 NK细胞主要功能是非特异性直接杀伤肿瘤细胞的功能，常用来检测NK细胞功能的方法有：（1）酚释法；（2）放射性检查法；（3）荧光分析法。 4淋巴细胞活力是指活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比。活力的测定通常使用的方法是台盼蓝染色法。该染
14、料不能透过活细胞细胞膜，故活细胞不染色，死亡细胞呈蓝色，观察计数200个细胞，计算不着色细胞的百分率及代表细胞的活力。 5 T细胞受PHA或其他刺激物刺激后将发生一系列形态变化，取培养细胞作涂片染色， 镜检可见后淋巴细胞、过渡性淋巴母细胞和未转化的淋巴细胞，其中后淋巴细胞和过滤性淋巴细胞统称为转化淋巴细胞，未转化和转化淋巴细胞其形态特征见下表： 转化的淋巴细胞 原淋巴细胞 过渡型 未转化淋巴细胞 细胞大小（直径m） 12-20 12-16 6-8 细胞核 大小 增大 增大 不增大 染色质 疏松 疏松 密集 核仁 清晰，1-4个 有或无 无 有丝分裂 有或无 无 无 细胞浆 胞质 增多 增多 极
15、少 着色 嗜碱 嗜碱 天青色 空泡 有或无 有或无 无 伪足 有或无 有或无 无 五、论述题 1 T细胞转化实验是检测T细胞免疫功能的经典试验，基本原理是采用T细胞敏感的刺激 物在体外刺激T细胞，T细胞受到刺激后将发生增殖、转化，根据其增殖转化的功能评定相应的细胞功能。 淋巴细胞的转化情况评定有形态法和放射性核素法： (1)形态法利用淋巴细胞受刺激物作用后，将出现细胞形态方面的改变，取培养物标本涂片可见原淋巴细胞、过渡型淋巴母细胞和未转化淋巴细胞，其中前二者计为转化的淋巴细胞，每份标本计数200个细胞，计算淋巴细胞转化率： 淋巴细胞转化率=转化淋巴细胞/（转化淋巴细胞+未转化淋巴细胞）100%
16、 正常情况下，健康人外周血经PHA刺激的淋巴细胞转化率为60-80%，小于50%可视为降低。 (2)放射性核素法为在细胞培养的S期加入H3-TdR，后者即掺入到新合成的DNA中，其掺入的多少可由细胞内反射性强度表示出来，根据掺入的多少可推测细胞的增殖程度，转化能力通常以刺激指数（SI）表示，SI=PHA刺激管cpm均值/空白对照cpm的均值，一般认为SI应大于2。 2 Ficoll分离液是聚蔗糖-泛影葡胺混合物，具有对细胞无毒，基本等渗等特性，按一定比例将两者混合使其比重在1.077左右，而外周血单个核细胞在1.076-1.090之间,红细胞1.093,粒细胞1.092,血小板为1.030-1.035。分离时先将分层液置试管底层，然后将肝素抗凝全血以Hanks液稀释后，叠加在分层液上面，使两者形成Y一清晰界面，离心后，离心管中会出现几个不同层次的液体和细
