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1、1FHIT 和 PCNA 在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达与临床意义【摘要】 目的 研究脆性组氨酸三联体基因（ FHIT）蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA ）在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(CIN) 和宫颈癌中的表达情况，探讨两者在宫颈癌早期诊断和发生发展中的临床意义。方法 采用免疫组织化学 SP 法检测 20 例正常宫颈组织；20 例宫颈CIN级、25 例 CIN/级；60 例宫颈癌组织中的 FHIT 蛋白和PCNA 的表达。结果 FHIT 蛋白在正常宫颈组、宫颈 CIN 组、CIN组、CIN/组和宫颈癌组中的阴性率分别为 0%（0/20） 、24.4%（11/45） 、10.0%（2/20 ）
2、、36.0%（9/25）和66.7%（40/60） ，各组间阴性率比较差异有统计学意义（P0.05） ；PCNA 在正常宫颈组织、宫颈 CIN 组、宫颈癌组中的阳性率分别是65.0%（13/20） 、93.3%（42/45）和 98.3%（59/60） ，各组间阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)；在宫颈 CIN 和宫颈癌中，FHIT 和 PCNA 的表达有一定的相关性(P0.05)。结论 检测宫颈CIN 中的 FHIT 蛋白表达情况，可用作高级别的 CIN 筛查或预测。FHIT 和 PCNA 对于宫颈癌前期病变和宫颈癌的筛查和早期诊断具有一定的临床参考价值。 【关键词】 宫颈上皮内瘤变
3、宫颈癌 组氨酸三联体 增殖细胞核抗原 免疫组织化学 早期诊断2【Abstract】 Objective To study the expression of fragile histidine triad (FHIT) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in normal cervix, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cervical cancer. To discuss the potential involvement of FHIT and PCNA in tumorig
4、enesis，metastasis in cervical cancer; to discuss the significance of FHIT and PCNA in early diagnosis of cervical cancer. Methods The expressions of FHIT protein and PCNA were detected by immunohistochemistry in 20 cases of normal cervix, 20 cases of CIN,25 cases of CIN/, 60 cases of cervical cancer
5、. Results The percentages of negative expression of FHIT protein in normal tissues were 0%(0/20), 24.4%（11/45）in CIN group,10.0%（2/20 ） in CINgroup,36.0%（9/25）in CIN/ group and 66.7%（40/60）in cervical cancer group. There were significant differences between groups (Chi-square test, P0.05). The posit
6、ive expression rate of PCNA wase 65.0% （13/20）in normal group, 93.3% （ 42/45）in CIN group, and 98.3%（59/60）in cervical cancer group. There was significant difference between groups (Chi-square test, P0.05). FHIT protein expression and PCNA expression were negatively related (P0.05) in CIN and cervic
7、al cancer. 3Conclusion Since the expression level of FHIT is associated with the grade of CIN, it can be used to screen or forecasting higher-grade- group of CIN. FHIT and PCNA has clinical reference value for screening and early diagnosis of cervical lesions and cervical cancer.【Key words】 Cervical
8、 intraepithelial neoplasia (CIN) Cervical carcinoma Fragile histidine triad (FHIT) Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) Immunohistochemistry Early diagnosis 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，在全球妇女恶性肿瘤中居第 2 位，占所有妇科恶性肿瘤的 10%12%1 。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad,FHIT）是一候选抑癌基因，许多研究报道多种肿瘤细胞系和原发性肿瘤中均发现有 FHIT 基因的异常
9、转录和表达，包括宫颈癌。增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）又称周期抗原，其含量反映了细胞的增殖程度，可作为人类肿瘤和预后的指标2 。本研究应用免疫组化技术检测 FHIT 和 PCNA 在正常宫颈、CIN 和宫颈癌组织中的表达情况，探讨其临床意义。1 对象与方法1.1 研究对象 收集 2007 年 1 月至 2008 年 12 月，温州医学院4附属第一医院病理科保存的石蜡包埋组织标本，共 125 例。其中正常宫颈组织 20 例，宫颈 CIN级 20 例，CIN/级 25 例，宫颈癌 60 例。正常组 20 例为因子宫良性病变而行子宫全
10、切的正常宫颈组织标本。CIN 组 45 例均为门诊宫颈活检标本。宫颈癌标本均为宫颈癌住院患者手术后标本，术前均未接受放、化疗及其他辅助治疗。1.2 方法 全部标本均经 10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，4m 连续切片 2 张。采用免疫组化 SP 法检测，根据说明书进行常规操作。高压锅喷气进行抗原修复。兔抗人 FHIT 多克隆抗体、鼠抗人 PCNA 单克隆抗体均为美国 NeoMarkers 公司产品，购自福州迈新生物技术开发有限公司。FHIT 一抗稀释度 150，PCNA 一抗为即用型。FHIT 和 PCNA 的阳性及阴性对照片均由迈新公司随试剂提供。1.3 结果判断 染色结果判定由两位经验丰富
11、的妇科病理医生盲法独立阅片完成，核对结果，取得共识。FHIT 表达结果判定：FHIT蛋白以胞浆和/或胞核内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞。在 400 倍显微镜下选 10 个视野，共计数 1000 个细胞。FHIT 表达的判断标准3：（1）根据染色强度：不染色或弱染色（浅黄色）为 1 分；中度染色（棕黄色）为 2 分；强染色（棕褐色）为 3 分。 （2）根据染色范围：阳性细胞百分比10%为 1 分， 10%50%为 2 分，550%为 3 分。将上述两种得分相乘， 3 分为 FHIT 表达缺失，记为阴性（-） ，3 分为表达正常，记为阳性（+） 。PCNA 表达结果判定4：细胞核出现棕黄色颗粒为 P
12、CNA 阳性。在 400 倍显微镜下选 10 个视野，共计数 1000 个细胞，统计阳性细胞的百分数，10%记为阴性（-） ，10% 记为阳性（+ ） 。1.4 统计学处理 所有数据输入 EXCEL 进行整理，统计处理均用SPSS for windows 11.5 统计软件进行。免疫组化的阳性表达率为计数资料，采用四格表或列联表 2 检验。设定 P0.05 为有统计学意义。2 结果2.1 不同病变宫颈组织中 FHIT 的表达 在正常宫颈组织中 FHIT阴性率为 0。CIN 组、 CIN组、CIN/组和宫颈癌组中 FHIT 的阴性率分别为 24.4%（11/45） 、10.0%（ 2/20） 、
13、36.0%（9/25）和 66.7%（40/60） 。运用列联表 2 检验，对各组间阴性率进行比较，差异有统计学意义(P0.05)。正常组与 CIN 组、与宫颈癌组比较，CIN组与 CIN/组间比较，差异均有统计学意义（P0.05） 。见表 1。免疫组化检测结果见图 1、2、3。 表 1 不同病变宫颈组织中 FHIT 的表达 注：*与正常组比较， P0.05；与 CIN 组比较，P0.05；与 CIN比较，P0.0562.2 不同宫颈组织中 PCNA 的表达 在正常宫颈组织、宫颈CIN 组、宫颈癌组中 PCNA 的阳性率分别是 65.0%（13/20 ） 、93.3%（42/45）和 98.3
14、%（59/60） ，运用列联表 2 检验，对各组间阳性率进行比较，差异有统计学意义(P0.05)。正常组与CIN 组、与宫颈癌组比较，差异有统计学意义(P0.05)。见表2。免疫组化检测结果见图 4、5、6 。表 2 不同宫颈组织中 PCNA的表达注：*与正常组比较，P0.052.3 FHIT 与 PCNA 表达之间的关系 在宫颈 CIN 和宫颈癌中，FHIT 表达阴性而 PCNA 表达阳性的患者为 51 例，FHIT 表达阳性而 PCNA 表达阴性的患者为 4 例。两个指标的表达同时为阳性的患者为 50 例，而两个指标的表达同时为阴性的患者为 0 例。应用配对四格表 2 检验，差异有统计学意
15、义（表 3） 。表 3 宫颈 CIN 和宫颈癌中 FHIT 与 PCNA 表达之间的关系3 讨论宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。宫颈癌有较长的癌前病变阶段，约为 10年。早期检查，尽早发现癌前病变是预防宫颈癌的最有效手段，从这个意义上来说，宫颈癌是可防可治的5 。脆性组氨酸三联体基7因（FHIT）是在染色体 3p 区域发现的候选抑癌基因，已有研究发现该基因与多种肿瘤的发生发展有关6 。增殖细胞核抗原（PCNA）是细胞增殖所必需的蛋白，肿瘤形成时表达增高，常被用于反映肿瘤细胞的增殖状态。因此，作者研究 FHIT 蛋白和PCNA 在宫颈癌前期病变和宫颈
16、癌中的表达情况，以探讨其临床意义。3.1 FHIT 与宫颈病变的关系 1996 年，Ohta 等7利用外显子捕获法，在 3p14.2 区域找到一个新的候选抑癌基因，该基因跨越人类染色体脆性部位 FRA3B 和家族性肾细胞癌基因相关的染色体交叉异位 t（3;8 ） （p14.2;424 ）断裂点，并含有编码组氨酸三联体的功能区，遂被命名脆性组氨酸三联体（FHIT） 。FHIT 基因位于3p14.2，在染色体上占据 500kb 大小的位置，含 10 个外显子，转录 1 个长 1100bp 的 mRNA 并编码 147 个氨基酸 16.8kD 的蛋白质。外显子 5 至 9 组成开放性阅读框架（open reading frame,ORF）, 编码 FHIT 蛋白质。FHIT 蛋白在肿瘤中的作用尚不完全清楚，一般认为存在以下机制：（1）调控细胞周期 8 ；（2）诱导细胞凋亡；（3） A
