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1、1高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59 表达与脂肪细胞因子的关系研究作者：刘艳英 刘永铭 杨京港【摘要 】 目的 探讨高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59的表达与脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素水平的变化及其关系。方法 高脂血症患者 50 例，年龄、性别、体重与其匹配的健康对照21 例，用流式细胞术测定外周血白细胞 CD55、CD59 的表达，用酶联免疫法测定血浆瘦素、脂联素，血清抵抗素浓度，分析CD55、CD59 和脂肪细胞因子在高脂血症中的变化及其关系。结果 高脂血症患者 CD55 阳性淋巴细胞平均荧光强度(MFI)较健康对照组下降(P0.05)，瘦素较健康对照组升高 (P
2、 0.05)，脂联素较健康对照组下降(P0.05) ；CD55 阳性淋巴细胞 MFI 与腰围、腰臀比值呈负相关(均 P0.05) ，与脂联素呈正相关(P0.05) 。结论 高脂血症患者补体调节蛋白 CD55 表达下调，可能与腹部脂肪分布、脂联素有关，脂联素可能影响补体调节蛋白 CD55 的表达。 【关键词】 高脂血症；CD55；CD59 ；脂肪细胞因子研究表明，动脉粥样硬化是一种慢性炎性病变，补体参与动脉粥样硬化的发生、发展1 。补体调节蛋白抑制补体活化保护机体组2织免受补体激活所致的损伤。脂肪细胞因子由脂肪细胞分泌，参与胰岛素信号转导、糖脂代谢，在肥胖、2 型糖尿病、脂代谢紊乱及心血管疾病中
3、发挥着重要作用2 。本研究通过观察高脂血症患者补体调节蛋白 CD55、CD59 的表达和脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素的关系，探讨高脂血症补体调节蛋白表达的可能调节机制。1 对象与方法1.1 对象 选择 2005 年 10 月至 2006 年 4 月本院门诊及住院的高脂血症患者 50 例，男 24 例，女 26 例，年龄 4087( 平均65.210.7)岁，其中高胆固醇血症 23 例，高甘油三酯血症 13 例，混合型高脂血症 14 例;正常对照组为年龄、性别、身高、体重与高脂血症组相匹配的健康人 21 例，男 11 例，女 10 例，年龄4980(平均 64.17.4)岁。入选标准:高脂血
4、症诊断标准参照我国1997 年制订的血脂异常防治建议3,血清总胆固醇 (TC)5.72 mmol/L 和(或) 甘油三酯(TG)1.70 mmol/L 作为入选条件,不同日期血脂达上述标准 2 次以上可入选。排除标准:肝肾疾病、甲状腺功能低下等引起的继发性高脂血症;有明确自身免疫性疾病者;1 个月内有严重感染、手术和外伤史;慢性感染性疾病患者;急性冠状动脉综合征患者、半年内有急性心肌梗死或脑卒中病史者;严重肝肾功能不全、恶性肿瘤患者。记录入选对象的年龄、身高、体重、腰围、臀围、血压、吸烟指数(每日吸烟支数吸烟年数)、腰/ 臀比值，计算体重3指数(BMI)。1.2 方法1.2.1 血清(血浆)的
5、采集和保存 空腹 12 h 以上，晨 8 时许取肘静脉血于真空抗凝(EDTA)或促凝试管,立即 4 离心分离血浆,2 h 内分离血清,置 -80冰箱保存,用于测定脂肪细胞因子。1.2.2 血脂检测 采用酶法，取当日所采血清，使用美国Beckman Coulter 公司 LX20 全自动生化分析仪测定。TC 采用CHODPAP 法，TG 采用 GPOPAP 法，低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC) 采用直接法。1.2.3 补体调节蛋白 CD55、CD59 的表达使用流式细胞仪测定 取空腹肘静脉血 2 ml，置含 EDTA 的真空采血器,取血后 30 min 内测定。将鼠
6、抗人 CD55PE、鼠抗人 CD59FITC 单克隆抗体及相应阴性对照各 10 l 加入标记的试管中, 每管加入 100 l 新鲜抗凝全血,振荡后室温避光反应 15 min，然后用全自动全血细胞制备仪裂解红细胞,最后用流式细胞仪检测。利用前向角散射和侧向角散射来区分单核细胞、淋巴细胞和粒细胞。荧光标记细胞平均荧光强度(MFI) 反映 CD 分子的表达强度。流式细胞仪为美国 Coulter EPICS XL 型，荧光标记单克隆抗体 CD55PE、CD59FITC 购自4美国 Caltag Laboratories 公司。1.2.4 脂肪细胞因子测定 瘦素(血浆) 、脂联素(血浆)、抵抗素(血清)
7、采用 ELISA 法测定，试剂盒均购自美国 RD 公司；血浆肿瘤坏死因子(TNF) 、血清白细胞介素6(IL6) 采用放射免疫法测定，试剂盒购自北京北方生物技术研究所。1.3 统计学处理 数据用 xs 或中位数(M)表示,组间差异用独立样本 t 检验, 指标间关系用直线相关、偏相关及多元回归分析。采用SPSS11.0 统计软件进行统计分析。2 结 果2.1 一般临床资料 高脂血症组 TC、TG、LDLC 、HDLC 、腰臀比值、收缩压均显著高于对照组(P0.05),年龄、身高、体重、体重指数、腰围、臀围、空腹血糖、吸烟指数、TNF 、IL6 两组间差异不显著(表 1)。2.2 高脂血症患者补体
8、调节蛋白 CD55、CD59 的表达 高脂血症组 CD55 阳性淋巴细胞 MFI(2.080.28)低于对照组(2.340.44),表示 CD55 表达强度减低 (P0.01);CD59 阳性淋巴细胞 MFI 高脂血症组(3.691.24)与对照组(3.770.90)间差异不显著。表 1 两组5一般临床资料2.3 高脂血症患者脂肪细胞因子水平及影响因素 高脂血症患者血浆瘦素水平高于正常对照组8.65 (0.6635.32)mg/L vs 5.91(0.22 24.33)mg/L，P0.017 ，女性高于男性；脂联素明显低于正常对照组5.42 (1.1426.33)mg/L vs 9.23(3.
9、5828.10)mg/L，P 0.015 ；抵抗素两组间差异不显著10.33(4.1921.84)ng/ml vs 10.15(5.6929.03)ng/ml，P0.904 。直线相关分析显示：瘦素与TC、TG 、LDLC 、BMI、腰围、臀围呈正相关 (r 值分别为0.257、0.242、0.304、0.441、0.439 ，均 P0.05)；脂联素与TG、体重、BMI、腰围、腰臀比值呈负相关(r 值分别为-0.456、-0.439、-0.427、-0.390 、-0.397，均 P0.01) 。2.4 补体调节蛋白 CD55 与脂肪细胞因子及临床指标的关系 CD55 阳性淋巴细胞 MFI
10、与腰围、腰臀比值呈负相关 (r=-0.272、-0.309,均 P0.05)，与脂联素呈正相关(r=0.268，P=0.024);偏相关分析，控制腰围、腰臀比值后 CD55 阳性淋巴细胞 MFI 与脂联素的关系依然存在。以 CD55 阳性淋巴细胞 MFI 为因变量，以腰围、腰臀比值、脂联素为自变量进行多元线性回归：CD55 阳性淋巴细胞MFI=3.488-1.571腰臀比值,标准化回归系数为-0.309。3 讨 论6脂肪组织是人体最大的内分泌器官，能分泌大量脂肪细胞因子，包括瘦素、脂联素、抵抗素等特异性因子和 TNF、IL6 等非特异性因子。肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征患者存在高瘦素血症和瘦素
11、抵抗，脂联素水平降低，TNF 、IL6 水平升高。血脂升高时过量生成的游离脂肪酸(FFA)使脂质过度沉积，脂肪细胞体积增大、数目增多，肝脏合成 TG 过多，极低密度脂蛋白(VLDL)生成增加、HDLC 水平下降促进动脉粥样硬化的发生。脂联素是目前最清楚和最重要的抗动脉粥样硬化、抗炎、增强胰岛素敏感性的脂肪细胞因子，抵抗素在人类胰岛素抵抗中的作用尚不肯定。TNF 通过抑制胰岛素信号转导，抑制葡萄糖的转运和摄取，加速脂肪分解使FFA 水平增加。IL6 可刺激肝脏 TG 合成。瘦素即可促进脂肪分解也可促进 FFA 氧化。脂联素则可抑制 TNF 的产生。噻唑烷二酮类药物(TZD)可上调脂联素的表达，降
12、低瘦素、抵抗素、TNF ，对 IL6 的影响不明显，进而改善胰岛素抵抗4 。Behre 等5研究发现地中海地区成人脂联素水平与年龄无关，肥胖、腹型肥胖、高甘油三酯血症及代谢综合征患者脂联素明显升高，女性高于男性。中心型肥胖老年女性血清脂联素水平低于周围型肥胖患者，IL6 水平升高，并且独立于年龄、体重指数和总脂含量6 。家族性混合性高脂血症患者血清脂联素水平下降，合并有冠心病时血清瘦素明显升高7 。高脂血症患者体重减轻后瘦素下7降，脂联素有升高趋势8 。动物实验表明，阿托伐他汀降低高胆固醇兔血清和脂肪组织瘦素含量9 。高脂血症调脂治疗同样影响脂肪细胞因子水平。Westphal 等10研究表明高
13、脂血症患者口服烟酸治疗 6 w，脂联素升高 94%，抵抗素中度降低，瘦素无明显改变。2 型糖尿病脂代谢紊乱患者服用罗格列酮降低 TG 升高HDLC 的同时亦升高血浆脂联素降低抵抗素水平 11 。本研究显示，与正常人比较，高脂血症患者血浆瘦素水平升高，与致动脉粥样硬化的血脂成分、肥胖、腹型肥胖呈正相关；脂联素水平降低，与 TG、肥胖、腹型肥胖呈显著负相关。补体调节蛋白能够抑制补体活化。CD55 抑制补体 C3、C5 转化酶的形成，防止补体活化； CD59 阻碍补体 C7、C8 与 sC5b6 的结合，抑制补体 sC5b9 的形成，防止自身组织受到补体活化的损伤。作者在最近的研究中表明，高脂血症患
14、者白细胞补体调节蛋白CD55 表达下调并与腰围、腰臀比值呈负相关，与脂联素呈正相关12，13 。高脂血症患者 CD55 表达下调，降低了机体对补体活化的抑制作用，有利于动脉粥样硬化的形成。腰围、腰臀比值反映腹部脂肪分布，代表内脏型肥胖。本研究显示，补体调节蛋白与脂肪细胞因子瘦素、脂联素、抵抗素之间仅脂联素与 CD55 的表达呈显著正相关，校正腰围、腰臀比值后两者关系仍存在，提示腹型肥胖脂联素分泌降低可能抑制 CD55 的表达，脂联素可能有上调CD55 表达的作用。脂联素抗动脉粥样硬化的作用肯定，其病理生8理学机制中是否包含了通过上调 CD55 的表达影响补体系统而减少自身组织的损伤，发挥抗动脉
15、粥样硬化作用，值得进一步研究。补体调节蛋白与肥胖、脂联素、瘦素、抵抗素等脂肪细胞因子间相互作用机制的深入研究，将有助于提高动脉粥样硬化发病机制的认识，为抗动脉粥样硬化的干预治疗提供理论依据和潜在治疗靶点。【参考文献】1 刘永铭,严 祥，刘艳英 .补体与动脉粥样硬化J.中华心血管病杂志，2005；33(9)：8669.2 李 伶，杨刚毅.脂代谢紊乱和脂肪细胞因子与胰岛素抵抗J.中国糖尿病杂志，2007；15(3)：12931.3 中华心血管病杂志编辑委员会血脂异常防治对策专题组.血脂防治建议J.中华心血管病杂志，1997；25(3)：16975.4 Fasshauer M，Paschke R.R
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