临床检验基础sop

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1、1 全血细胞分析（三分类） （ 血常规） 一，检验目的及原理 1，目的：用 BC-3000 Plus 全自动血细胞分析仪，在临床和实验室定量分析血液细胞，对人体的血液中三种有形成分（红细胞，白细胞，血小板）的 19 项参数和 3 个直方图进行分析。是人体血液的基本生理病理指标之一。 白细胞计数 WBC 淋巴细胞计数 Lymph# 中间细胞计数 Mid# 中性粒细胞计数 Gran# 淋巴细胞百分比 Lymph% 中间细胞百分比 Mid% 中性粒细胞百分比 Gran% 红细胞计数 RBC 血红蛋白 HGB 平均红细胞体积 MCV 平均红细胞血红蛋白含量 MCH 平均红细胞血红蛋白浓度 MCHC 红

2、细胞分布宽度变异系数 RDW-CV 红细胞分布宽度标准差 RDW-SD 红细胞压积 HCT 血小板计数 PLT 平均血小板体积 MPV 血小板分布宽度 PDW 血小板压积 PCT 白细胞分布直方图 WBC Histogram 红细胞分布直方图 RBC Histogram 血小板分布直方图 PLT Histogram 对患者和健康人群来讲，观察有无各种原因引起的贫血，出血和失血，目前机 体有无细菌及病毒感染，可筛查出各种血液病，如白血病，血小板减少性紫癜等。 2，原理：电阻法 测量的血样先用稀释液进行指定比例的稀释，用以测量 WBC、RBC、PLT 和 HGB 等参数。WBC 、RBC 计数池的

3、稀释标本在负压作用下，分别通过各自的计数微孔，流入管道，通过两个光电传感器，在这两个光电传感器之间的液量就是仪器分析计数的标本量。 用阻抗法测量 WBC、RBC 和 PLT 的体积分布和数目。电极插在液体中计数微孔的两边，在计数微孔的两边周围建立了一个电场环境，根据血细胞非传导性的性质，当有细胞通过计数微孔时，将引起阻抗的变化，阻抗变化的大小与细胞体积成正比。 WBC 根据体积的大小，它有多种形态，由于稀释液、溶血剂和溶血时间的不同，WBC 的体积大小会发生变化。在一定的程序控制下，显示出WBC 的三分类淋巴细胞、中间细胞（嗜酸嗜碱单核）和中性粒细胞。 被稀释的血样加入溶血剂后，红细胞溶解，释

4、放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂结合形成复合物，用波长 525nm 的单色光在 WBC 计数池内测定此化合物的透过光强，用这个透过光强与空白状态的透过光强相比较，得到血红蛋白浓度（空白状态是指 WBC 计数池中只 2 有稀释液的状态） 。 二，标本 1，标本种类：末梢血为 200-300 微升，静脉血 2 毫升。 2，采集标本容器及添加剂：容器：末梢血为一次性朔料试管，静脉血为真空采血管。添加剂：不同实验使用不同的抗凝剂，不能互相代替。血常规用 EDTA-k2 抗凝。 3，采集方法：毛细血管采集或静脉穿刺采集。采集时间：患者随到随时采集。 4，标本运送：标本采集后，应及时送检。 5，标本接受：标

5、本的编号与化验单上的编号要一致，清楚，正确及完整。 6，准备与保存：室温静置 10-15 分钟，充分混匀后上机检测。血液常规标本一般保存在室温 24 小时。 三，设备与试剂 1，设备：BC-3000 Plus 全自动血细胞分析仪。深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产。产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400522 号。 2，专用试剂： 稀释液：M-30PD，等渗溶液，具有特定的电导值，为细胞计数提供稳定的环境。作为人体血细胞计数，体积测量以及白细胞分类计数时的稀释液使用。本品应为透明液体，不得有沉淀，悬浮物和絮状物。主要成份，NaCl，Na2SO4 ，缓冲剂，抗菌剂。本品 2-3

6、0 保存期 2 年。开瓶后，使用温度 15-30，有效期 60 天。 产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400276 号。 冲洗液：M-30PR， 不含蛋白酶和次氯酸钠（NaCIO)等强蛋白清除剂的电解质溶液，用于仪器的进样孔，阀和管路系统的清洁和冲洗。本品应为透明液体，不得有沉淀，悬浮物和絮状物。主要成份，NaCl，KCl，Na2SO4，缓冲剂，抗菌剂和表面活性剂。本品 2-30保存期 2 年。开瓶后，使用温度 15-30，有效期 60 天。 产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400303 号。 无氰溶血剂： M-30PCFL，能溶解红细胞，与血红蛋白形成复合物。

7、用于白细胞计数，白细胞分群和血红蛋白测定。本品应为透明液体，不得有沉淀，悬浮物和絮状物。主要成份，NaCl，KCl，Na2SO4 ，缓冲剂，抗菌剂和表面活性剂。本品 2-30保存期 2 年。开瓶后，使用温度 15-30，有效期 60 天。 产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400274 号。 E-Z 清洗液（酶清洗液）： M-30PE，含有蛋白水解酶的电解质溶液，能有效地清除蛋白污渍，用于仪器的进样器，阀和管路系统的清洁和冲洗。本品应为透明液体，不得有沉淀，悬浮物和絮状物。主要成份，NaCl， ，缓冲剂，抗菌剂，表面活性剂，蛋白水解酶。本品 2-30保存期 2 年。开瓶后，使用温

8、度 15-30，有效期 60 天。 产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400303 号。 探头清洁液：M-30PP，本品为含有次氯酸钠的电解质溶液，用于仪器的进样器，的清洁和冲洗。主要成份，NaOH，次氯酸钠（NaCIO)，表面活性剂。本品 2-30保存期 2 年。开瓶后，使用温度 15-30，有效期 60 天。 产品注册号：粤食药监械（准）字 2005 第 2400303 号。 四，操作步骤 1, 开机前的准备： 检查试剂（稀释液，冲洗液，溶血剂）是否足量，有无浑浊变质。 试剂管路连接正常否，管道有无扭结。 并倒空废液瓶。 3 电源连接是否正常。 2，开机启动： 打开仪器主机后

9、面的电源开关。 电源指示灯燃亮，仪器内部进行初始化，进行自检。 自动冲洗内部管路，自动测量本底。 80 秒钟后进入计数界面。 3，本底检查： 出现计数界面后，仪器自动测量本底数值显示在屏幕上，本底结果要求： WBC0.3 RBC0.03 HGB1 PLT10 如果本底没有达到仪器的要求，仪器将会提示“本底异常”，请执行清洗或维护程序。 4，室内质控操作： 5，全血测量： 在计数界面下，按模式 键，将模式设置为“ 全血 ”。 用 K2EDTA 抗凝剂作抗凝血标本。 混匀抗凝血后，送到采样针下，让采样针插入抗凝血。 按开始键，开始对样本计数。 58 秒后测试结果显示在屏幕上。 按“ 打印”键，结果

10、打印出来。 6，末梢血测量： 在计数界面下，按模式键，将模式设置为“预稀释” 。 按 “稀释液” ，按开始键，用试管从采样针下取 0.7ml 稀释液。 将毛细血管采取的 20 l 末梢血标本，迅速注入盛有 0.7ml 的稀释液的试管中，制成稀释血样（注意针刺得要深，用不起毛的纸巾拭去第一滴血） 制好的稀释血样要摇匀（注意不要剧烈震荡，否则有可能会因产生微小气泡导致计数值不准） 将预稀释血样放置 3 分钟后，再次摇匀，放于采样针下，按开始键计数。 58 秒后测试结果显示在屏幕上。 按“打印”键，结果打印出来。 7，关机： 每天测试完毕一定要用 E-Z 清洗液执行“关机” 程序，等待屏幕提示“关闭

11、电源”后关掉主机电源。 五，质控程序 为保证分析数据的可靠，建议对 BC-3000 Plus 系统进行每日室内质控。操作者只有熟悉质控的理论并掌握实际操作方法，才能有效地检测影响分析结果的误差，进而加以消除。 分析仪共提供九个质控文件，以便操作者保存质控参数和结果。每个质控文件可自动保存最多 31 组质控结果。当质控运行次数大于 31 时，新的质控结果将从头开始覆盖旧的结果。 1，室内质控物特性及说明 质控物名称：BC-12 质控物 生产厂家：Bio-Rad Laboratories, Inc. 质控品水平：低、中、高三个水平 保存条件及稳定性: 未开封，在 28C 的环境下，质控物在保质期内

12、将保持稳定。开封后，盖紧瓶盖保存在28C 的环境下，质控物在 21 天内保持稳定。 2，室内质控的项目 WBC、RBC 、HGB、HCT、 MCV、MCH、MCHC、PLT、Lymph# 、Lymph% 、Gran# 、 4 Gran% 3，室内质控品的正确使用和保存 每个工作日进行一次质控测定，包括二个不同浓度水平的质控物。 使用时，轻轻旋动，使其混匀。测定完成后，迅速将质控液小瓶再次密封贮存于 2C8C。 质控品必须由常规操作人员，按常规检测标本操作程序进行检测。 4, 室内质控的实际操作（室内质控图控制限的设定） 在开始室内质控时，首先要设定室内质控图的中心线（均值） 。均值必须在实验室

13、内使用自己现行的测定方法进行确定。定值质控物的靶值只能做为确定中心线的参考。控制限通常以标准差的倍数表示。 新批号的质控物应与当前使用的质控物一起进行测定。根据 3-4 天内获得的至少 20 次质控测定结果，对数据进行离群值检验（剔除超过 3s 外的数据） ，计算出平均数，作为暂定的中心线（均值） 。控制限（标准差）由均值乘以实验室该仪器检测相近水平质控物的RCV 确定。 以此暂定的中心线（均值）和控制限（标准差）作为新批号质控物室内质控图的中心线和控制限进行室内质控；一个月结束后，将该月的在控结果与前 20 个质控测定结果汇集在一起，计算累积平均数和标准差（第一个月） ，以此累积的平均数和标

14、准差做为下一个月质控图的中心线（均值）和控制限（标准差） 。 更换质控物 准备更换新批号的质控物时，应在旧 批号质控物使用完之前，将新批号的质控品与 旧 批号质控品同时测定，重复上述的过程，建立新的质控图的中心线和控制限。 绘制质控图及记录质控结果 1）据质控物的均值和控制限绘制 Levey-Jennings 质控图（单一浓度水平） ，须分别绘制不同浓度水平的质控图。 2）对每一质控物，Y 轴为浓度单位，提供 x-4s 到x+4s 浓度范围，X 轴为按次序记录的分析日期。画出的水平线相当于 x、x+2s、x+3s。 3）每个工作日将原始质控结果记录在质控图表上。保留打印的原始质控数据。 4）每

15、台仪器必须分别进行室内质控，确定各自的室内质控图的中心线（均值）控制限（标准差） ，绘制质控图并保留打印的原始质控数据。 5，质控编辑： 按菜单 键，弹出系统菜单。 选择“质控”“L-J 质控” “质控编辑”“文件 1”。 按 确认键，进入质控编辑界面。 输入批号，有效期，参数，参考值，偏差限。 按菜单 键，退出质控编辑界面。 6，质控计数： 按菜单键，弹出系统菜单。 选择 “质控”“L-J 质控” “ 质控计数”“文件 1”。 按确认键，进入质控计数界面。 按菜单键，退出质控计数界面。 从冰箱取出质控物试管，放置 15-30 分钟，使之恢复至室温。 用手掌上下左右前后转动摇匀 10 秒，上下翻滚摇匀 5 次。保证质控物完全处于悬浮状态。 5 选择血样测试模式“全血/预稀释。 将质控液插入采样针下，按开始键，启动计数。 58 秒后测试结果显示在屏幕上。 7，质控图回顾： 按 菜单 键，弹出系统菜单。 选择“质控”“L-J 质控” “质控图回顾”“文件 1”。 按确认 键，进入质控图界面。 使用 键移动光标，切换显示参数。 使用 键移动光标，对质控数据结果逐个浏览，每个点对应的值，显示在名称的下方。光标所在列的位置显示在“序号”栏，保存的时间显示在“时间” 栏。 按菜单键，退出该界面。 8，失控处理： 失控情况处理： 操作人员发现失控后，应