《（新编）酶工程重点》由会员分享，可在线阅读，更多相关《（新编）酶工程重点（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、题型：填空 10 分名词解释 20 分（每个 2 分，翻译 1 分解释 1 分）判断 10 分问答 60 分（每个 10 分，注意要有论点跟论述举例）1 氧化还原酶（oxidoreductases）：催化氧化还原反应的酶 P122.转移酶（transferases ）：催化某基 团从供体化合物 转移到受体化合物上的酶3.自我剪切酶（self-cleavage ribozyme）:催化本身 RNA 进行剪切反应的 R 酶 P144.自我剪接酶（self-splicing ribozyme）:在一定条件下催化本身 RNA 分子同时进行剪切和连接的 R 酶 P155.组成型酶（constitutiv
2、e enzyme）:在细胞中的含量比较恒定，环境因素对其合成速率影响不大的酶，如 DNA 聚合酶， RNA 聚合酶，糖酵解途径的各种酶等 P316.适应型酶（adaptive enzyme）或称调节型酶(regulated enzyme)：在细胞中含量变化很大，合成速率明显受环境因素影响的酶 P317.阻遏物（repressor ）：引起反 馈阻遏作用的物质 P348.端粒（telomere）:真核生物染色体的末端结构，是由富含 G 和 T 的 DNA 简单重复序列不断重复而成 P659端粒酶（telomerase）:催化端粒合成和延 长的酶 P6510.增强子（modulator）：又称为调
3、变子，是一段能高效增强或促进基因转录的DNA 序列 P6611.抗体酶（abzyme）:又称为催化性抗体，是一类具有生物催化功能的抗体分子P6712.原生质体（protoplast）:除去细胞壁后得到的微球体 P7213.刺激剂（elector ）:可以促使植物细胞中的物质代谢朝着生成某些次级代谢物的方向进行，从而强化次级代谢物的生物合成，提高某些次级代谢物的主率的一种刺激物质 P7614.层析聚集（chromatofocusing）: 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起，实现组分分离的层析技术 P11715.定点突变（site directed mutagenesis）
4、:在 DNA 序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术 P14816.PCR 技术(polymer rase chain reaction),即聚合酶链反应技术，是在 DNA 聚合酶的作用下进行体外 DNA 扩增的一种分子生物学技术， 该技术的基本过程包括双链 DNA 的热变性（解链），引物与 单链 DNA 的退火结合，引物的延伸 3 个步骤 P14917.酶的固定化（enzyme immobilization）:采用各种方法，将酶固定在水不溶性的载体上，制备成固定化酶的过程 P15918.固定化酶（immobilized enzyme）:固定在载体上并在一定的空间范围内
5、进行催化反应的酶19 必需水（essential water）:维持酶分子完整的空间构象所必需的最低水量 P18520.水活度（water activity）:是指体系中水的逸度与纯水逸度之比。P18621.酶的对映体选择性（enantioselectivity）:：又称为立体选择性或立体异构专一性，是酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力大小的指标。P18922.酶的区域选择性（regioselectivity）:酶能够选择底物分子中某一区域的基团优先进行反应。P18923.PH 印记（PH-imprinting):又称 PH 记忆，在有机介质反应中，酶所处的 PH 环境与酶在冻干或吸
6、附到载体上之前所使用的缓冲液 PH 相同的现象。P19124.定向进化（directed evolution）:模拟自然进化的过程，进行人工随机突变，并在特定的环境条件下进行选择，使进化朝着人们所需要的方向发展的技术过程P20525.易错 PCR：从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下 进行聚合酶链反应（PCR），使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程 （了解）。P20826.流化床反应器（fluidized bed reactor,FBR）：通过流体的流动使固定化酶颗粒在悬浮翻动状态下进行催化反应的一类反应器，是一种适用于固定化酶进行连续催化反应的反应器。P2272
7、7.聚丙烯酰胺凝胶电泳按其凝胶组成系统的不同，可以分为连续凝胶电泳、不连续凝胶电泳、浓度梯度凝胶电泳和 SDS 凝胶电泳 P12228.酶的非水相催化的主要内容包括有机介质中的酶催化、气相介质中的酶催化、超临界流体介质中的酶催化和离子液介质中的酶的催化等 P18229.影响酶催化作用的因素有：底物浓度、酶浓度、温度、 pH、激活剂浓度、抑制剂浓度底物浓度：决定酶催化反应的主要因素，在底物浓度较低的情况下，酶催化反应速度与底物浓度成正比，反应速度随着底物浓度的增加而升高；当底物浓度达到一定的数值时，反应速度的上升的速度不再与底物浓度成正比，而是逐步趋向平衡；有些酶在底物浓度过高时，反应速度反而下
8、降，这是由于高浓度底物引起的抑制作用酶浓度的影响：在底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度成正比抑制剂的影响：能够使酶的催化活性降低或者丧失的物质称为酶的抑制剂，可分为可逆性抑制剂和不可逆性抑制剂.酶的可逆性抑制作用可分为竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制.竞争性抑制是指抑制剂和抵物竞争与酶分子结合而引起的抑制作用，竞争性抑制的效果强弱与竞争性抑制剂的浓度、底物浓度、抑制剂和底物与酶的亲和力大小有关，特点是酶催化反应的最大反应速度 Vm 不变，而米氏常数 Km 增大。非竞争性抑制剂是指抑制剂与底物分别与酶分子上的不同位点结合而引起酶活性降低的抑制作用。特点是 Vm 减小，Km 不变
9、.反竞争性抑制剂是指在底物与分子结合生成中间复合物后，抑制剂再与中间复合物结合而引起的抑制作用，特点是 Vm 和 Km 同时减小激活剂的影响：能够加酶的催化活性或使酶的催化活性显示出来的物质称为激活剂或活化剂，有 Ca2+，Mg2+,Co2+,Zn2+,Mn2+,cl-等30.酶生物合成的模式有：a.同步合成型（酶的生物合成与细胞生长同步进行的一种酶生物合成模式，如米曲霉在含有单宁或者没食子酸的培养基中生长，在单宁或没食子酸的诱导作用下，合成单宁酶或称为鞣酸酶）；b,延续合成型（酶的生物合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后酶还可以延续合成一段较长时间的一种酶生物合成模式，属于该类型
10、的酶可以是组成酶也可以是诱导酶，延续合成型的酶其生物合成可以受诱导物的诱导，一般不受分解代谢物阻遏，该类酶对应的 mRNA 相当 稳定，在细胞生长达到平衡期以后，仍然可以延续合成）；c.中期合成型 （中期合成型 酶在细胞生长一段时间以后才开始，而在 细胞生长进入平衡期以后，酶的生物合成也随之停止，该酶具有的共同特点是酶的生物合成受到产物的反馈阻遏作用或分解代谢物作用，而酶所对应的 mRNA 稳定性较差）；d.滞后合成型 （滞后合成型 酶是在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累，又称为非生长偶联型，许多水解酶的生物合成都是属于这一类型，这类酶由于要受到培养基中存在的阻遏物
11、的阻遏作用，要在细胞生长一段时间甚至进入平衡期以后才开始合成，随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成）P353831.（溶解氧的调节控制）调节溶解氧的方法主要有哪几种方法？P49（1）到（5）32.抗体酶的制备方法主要有：诱导法，修饰法等（修饰法是对抗体进行分子修饰，在抗体与抗原的结合部引进催化基团而成为抗体酶的方法；诱导法是利用特定的抗原诱导抗体酶合成的方法，是抗体酶制备的主要方法，根据采用的抗原不同，诱导法有半诱导法和酶蛋白诱导法）P6733. 植物细胞与动物细胞及微生物细胞之间的特性主要差异有哪些？P69 （1）到（6）34 动物细胞与植物细胞和微生物细胞比
12、较具有哪些特性？P78 （1）到（4）35.动物细胞培养具有哪些显著特点？P78 （1）到（7）36.细胞破碎 P85-88细胞破碎是通过各种方法使细胞外层结构破坏的技术过程细胞破碎的分类、破碎方法、破碎原理及举例如下：a. 机械破碎法：通过机械运动所产生的剪切力的作用，使细胞破碎的方法分为捣碎法、研磨法、匀浆法原理：通过机械运动产生的剪切力，使组织、 细胞破碎举例：捣碎法常用于动物内脏、植物叶芽等比较脆嫩的组织细胞，也可以用于微生物，特别是细菌的细胞破碎研磨法常用于微生物和植物组织细胞的破碎匀浆法常用于破碎那些易于分散、比较柔软、 颗粒细小的组织细胞 b. 物理破碎法：通过温度、压力、声波等
13、各种物理因素的作用使组织细胞破碎的方法分为温度差破碎法、压力差破碎法、超声波破碎法等原理：通过各种物理因素的作用，使组织、 细胞的外层结构破坏，而使 细胞破碎举例：温度差破碎法对于那些较为脆弱、易于破碎的细胞如革兰氏阴性菌等有较好的破碎效果压力差破碎法常用的有高压冲击法、突然降压法用渗透压变化法，突然降压法对大肠杆菌等革兰氏阴性菌的破碎效果较佳，最好使用对数生长期的细胞；渗透压变化法特别适用于膜结合酶、细胞间质酶等的提取，但是对革兰氏阳性菌不适用；超声波破碎法适用于微生物细胞的破碎，最好采用对数生长期的细胞进行破碎c. 化学破碎法：通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎的方法可以添加有机
14、溶剂、表面活性剂原理：通过各种化学试剂对细胞膜的作用，从而使细胞破碎有机溶剂可以使细胞膜的磷脂结构破坏，从而改变细胞膜的透过性，使胞内酶等细胞内物质释放到细胞外d.酶促破碎法：通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎的方法有自溶法、外加酶制课剂法原理：通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，从而达到细胞破碎37.为什么 SDS 凝胶电泳会不受蛋白质分子所带电荷用分子形状的影响？答：在蛋白质溶液中加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原；SDS 能使蛋白质分子的氢键、疏水键打开，并与蛋白质分子结合，形成蛋白
15、质-SDS 复合物，在一定的条件下，1.4gSDS 与 1g 蛋白质结合，由于 SDS 带负电荷，使各种蛋白质-SDS 复合物带上相同密度的负电荷，而掩盖了不同蛋白质之间原来电荷的差别。此外，SDS 与蛋白质结合后，引起蛋白质构象的变化，在水溶液中都变成椭圆形，椭圆的短轴长度均为 18 埃左右，长轴的长度则与蛋白质的相对分子质量成正比。为此，蛋白 质-SDS 复合物在凝胶电泳在的迁移率不再受蛋白质原有的电荷及分子形状的影响，而只决定于蛋白质的相对分子质量。38.金属离子置换修饰的作用 P137-138a.阐明金属离子对酶催化作用的影响通过金属离子置换修饰，可以了解各种金属离子在酶催化过程中的作
16、用，阐明金属离子对酶催化作用的影响，从而有利于阐明酶的催化作用机制b.提高酶的催化效率如-淀粉酶分子中大多数含有钙离子，有些 则含有镁离子或锌离子等其它离子，所以一般的-淀粉酶是杂离子型的，如果将其他 杂离子都换成钙离子，则可以提高酶的催化效率并显著增强酶的稳定性c.增强酶的稳 定性如铁型超氧化物歧化酶分子中的铁离子被锰离子置换，成为锰型超氧化物歧酶后，其对过氧化氢的稳定性显著增强， 对叠氮钠的敏感性显著降低d.改变酶的动 力学特性如酰基化氨基酸水解酶的活性中心含有锌离子，用钴离子置换后，其催化 N-氯-乙酰丙氨酸水解的最适 PH 从 8.5 降到 7.0，同 时该酶对 N-氯-乙酰蛋氨酸的米氏常数增大，亲和力降低39.大分子结合修饰的作用 P140-141a.通过修饰提高酶的催化效率如每分子核糖酸酶与 6.5 分子的右旋糖酐结合，可以使酶的催化效率提高到原有酶的 2.25 倍b.通过修饰可以增 强酶的 稳定性可以与酶结合的大分子有水溶性和水不溶性两类。用不溶于水的大分子与酶结合制成固定化酶
