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1、1牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用作者：周添浓，刘丹丹，唐立海，王艳，刘亮锋，赖平，肖细姬，叶木荣 【摘要 】 目的研究牛大力对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用四氯化碳腹腔注射、56 度红星二锅头酒灌胃诱导小鼠急性肝损伤模型,观察牛大力对小鼠血清 AST，ALT 活性及肝组织匀浆MDA 含量、肝脏指数、胸腺指数的影响。结果牛大力能降低模型小鼠血清中 AST，ALT 活性，减少肝匀浆 MDA 含量，降低肝脏指数，提高胸腺指数。结论牛大力有保肝的作用。 【关键词】 牛大力 急性肝损伤 四氯化碳Abstract：ObjectiveTo investigate the protec
2、tive effect of Radix millettiae Speciosae on acute liver injury in mice.MethodsThe model of acute hepatic damage were induced by ip CCl4 and ig 56 star Er guotou wine. The AST, AST levels in serum and MDA content in liver homogenate were observed.ResultsRadix Millettiae Speciosae could 2decrease the
3、 AST and ALT activities in serum, MDA content in liver homogenate and the liver index，increase the thymus gland index.ConclusionRadix millettiae Speciosae has protective action on acute liver injury in mice.Key words： Radix millettiae Speciosae； Acute liver injury； CCl4牛大力 Radix Millettiae Speciosae
4、，考证于陆川本草 ，又名猪脚笠、山莲藕，为蝶形花科植物美丽崖豆藤 Milletia speciosa Champ 的干燥根。性味甘，平，功能补脾益气、强筋活络、清热解毒润肺。民间常用于治疗慢性支气管炎，慢性肝炎、咳嗽等。本文通过观察牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保肝作用，为该药临床用药提供依据。现报道如下。1 材料与仪器1.1 受试动物 SPF 级 KM 小鼠, 由广州中医药大学实验动物中心提供。合格证号：SCXK 粤 2003-0001。1.2 受试药物牛大力，购于广州致信中药饮片有限公司，批号 070701。药物制备：取牛大力干燥药材，用 10 倍体积的蒸馏水3浸泡 1 h，加
5、热煮沸 2 h，趁热过滤；残渣再加 6 倍体积的蒸馏水，加热煮沸 1 h，合并两次滤液，浓缩至 1 g 生药ml-1 浓度备用，用时加蒸馏水稀释至所需浓度。1.3 药品与试剂四氯化碳（CCl4） ，广东光华化学厂有限公司，批号 20041030；联苯双酯滴丸，北京协和药厂产品，批号06040204；谷丙转氨酶（ALT） 、谷草转氨酶（AST）试剂盒，丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号：20080419，20080419，20080417 。1.4 仪器 UNICO7200 光栅分光光度计，尤尼柯上海仪器有限公司；WPA Biowave紫外分光光度计；LDZ5 型离心机，北
6、京医用离心机厂；Anke TGL-16G 高速离心机，上海安亭科学仪器厂；隔水式电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂。2 方法2.1 牛大力对 CCl4 所致小鼠急性肝损伤的保护作用2.1.1 动物分组及给药 取 KM 小鼠 84 只，18 22 g，适应性喂养 3 d 后，随机分为 6 组，分别是空白对照组，模型对照组，阳性对照组，牛大力高（20 gkg-1d-1） 、中（10 gkg-1d-1） 、低剂量（5 gkg-1d-1）给药组，每组 14 只。阳性对照组给予联苯双酯，给药剂量为 45 mgkg-1d-1，空白对照组和模型对照组给予4等容积蒸馏水，灌胃给药 1 次/d，连续 12 d。
7、2.1.2 CCl4 诱导小鼠急性肝损伤动物模型的建立1 各组小鼠于末次给药后 1h，除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外，其余各组各鼠均腹腔注射 0.1%CCl4 花生油溶液 10 mlkg-1。小鼠腹腔注射 CCl4 后，禁食不禁水 16 h，眼眶静脉取血，3 000 rmin-1离心 10 min 分离血清, 取血清测定相关指标，同时处死小鼠，取肝脏、脾脏、胸腺并称其体重；取部分肝组织作相关检测。2.1.3 检测项目血清按试剂盒所述方法测谷草转氨酶(AST) 、谷丙转氨酶(ALT)；按肝脏重量/ 体重 (g100 g-1 )，脾脏重量/体重 (mgg-1 )，胸腺重量/体重(mgg-1 )
8、，分别计算肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数；并切取 0.3 g 肝脏加 3 ml 生理盐水肝脏：生理盐水的比例为1:10（M/V） 制成 100 g/L 匀浆，按试剂盒说明操作，采用硫代巴比妥酸比色法测定 MDA 含量。2.2 牛大力对小鼠急性酒精中毒肝损伤的保护作用2.2.1 动物分组及给药5取 KM 小鼠 72 只，1822 g，雌雄各半，随机分为 6 组，分别是空白对照组，模型对照组，阳性对照组，牛大力高（20 gkg-1d-1） 、中（10 gkg-1d-1） 、低剂量（5 gkg-1d-1）给药组，每组 12 只。阳性对照组给予联苯双酯，给药剂量为 60 mgkg-1d-1，空白对照组和
9、模型对照组给予等容积蒸馏水，灌胃给药 1 次/d，连续 12 d。2.2.2 小鼠急性酒精中毒肝损伤动物模型的建立2各组小鼠于末次给药后 1 h，除空白对照组腹腔注射等量生理盐水外，均以 15 mlkg-1 体重 56 度二锅头酒灌胃 4，5 ,6 h 后 ,再次给药，12 h 后眼眶静脉采血，3 000 rmin-1 离心 10 min分离血清，测定生化指标；同时处死小鼠，取肝脏、脾脏、胸腺并称其体重；取部分肝组织作相关检测。2.2.3 检测项目血清按试剂盒所述方法测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)；按照肝脏重量/体重 (g100 g-1 )，脾脏重量/ 体重 (mgg-1 )，
10、胸腺重量/ 体重(mgg-1 )，分别计算肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数；并切取 0.3 g 肝脏加 3 ml 生理盐水肝脏 生理盐水的比例为 110 m/V制成 100 g/L 匀浆，按试剂盒说明操作，采用硫6代巴比妥酸比色法测定 MDA 含量。2.2.4 统计学方法采用 SPSS 115 统计软件进行分析。用单因素方差分析进行统计学显著性分析。组间差异显著性采用单因素方差分析中的 LSD 方法进行多重比较检验。3 结果3.1 牛大力对 CCl4 所致小鼠急性肝损伤的保护作用3.1.1 对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响 与空白对照组比较,模型对照组小鼠血清 AS
11、T,ALT 水平明显升高, 有显著的统计学差异（P0.01 ） ，说明 CCl4 致急性肝损伤模型建立成功；阳性对照药联苯双酯显著降低 AST,ALT 水平（P0.01 ） ，牛大力各剂量组均能降低血清中 AST,ALT 的水平；与模型对照组比较，牛大力高剂量能明显降低 AST 水平（P0.01 ） ，效果优于中、低剂量；牛大力高、中、低剂量均明显降低 ALT 水平（P0.01或 P0.05） 。提示牛大力水提液有保肝作用，能对抗 CCl4 致小鼠急性肝损伤导致的 AST,ALT 水平的升高。结果见表 1。表 1 牛大力对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响（略）3.
12、1.2 牛大力对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠肝组织 MDA 含量7的影响与空白对照组比较，模型对照组小鼠肝组织匀浆的 MDA 水平明显升高，有显著的统计学差异（P0.01） ，表明造模成功；与模型对照组比较，连续给药 12 d 后，45 mgkg-1 剂量的阳性药联苯双酯能显著降低小鼠的 MDA 水平（P0.01 ） ；牛大力高、中、低剂量组均能明显降低 MDA 水平（P0.01 或 P0.05） ，低剂量组效果较高、中剂量好。提示牛大力水提液有抗肝细胞脂质过氧化的作用，能对抗 CCl4 所致的急性肝损伤。结果见表 2。表 2 牛大力对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠肝组织 MDA 含量的影响
13、（略）3.1.3 牛大力对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠脏器指数的影响 模型组小鼠肝脏指数明显高于正常对照组（P0.05） ，胸腺指数低于正常组（P0.05） ，说明 CCl4 会使小鼠肝脏和脾脏肿大，胸腺萎缩，使肝脏、脾脏指数增大，胸腺指数减少；与模型组比较，牛大力各剂量组均能减小肝脏、脾脏指数，增加胸腺指数；其中低剂量明显减小肝脏指数（P0.05 ） ，效果明显于高、中剂量；中剂量明显增大胸腺指数，有显著差异性（P0.05） 。说明牛大力水提液能抑制 CCl4 所致的肝脏、脾脏肿大和胸腺萎缩。结果见表 3。表 3 牛大力对 CCl4 所致急性肝损伤小鼠脏器指数的8影响（略）3.2 牛大力对
14、小鼠急性酒精中毒肝损伤的保护作用3.2.1 牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响 与空白对照组比较,模型组小鼠血清 ALT,AST 水平明显升高（P0.01）,说明急性酒精中毒肝损伤模型建立成功；与模型对照组比较，阳性药联苯双酯显著降低血清中 AST，ALT 的水平；牛大力各剂量均能降低血清中 AST，ALT 的水平,高、中剂量可明显降低AST 的水平（P0.05） ；牛大力高剂量可明显降低 ALT 的水平（P0.01） ，效果明显于中、低剂量。提示牛大力水提液有保肝作用，能对抗急性酒精中毒肝损伤导致的 ALT,AST 水平的升高。结果见表 4。表 4 牛大力对急性酒
15、精中毒肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响（略）3.2.2 牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠肝组织 MDA 含量的影响 与空白对照组比较，模型对照组小鼠肝组织匀浆的 MDA 水平明显升高(P0.01)，表明造模建立成功；与模型对照组比较，连续给药 12 d 后，60 mgkg-1 剂量的阳性药联苯双酯能显著降低小鼠的 MDA 水平(P0.01)；牛大力高、中、低剂量组均可显著降低肝组织 MDA 水平。提示牛大力水提液有抗肝细胞脂质过氧化的作用，能对抗急性酒精中毒所致的肝损伤。结果见表 5。表 5 牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠肝组织 MDA 含量的影响（略）93.2.3 牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠脏器指数的影响 模型组小鼠肝脏、脾脏指数高于正常对照组，肝脏指数增大明显（P0.01） ，胸腺指数低于正常对照组，有统计学差异（P0.05） ，说明酒精中毒能使小鼠肝脏和脾脏肿大，胸腺萎缩；与模型对照组比较，牛大力高、中、低剂量组均能抑制肝脏肿大，胸腺萎缩，但对脾脏影响不明显；牛大力高剂量组效果明显，肝脏指数减小，胸腺指数增大，有显著差异性（P0.01 或P0.05） 。结果见表 6。表 6 牛大力对急性酒精中毒肝损伤小鼠脏器指数的影响（略）4 讨论肝脏在各类物质的代谢中起重要作用，亦是容易生成自由基及过氧化脂质的场
