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1、1测定四藤片中绿原酸含量的测定【摘要】 目的采用高效液相色谱法测定四藤片中绿原酸的含量,以控制该制剂的质量。方法精密称定不同批次的四藤片，经超声提取、过滤，用高效液相色谱测定。结果绿原酸在 6.8434.2 gml-1 内呈良好的线性关系 r=0.999 9，平均加样回收率为101.2%(RSD 为 1.5%,n=9)。结论该法测定四藤片中绿原酸的含量,结果准确,重复性好。 【关键词】 四藤片； 绿原酸； 高效液相色谱法四藤片是根据中医理论和长期临床经验,经反复筛选验证总结出的具有祛风利湿、消炎镇痛等作用的中成药。临床上用于治疗风湿性关节炎。该药由忍冬藤、异型南五味子、春根藤、石蒲藤等中药组成
2、。忍冬藤为该制剂的君药，绿原酸是忍冬藤的主要成分。四藤片标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册1 ，标准中没有定性分析及含量测定方法,不能有效地控制药品质量。对该制剂的研究文献报道极少，对其含量测定未见文献报道。笔者参考有关文献2，3资料，采用高效液相色谱法对四藤片中绿原酸进行了含量测定，为控制四藤片的内在质量提供依据。21 仪器、药品与试剂smartline 1000 高效液相色谱仪（德国诺尔）;四藤片(汕头制药厂 061012、060818、061025) ；绿原酸对照品(中国生物制品检定所提供，批号:0753-9910)；甲醇为色谱纯 , 水为双蒸水，其余均为分析纯。2 方法与结果
3、2.1 色谱条件色谱柱 :Kromosil C18(4.6 mm200 mm),天津奥特公司;流动相为甲醇：0.3% 磷酸(25：75)；流速 1.0 mlmin-1；柱温: 室温；检测波长 324 nm；进样量 20 l。2.2 对照品溶液、供试品溶液与阴性对照液的制备2.2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品 3.42 mg，置于 50 ml 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成 68.4gml-1 的标准溶液。取 3.0 ml 置 10 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。2.2.2 供试品溶液的制备取四藤片 20 片，精密称定，研细，精密称取细粉 1.0 g
4、，置入 50 ml 量瓶中，加 50 ml 甲醇超声 30 3min，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤液用 0.45 m 微孔滤膜过滤，即为供试品溶液。2.2.3 阴性对照液的制备取按处方量除去忍冬藤的阴性样品0.4g,同法制成阴性供试品溶液。2.3 系统适用性实验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液 20 l 注入色谱仪,记录色谱图,见图 1，阴性对照色谱图在绿原酸峰位置无色谱峰,表明其它组分对测定无干扰。绿原酸峰与相邻组分峰的分离度为 6.6,理论塔板数以绿原酸峰计算为 6 520。2.4 线性关系考察分别精密量取对照品溶液1，2.0，3.0，4.0，5.0 ml 置 10
5、ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取 20 l，注入 HPLC，记录色谱图，分别进样，依法测定, 得回归方程：Y=-610.43+51 204.7X， r=0.999 9。绿原酸在 6.8434.2 gml-1 之间呈良好的线性。2.5 精密度实验取上述对照品溶液 19.72gml-1 连续进样5 次，记录色谱图量取峰面积：其峰面积平均值为 1 016 135， RSD=0.16%。2.6 稳定性实验取上述供试品溶液分别于 0，1，6，12，24 h 取 20 l，注入 HPLC，记录色谱图，结果表明该样品在 24 h 内4稳定。峰面积平均值为 102 8437,RSD=0.39%
6、。2.7 回收率实验采用加样回收法,取已知含量批号为 061012的样品适量,精密称定, 再准确加入绿原酸对照品适量,依法操作, 计算。结果见表 1。表 1 回收率测定结果（略）2.8 重复性实验取同一四藤片样品 5 份,按供试液制备方法制备, 分别依法测定，测得绿原酸含量的 RSD 为 1.9%(n=5),表明本法重复性好。2.9 样品测定取对照品溶液 1 972 gml-1 和样品溶液用0.45 m 微孔滤膜滤过, 各进样 20 l,读取峰面积值,按外标法计算含量。结果见表 2。表 2 样品测定结果（略）3 小结笔者采用两种不同提取方法对样品中提取完全进行了比较，结果表明该提取方法简便快速，测定结果基本稳定，说明本文采用的提取方法是合适的。文献报道2绿原酸有两个最大吸收波长，经过实验测定在324nm 处，绿原酸的吸收强度最大。因此选择 324nm 为测定波长。5【参考文献】1中华人民共和国卫生部药政局.中药成方制剂，第十三册S.WS3-B-1909.2陶君彦, 张晓昱 .HPLC 法同时测定木瓜中绿原酸、咖啡酸的含量J.中国药房 2007,18(12) ：912.3苟占平.HPLC 测 6 种忍冬藤中绿原酸的含量J.中成药 2006，28 （3）：408.
