《（新编）微生物综合实验设计方案(1)2》由会员分享，可在线阅读，更多相关《（新编）微生物综合实验设计方案(1)2（156页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、微生物综合实验设计方案第八小组（曹婉仪 蔡楚萍 贝锦涛 张韵红）1、取样取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶，于华师校园内湖中取水样。分别选取三个取样点（韵红：取样点需要再精确到确切地点吧，如：取样点 1：取样点2：取样点 3：还有取样点选取的依据是不是也要交代） ，分别编号 1.2.3，于水面以下 10cm，取水各 100mL，盖好瓶塞。器具：三角瓶*3 个二、测水体 pH值为了大致地确定水体微生物的生长适宜 pH（个人感觉这说法有点奇怪，好像暗示测出来的 pH就是适宜生长的 pH似的，至少改为：为了了解华师湖水的pH吧，或者改为其他更好的说法） ，取好水样后，分别用 pH计测量三个水样的值，每个水
2、样各测量三次，取平均值。将三个水样混合均匀，得到混合水样，用 pH计测量 pH三次，取平均值。器具：pH 计3、分离提纯 2种微生物1、材料：混合水样2、方法操作名称 具体步骤 试剂和材料 器具（经高压蒸汽灭菌）配置牛肉膏蛋白胨固体培养基 400mL1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL，分装于两个三角瓶2、高压蒸汽灭菌（灭菌材料：250ml 三角瓶*5，培养皿*？，试管*11，1ml 移液管*5,10mll量筒*1）3、倒 10个平板 2支试管斜面（按原来写的也要 13个平板，怎么会是 10个，而且还没有设置对照的平板；如果要作10000，还要更多平板。我觉得做 1520个平板比较好。斜面
3、是不是做 4个比较好啊）NaCl 2g蛋白胨 4g牛肉膏 1.2g 400mL水1mol/LNaOH1mol/L HCI(pH77.6)高压蒸汽灭菌锅天平玻璃棒500ml大烧杯*1个250ml三角瓶*2个封口膜*2 张绳子*2 条培养皿*？套（数目有待确定，看倒多少个平板）试管*4 个胶塞/棉塞*4个报纸多张稀释涂布分离细菌（微生物吧，这里还不是细菌）1、取 0.2ml混合水样进行稀释，设置四个梯度：原液、10、100、1000，分别装于4个试管中，标明稀释度，每种稀释度 5ml（万一微生物太多，可能需要10000，我觉得多做一个比较保险）2、涂布四个平板（八?需要每个稀释度做两个平板吗？万一
4、污染怎么办？）3、37恒温培养箱中倒置培养 24h混合水样蒸馏水空白平板*4 个（用于涂布分离，若做10000，则为5个）恒温培养箱1ml移液管*5个10ml量筒试管*4 个（若做10000，则为 5个）酒精灯酒精棉球涂布器标签纸平板划线分离细菌（不一定是细菌吧）1、选取稀释涂布平板操作中分离程度较好的两种微生物的（一种是细菌，另一种是要做什么微生物啊？）平板菌落（要说明是否要来自同一稀释度吧） ，进行平板划线，各划线 2个平板2、37恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）涂布分离的平板空白平板*4 个恒温培养箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸平板划线分离细
5、菌（不一定是细菌吧）1、两种微生物均选取划线操作效果好的菌落，进行第二次平板划线操作，各划线 2个平板2、 37恒温培养箱中倒置培养24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）第一次划线分离的不同菌种的平板*2 个空白平板*4 个恒温培养箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸平板菌种接种到试管保藏1、用接种环把菌种接种到试管斜面，每个菌种接种 2个斜面2、37恒温培养箱中培养 24h（若另一种微生物不是细菌，可能就要改一下培养时间吧？）3、待菌种在固体斜面培养基上生长丰满后，注明菌类或菌种名、保藏日期、保藏人，然后置于 48的冰箱中保存第二次划线分离的不同菌种的平板*2 个空白斜面培养基
6、*4 个恒温培养箱冰箱酒精灯酒精棉球接种环标签纸四、革兰氏染色细菌的革兰氏染色1、制片：涂片：滴 1滴无菌水于载玻片，挑取少许菌体与水滴均匀混合；干燥：火焰上方略加温；固定：用加热法，通过火焰 3次2、染色：结晶紫初染 1min，水洗；碘液媒染 1min，水洗；95%乙醇脱色2030s，水洗；番红复染 1min，水洗3、镜检材料：第二次划线分离的不同菌种的平板*2 个试剂：无菌水、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红器具：载玻片、接种环、酒精灯五、观察细菌的形态特征在高倍镜和油镜下观察细菌形态，拍下照片，画图，描述形态特征器具：显微镜六、生理生化试验（淀粉水解、糖酵解）（1）淀粉水解实验以无菌操作技
7、术，把两个菌种接种到同一个平板上，划成“+”字形，平板的一边接一个种在平皿底部做好记号，盖上盖，37恒温培养箱中倒置培养 24h平皿盖打开，滴加卢卡氏碘液于接种处记录结果：有水解圈：淀粉水解实验阳性，用+表示；无水解圈：淀粉水解实验阴性，用-表示(2)糖酵解实验配置葡萄糖发酵培养基 50ml,分装 5支试管中，高压蒸汽灭菌取葡萄糖发酵培养基试管 3支，分别接入两种菌种，用标签纸标明菌类或菌名、发酵培养基名称，第 3支不接种，作为对照。接种后，轻摇试管，使混合均匀37恒温培养箱中静止培养 24h记录结果：黄色、有气泡：产酸产气，用 0表示黄色、无气泡：产酸不产气，用+表示紫色、无气泡：不产酸不产
8、气，用-表示材料：第二次划线分离的不同菌种的平板*2 个、空白平白*1 个、试管*5 个试剂：卢卡氏碘液, 葡萄糖发酵培养基试剂蛋白胨 0.1g,NaCl 0.25g,K2HPO4 0.01g,水 50ml,溴麝香草酚蓝（1%水溶液） 0.15ml，葡萄糖 0.5g器具：恒温培养箱、酒精灯、酒精棉球、接种环、标签纸配置糖发酵培养基：分别称取蛋白胨和 NaCl溶于热水中，调 pH至 7.4，再加入溴麝香草酚蓝（先用少量 95%乙醇溶解后，再加水配成 1%水溶液） ，加入糖类，分装试管，装量 45cm高，并倒放入一德汉氏小管（管口向下，管内充满培养液） 。115湿热灭菌 20min。灭菌时注意适当
9、延长煮沸时间，尽量把冷Comment 小小1: 可不可以用自来水代替的呀？因为后面还要高压蒸汽灭菌的呀Comment 小小2: 我建议校准Comment 小小3: 是否多了？记得上次接种是 0.5mL的空气排尽，以使德汉氏小管内不存在气泡。常用的糖类：如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等（后两种糖的用量常加大为 1.5%）七、配置菌悬液八、探究 pH对细菌生长的影响1）第一次测量分光光度值(1)材料：上述菌悬液(2)试剂:1mol/L NaOH 或 1mol/L HCL调至 pH分别为 3、4、5、6、7、8、9 牛肉膏蛋白胨液体培养基，无菌生理盐水（需要热水溶解牛肉膏） 。(3)2
10、50ml三角瓶 7个，试管 7支，配置牛肉膏蛋白胨液体培养基 7个，pH 计，大烧杯（是否需要校准） ，恒温摇床。(4)步骤: 操作 试剂或用具配置牛肉膏蛋白胨液体培养基 NaCl 8g 蛋白胨 16g 牛肉膏 4.8g无菌生理盐水 1600ml 7个 250ml三角瓶 试管 7支 ，每个三角瓶中倒入200ml液体培养基，其余分装试管（约25ml/支）调 pH值 1mol/l NaCl或 HCI 溶液 pH 计包扎培养基并且灭菌 高压灭菌锅 121摄氏度 20min接种（无菌操作）：移液管移取 2ml菌悬液于不同 pH的三角瓶中移液管 吸气球 牛肉膏蛋白胨液体培养基置于 37度恒温箱中培养 2
11、4h 恒温摇床测分光光度值 分光光度计 OD600记录数据并且描绘关系图2）第二次测量分光光度值(1)材料：重新配置的菌悬液(2)试剂:1mol/L NaOH 或 1mol/L HCL调至 pH分别为6、6.4、6.8、7.2、7.6、8(假设 1)中最适 pH为 7)牛肉膏蛋白胨液体培养基，无菌生理盐水（需要热水溶解牛肉膏） 。(3)250ml三角瓶 5个，试管 5支，配置牛肉膏蛋白胨液体培养基 5个，pH 计，大烧杯（是否需要校准） ，恒温摇床。(4)步骤: 操作 试剂或用具配置牛肉膏蛋白胨液体培养基 NaCl 5.5g 蛋白胨 11g 牛肉膏 3.3g 无菌生理盐水 1100ml 5个
12、250ml三角瓶 试管 5支 ，每个三角瓶中倒入200ml液体培养基，其余分装试管（约20ml/支）调 pH值 1mol/l NaCl或 HCI 溶液 pH 计包扎培养基并且灭菌 高压灭菌锅 121摄氏度 20min接种（无菌操作）：移液管移取 2ml菌悬液于不同 pH的三角瓶中移液管 吸气球 牛肉膏蛋白胨液体培养基置于 37度恒温箱中培养 24h 恒温摇床测分光光度值 分光光度计 OD600记录数据并且描绘关系图附：（1） 牛肉膏蛋白胨液体培养基的：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，水1000ml，pH77.6（2） 淀粉培养基：蛋白胨 10g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，可溶
13、性淀粉 2g，蒸馏水 1000ml，琼脂 1520g，121 摄氏度灭菌 20min。（3） 糖发酵培养基：蛋白胨 0.2g，NaCl 0. 5g，K2HPO4 0.02g水 100ml，溴麝香草酚蓝（1%水溶液）0.3ml，糖类 1g。分别称取蛋白胨和氯化钠溶于热水中，调 pH至 7.4，再加入溴麝香草酚蓝（先用少量 95%乙醇溶解后，再加水配成 1%水溶液） ，加入糖类，分装试管，装量 45cm高，并倒放入一德汉氏小管（关口向下，管内充满培养液） 。115 摄氏度湿热灭菌 20min。19912012年考研中医综合试题及答案 刘云 - 6 -1991 年硕士研究生入学考试 中医综合科目试题
14、 一、A型题：每一道考题下面都有A、B、C、D、E 5个备选答案，在答题时请选择一个最合适的答案，写在答题纸上1. “阴在内，阳之守也，阳在外，阴之使也”，主要说明阴阳之间存在着：A. 对立制约 B. 互根互用 C. 互为消长 D. 平衡协调 E. 互相转化2. 与精神意识思维活动关系最密切的是A. 心主血脉的生理功能 B. 肝主疏泄的生理功能 C. 脾主运化的生理功能 D. 肺主治节的生理功能 E. 肾主藏精的生理功能3. 肺为“水之上源”的主要依据是A. 肺的通调水道的功能 B. 肺具有布散水液的功能 C. 肺具有输精于皮毛的功能 D 肺为脏腑之华盖 E. 饮入于胃上归于肺4.“乙癸同源”
15、应归属于：A. 肝和心的关系 B. 肝和肺的关系 C. 肝和肾的关系 D. 肝和牌的关系 E. 肾和牌的关系 5.“吐下之余，定无完气”的生理基础是 A. 气能生津 B. 津能化气 C. 气能摄津 D. 津能载气 E. 气能行津6. 十二经脉气血充盛有余时，则渗注于：A. 经别 B. 别络 C. 浮络 D. 孙络 E. 奇经7 素问五藏生成篇说“多食酸”则：A. 脉凝泣而变色 B. 皮搞而毛拔 C. 筋急而爪枯D. 肉胝皱而唇偈 E. 骨痛而发落8. 临证指南医案指出“内风”的机理均属于 ：A. 体内气机的逆乱 B. 体内阴血的不足 C. 体内阳气之变动 D. 诸风掉眩，皆属于肝 E. 体内筋脉失常9. “气盛则身以前皆热”的经脉是A. 手少阴心经 B. 任脉 C. 冲脉 D. 足阳明胃经 E 足太阴脾经10. “寒因寒用，热因热用”属于 ：A. 逆治法 B. 阳病治阴，阴病治阳 C. 阳中求阴，阴中求阳 D. 扶阳配阴，扶阴配阳 E 以上都不是11. 李士材的诊家正眼把脉象分为多少种 ?A. 24 种 B. 28 种 C. 27 种 D. 32 种 E. 36 种12. 望色十法中 “夭”是指：A. 色惨
