《（新编）微生物的染色及观察》由会员分享，可在线阅读，更多相关《（新编）微生物的染色及观察（154页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1实验二 微生物的染色及观察一、细菌的简单染色法1 实验目的 1.1 学习微生物涂片、染色的基本技术。 1.2 掌握细菌的简单染色法。 1.3 初步认识细菌的形态特征，巩固学习油镜的使用方法和无菌操作技术。 2 实验原理 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。细菌的细胞小而透明，在普通的光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子
2、的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、碱性复红等。 当细菌分解糖类产酸使培养基 pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。 染色前必须固定细菌。其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。3 材料 3.1 菌种 枯草芽孢杆菌 1218h 营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约 24h营养琼脂斜面培养物、大肠杆菌 24h营养琼脂斜面培养物、面包酵
3、母琼脂斜面培养物。实验教师可根据具体情况提供合适的菌种。3.2 染色剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液。 3.3 仪器或其他用具 显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，玻片搁架、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)，擦镜纸，生理盐水或蒸馏水等。 4 流程 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。 5 步骤 5.1 涂片 取两块洁净无油的载玻片，在无菌的条件下各滴一小滴生理盐水(或蒸馏水)于玻片中央，用接种环以无菌操作，分别从枯草芽孢杆菌、藤黄微球菌和大肠杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。若用菌悬液(或液体培养物)涂片，可用接种环挑取 23环直接涂于载玻片上。注意滴生理盐水（蒸馏水
4、）和取菌时不宜过多且涂抹要均匀，不宜过厚。 5.2 干燥 2室温自然干燥。也可以将涂面朝上在酒精灯上方稍微加热，使其干燥。但切勿离火焰太近，因温度太高会破坏菌体形态。5.3 固定 如用加热干燥，固定与干燥合为一步，方法同干燥。 涂片、干燥和热固定。5.4 染色 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液 12 滴于涂片上(染液刚好覆盖涂片薄膜为宜)。吕氏碱性美蓝染色 12min，石炭酸复红(或草酸铵结晶紫)染色约 1min 。 5.5 水洗 倾去染液，用自来水从载玻片一端轻轻冲洗，直至从涂片上流下的水无色为止。水洗时，不要水流直接冲洗涂面。水流不宜过急、过大，以免涂片薄膜脱落。 5.6 干燥 甩去玻片上
5、的水珠自然干燥、电吹风吹干或用吸水纸吸干均可以（注意勿擦去菌体）。5.7 镜检 涂片干后镜检。涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。 6 结果 绘制单染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图。 二、革兰氏染色法1 实验目的 1.1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。1.2 学习掌握革兰氏染色技术，巩固学习光学显微镜油镜的使用方法。 2 实验原理 革兰氏染色法是 1884年由丹麦病理学家 Christain Gram氏创立的，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。革兰氏染色法所以能将细菌分为
6、革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙
7、酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 3 材料 3.1 菌种 大肠杆菌（Escherichia coli）约 24h营养琼脂斜面菌种一支，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）约 16h牛肉膏琼脂斜面菌种一支。 3.2 染色剂 3结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液。3.3 仪器或其他用具 显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、酒精灯、蒸馏水、香柏油、二甲苯。 4 流程 涂片干燥固定染色（初染媒染脱色复染）镜检。 5 步骤 5.1 涂片 5.1.1 常规涂片法 取一洁净的载玻片，用特种笔在载玻片的左右两侧
8、标上菌号，并在两端各滴一小滴蒸馏水，以无菌接种环分别挑取少量菌体涂片，干燥、固定。玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。 5.2 初染 滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于两个玻片的涂面上，染色 12min ，倾去染色液，细水冲洗至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。 5.3 媒染用卢戈氏碘液媒染约 l min ，水洗。 5.4 脱色 用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，用滴管流加 95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗，终止脱色，将载玻片上水甩净。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。脱色
9、时间一般约 2030s。 5.5 复染 在涂片上滴加番红液复染约 23min ，水洗，然后用吸水纸吸干。在染色的过程中，不可使染液干涸。 5.6 镜检 干燥后，用油镜观察。判断两种菌体染色反应性。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌（G+），被染成红色的为革兰氏阴性菌（G-）。5.7 实验结束后处理 清洁显微镜。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯。染色玻片用洗衣粉水煮沸、清洗，凉干。6实验结果 列表简述两株细菌的染色结果(菌的形状、颜色和革兰氏染色反应)。 7思考题1）哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么
10、？ ）你认为制备细菌染色标本时，应该注意哪些环节? ）为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察? ）如果涂片未经热固定，将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎样呢? 19912012年考研中医综合试题及答案 刘云 - 4 -1991 年硕士研究生入学考试 中医综合科目试题 一、A型题：每一道考题下面都有A、B、C、D、E 5个备选答案，在答题时请选择一个最合适的答案，写在答题纸上1. “阴在内，阳之守也，阳在外，阴之使也”，主要说明阴阳之间存在着：A. 对立制约 B. 互根互用 C. 互为消长 D. 平衡协调 E. 互相转化2. 与精神意识思维活动关系最密切的是A. 心主血脉的生理功能
11、 B. 肝主疏泄的生理功能 C. 脾主运化的生理功能 D. 肺主治节的生理功能 E. 肾主藏精的生理功能3. 肺为“水之上源”的主要依据是A. 肺的通调水道的功能 B. 肺具有布散水液的功能 C. 肺具有输精于皮毛的功能 D 肺为脏腑之华盖 E. 饮入于胃上归于肺4.“乙癸同源”应归属于：A. 肝和心的关系 B. 肝和肺的关系 C. 肝和肾的关系 D. 肝和牌的关系 E. 肾和牌的关系 5.“吐下之余，定无完气”的生理基础是 A. 气能生津 B. 津能化气 C. 气能摄津 D. 津能载气 E. 气能行津6. 十二经脉气血充盛有余时，则渗注于：A. 经别 B. 别络 C. 浮络 D. 孙络 E.
12、 奇经7 素问五藏生成篇说“多食酸”则：A. 脉凝泣而变色 B. 皮搞而毛拔 C. 筋急而爪枯D. 肉胝皱而唇偈 E. 骨痛而发落8. 临证指南医案指出“内风”的机理均属于 ：A. 体内气机的逆乱 B. 体内阴血的不足 C. 体内阳气之变动 D. 诸风掉眩，皆属于肝 E. 体内筋脉失常9. “气盛则身以前皆热”的经脉是A. 手少阴心经 B. 任脉 C. 冲脉 D. 足阳明胃经 E 足太阴脾经10. “寒因寒用，热因热用”属于 ：A. 逆治法 B. 阳病治阴，阴病治阳 C. 阳中求阴，阴中求阳 D. 扶阳配阴，扶阴配阳 E 以上都不是11. 李士材的诊家正眼把脉象分为多少种 ?A. 24 种 B
13、. 28 种 C. 27 种 D. 32 种 E. 36 种12. 望色十法中 “夭”是指：A. 色惨 B. 色闭 C. 色开 D. 色深浓 E. 色枯楠13. 腐苔主病与哪一项无关？A. 食积 B. 痰浊 C. 湿温 D. 肝痈 E. 下疳14. 多食易饥 , 大便漉泄是A. 食积不化 B. 脾胃虚弱 C. 肝牌不和 D. 胃火亢盛 E. 胃强脾弱15. 天亮咳甚属于 ：A. 寒湿 B. 肾亏 C. 脾虚 D. 燥热 E. 肺实16. 下列哪种脉象不主实证 ?A. 革脉 B. 滑脉 C. 结脉 D. 肾脉 E. 弦脉17. 解索脉的特征是A. 脉在筋肉之间，脉搏极迟慢 B. 脉在筋肉之间，连
14、连数急，三五不调C. 脉在皮肤，头定而尾摇 D. 脉在皮肤，如虾游水 E. 以上都不是18. 胸满，呕逆，飧泄，狐疝，遗溺属于 ：A. 足厥阴肝经病证 B. 足太阴脾经病证 C. 足少阴肾经病证 D. 足少阳胆经病证 E. 足太阳膀胱经病证19. 少阴热化证的心烦不寐是因 ：A. 热扰胸脯 B. 热扰心神 C. 内有燥屎 D. 肝阳上亢 E. 水亏火旺20. 温病上焦病证不见以下哪个症状 ?A. 口渴 B. 谵语 C. 肢厥 D. 瘛疭 E. 脉浮数21. 哪味药可治痹痛、疥癣?A. 麝香 B. 牛黄 C. 冰片 D. 苏合香 E. 菖蒲19912012年考研中医综合试题及答案 刘云 - 5 -22. 蜀漆的来源是A. 漆树的枝叶 B. 泽漆的全草 C. 黄常山的嫩枝叶 D. 干漆的加工品 E. 田三七的根23. 蟾酥内服一次用量是A.0.0150.03 克 B.0.30.6 克 C.0.10.2 克 D.0.0020.004 克 E. 以上都不是24. 我国最早记载制成乌头碱结晶的文献是A. 本草纲目 B. 本草蒙荃 C. 炮制大法 D. 白猿经 E. 本草备
