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1、科标检测研究院 微生物的基本操作介绍一、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。科标生物实验室，在微生物检测领域拥有丰富的经验，可以针对食品、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析，提供快速、高效、权威的微生物检测服务。二、实验材料1、恒温培养箱。2、
2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。3、培养基（上次实验配制的）。4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。三、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用 75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。（6
3、）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。（9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。2、液体接种（1）由斜面培养
4、基接入液体培养基，此法用于观察细菌的生长特性和生化反应的测定，操作方法与前相同，但使试管口向上斜，以免培养液流出接入菌体后，使接种环和管内壁磨科标检测研究院 擦几下以利洗下环上菌体。接种后塞好棉塞将试管在手掌中轻轻敲打，使菌体充分分散。（2）由液体培养基接种液体培养基，菌种是液体时，接处除用接种环外尚用无菌吸管或滴管。接种时只需在火焰旁拔出棉塞,将管口通过火焰,用无菌吸管吸取菌液注入培养液内,摇匀即可。3、平板接种将菌在平板上划线和涂布。（1）划线接种 见分离划线法。（2）涂布接种 用无菌吸管吸取菌液注入平板后，用灭菌的玻棒在平板表面作均匀涂布。4、穿刺接种把菌种接种到固体深层培养基中，此法用
5、于嫌气性细菌接种或为鉴定细菌时观察生理性能用。（1）操作方法与上述相同，但所用的接种针应挺直。（2）将接种针自培养基中心刺入，直刺到接近管底，但勿穿透，然后尚原穿刺途径慢慢拔出。（二）分离的操作方法1、稀释分离法通过不断稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平板与温度适合溶化了的琼脂培养基混合，这样分散的细菌被固定在原处而形成单菌落。（1）将大肠杆菌或酵母菌用无菌水制作菌悬液。（2）取若干支无菌试管，每支内盛 9ml 无菌水。（3）吸取 1ml 制备好的菌悬液，置于第一支含有 9ml 无菌水的试管内，这样就稀释了 10倍，也就是 10-2。（4）从第一支试管内（10-2）吸取 1
6、ml 注入第二支含有无菌水的试管内，这样就稀释了100 倍，也就是 10-2。（5）用同样方法操作，直至稀释至 10-5-10-6。（6）分别精确吸取 10-5-10-6 各稀释度菌液 0.2ml 加入编好号的空无菌平皿中，同一稀释度重复做三个平皿。（7）将已溶化并冷却至 45的琼脂培养基倒入上述各平皿内，轻轻旋转使培养基与菌悬液充分混匀，凝固后倒置于 37或 38度恒温箱中培养 24-48 小时，观察平板上菌落生长和分布情况。2、平板划线分离法平板划线分离法是接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的
7、。（1）倒平板 溶化牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒平板，水平静置待凝。（2）在酒精灯光焰上灼烧接种环，待冷，取一接种环金黄葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液。（3）左手握琼脂平板稍抬起皿盖，同时靠近火焰周围，右手持接种环伸入皿内，在平板上一个区域作之形回划线，划线时例接种环与平板表面成 30-40角度轻轻接触，以腕力在表面作轻快的滑动，勿使平板表面划破或嵌进增基内。（4）灼烧接种杯，以杀灭接种环上尚残余的菌液，待冷却后，再将接种环伸入皿内，在第一区域划过线的地方稍接触一下后，转动 90，在第二区域继续划线。（5）划毕后再灼烧接种杯，冷却后用同样方法在其他区域划线。（6）全部划线完毕后，在平皿底用特种蜡笔注明
8、菌种、日期、组别、姓名。将整个培养皿科标检测研究院 倒置放入恒温箱培养。（7）37经过 24-48 小时培养后取出观察。注意菌落的开关、大小、颜色、边缘、表面结构、透明度等性状。附一 无菌操作环节（1）接种室应保持清洁，用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁，定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前，均应用紫外灯灭菌。定期对接种室作无菌程度的检查。（2）进入接种室前，应先做好个人卫生工作，在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用。不准穿到其它地方去，并要定期更换、消毒。（3）接种的试管、三角并瓶等应做好标记，注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品，均须在缓冲室
9、用 70%酒精擦试干净。（4）接种前，双手用 70%酒精或新洁尔消毒，操作过程不离开酒精灯火焰；棉塞不乱放；接种工具使用前后均需火焰灭菌。（5）培养箱应经常清洁消毒。附二 接种室的消毒方法1、紫外线灭菌接种室使用前打开紫外灯照射约 30 分钟，就能使空气和室壁表面基本上无菌。为了加强灭菌效果，在开灯以前可以在接种内喷洒石炭酸溶液，使空气中附有微生物的尘埃降落，并杀死一些微生物。接种室的台面等，可以用 2-3%的来苏尔擦洗。紫外线对人体皮肤，尤其对眼睛具有杀伤力，因皮不要直视开着的紫外灯，也不能在开着灯的情况下工作。2、喷洒石炭酸将石炭酸水浴，稍热，使之溶解。用吸耳球通过吸管吸取该溶液，配成 5
10、%溶液。对于小房间，可用喷雾器由上至下、由里至外顺序进行喷雾，并门，稍等片刻即可使用。石炭酸对皮肤有较强的毒害作用，使用时不要接触皮肤。3、福尔马林熏蒸（1）用量：市售福尔马林是 37-40%的甲醛水溶液。常用量按每立方空间 2-6ml 计算。（2）熏蒸方法：用福尔马林熏蒸有两种方法：加热熏蒸：按熏蒸空间计算,量取甲醛溶液,放在酒精灯上方的小铁筒或烧杯中,点燃酒精灯,关闭室门。酒精灯最好在甲醛蒸完后即自行熄灭。氧化熏蒸：在一瓷杯里铺一张报纸，放入高猛酸钾（其用量为 1/2 甲醛量），再取定量的甲醛溶液，倒在盛有高猛酸钾的容器里，立即关门。几秒钟后，由高猛酸钾氧化甲醛反应所产生的热将其余的甲醛蒸
11、为气体。由于甲醛对人眼、鼻有强烈的刺激作用，熏蒸后相当时间内不能进入室内工作。因此，接种室至少在使用前 24 小时进行熏蒸，房间应密闭，保持 12 小时。之后可取与甲醛等更是的氨水，倒在一个瓷碗里，放入熏蒸过的接种室，以减少甲醛对人的刺激作用。用氨水中和，至少应在工作前 2 小时进行。4、过滤除菌科标检测研究院 近几年来，多采用一种称之为超净工作台的接种室，其原理是借助于一鼓风机将普通空气鼓入，通过粗滤、超滤纤维过滤后，进入工作台内的空气即为无菌空气。整个工作室内要求清洁无尘，这样可延长超净工作台的使用寿命。新的超净工作台使用前，要进行无菌试验，确定合格方可使用，接种前，应先将工作台开启 5-
12、6 分钟。附三 接种室无菌程度检查取无菌的营养琼脂平板，在接种室内台上和台下各放一套，把皿盖打开 15min，然后盖好，倒置 37恒温培养 24-28 小时，如果每个皿内菌落不超过 4 个，则可以认为无菌程度良好，若菌落很多，则应对接种室进一步灭菌。19912012 年考研中医综合试题及答案 刘云 - 5 -1991 年硕士研究生入学考试 中医综合科目试题 一、A型题：每一道考题下面都有A、B、C、D、E 5个备选答案，在答题时请选择一个最合适的答案，写在答题纸上1. “阴在内，阳之守也，阳在外，阴之使也”，主要说明阴阳之间存在着：A. 对立制约 B. 互根互用 C. 互为消长 D. 平衡协调
13、 E. 互相转化2. 与精神意识思维活动关系最密切的是A. 心主血脉的生理功能 B. 肝主疏泄的生理功能 C. 脾主运化的生理功能 D. 肺主治节的生理功能 E. 肾主藏精的生理功能3. 肺为“水之上源”的主要依据是A. 肺的通调水道的功能 B. 肺具有布散水液的功能 C. 肺具有输精于皮毛的功能 D 肺为脏腑之华盖 E. 饮入于胃上归于肺4.“乙癸同源”应归属于：A. 肝和心的关系 B. 肝和肺的关系 C. 肝和肾的关系 D. 肝和牌的关系 E. 肾和牌的关系 5.“吐下之余，定无完气”的生理基础是 A. 气能生津 B. 津能化气 C. 气能摄津 D. 津能载气 E. 气能行津6. 十二经脉
14、气血充盛有余时，则渗注于：A. 经别 B. 别络 C. 浮络 D. 孙络 E. 奇经7 素问五藏生成篇说“多食酸”则：A. 脉凝泣而变色 B. 皮搞而毛拔 C. 筋急而爪枯D. 肉胝皱而唇偈 E. 骨痛而发落8. 临证指南医案指出“内风”的机理均属于 ：A. 体内气机的逆乱 B. 体内阴血的不足 C. 体内阳气之变动 D. 诸风掉眩，皆属于肝 E. 体内筋脉失常9. “气盛则身以前皆热”的经脉是A. 手少阴心经 B. 任脉 C. 冲脉 D. 足阳明胃经 E 足太阴脾经10. “寒因寒用，热因热用”属于 ：A. 逆治法 B. 阳病治阴，阴病治阳 C. 阳中求阴，阴中求阳 D. 扶阳配阴，扶阴配阳
15、 E 以上都不是11. 李士材的诊家正眼把脉象分为多少种 ?A. 24 种 B. 28 种 C. 27 种 D. 32 种 E. 36 种12. 望色十法中 “夭”是指：A. 色惨 B. 色闭 C. 色开 D. 色深浓 E. 色枯楠13. 腐苔主病与哪一项无关？A. 食积 B. 痰浊 C. 湿温 D. 肝痈 E. 下疳14. 多食易饥 , 大便漉泄是A. 食积不化 B. 脾胃虚弱 C. 肝牌不和 D. 胃火亢盛 E. 胃强脾弱15. 天亮咳甚属于 ：A. 寒湿 B. 肾亏 C. 脾虚 D. 燥热 E. 肺实16. 下列哪种脉象不主实证 ?A. 革脉 B. 滑脉 C. 结脉 D. 肾脉 E. 弦脉17. 解索脉的特征是A. 脉在筋肉之间，脉搏极迟慢 B. 脉在筋肉之间，连连数急，三五不调C. 脉在皮肤，头定而尾摇
