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1、1正交实验法改进广西莪术醋制炮制工艺的初探【摘要】 目的探讨醋制广西莪术的最佳炮制工艺条件。方法选择醋制的米醋用量、醋制温度、醋制加热时间 3 个因素，每个因素 3 个水平，按照 L9(34)正交实验表安排实验，并提取出莪术各醋制品中的有效成分挥发油和总姜黄素，分别对其含量进行测定，以对莪术饮片的醋制工艺进行优选。结果较佳的工艺条件是 A3B2C1，即用20 ml 米醋闷润 2 h 后，控制温度 60烘制 30 min。结论米醋用量、烘制温度、烘制时间均使莪术饮片质量产生变化。 【关键词】 广西莪术; 正交实验法; 醋制; 挥发油; 姜黄素Abstract:ObjectiveTo optimi
2、ze the processing technique of Rhizoma Curcumae from Guangxi.MethodsL9(34)orthogonal experimental design table was adopted with 3 factors(dosage of vinegar, pocessing temperature, pocessing time)and 3 levels,and the contents of volatile oil and curcumin in different processed Rhizoma Curcumae from G
3、uangxi were determined.ResultsThe optimal processed technique was A3B2C1，namely, the sample was soaked with rice vinegar 20 ml, moisted for 80min,then dried at 90 for 30min.ConclusionThe dosage of rice 2vinegar,processing time ,processing temperature are the main factors which affect the quality of
4、processed Rhizoma 0Curcumae from Guangxi.Key words:Rhizoma Curcumae from Guangxi; Orthogonal design; Vinegar-porcess; Volatile oil; Curcumin广西莪术即桂莪术为 Curcuma kwangsiensis S.G. LeeetC. F. Liang 的块根与根茎，其性味辛、苦、温，归肝、脾经，具行气破血、消积止痛功效1，主要有效成分为挥发油和姜黄素，以桉油精、樟脑、异龙脑、-榄香烯、莪术烯、吉马酮、-松油醇等含量为高，尚有姜黄素(curcumin, I)、脱甲
5、氧基姜黄素(demethoxycurcumin, II)和双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin, III)等成分2。莪术炮制已有数千年的历史, 目前莪术的炮制方法主要有润切、蒸切、醋浸、醋炒、醋煮等方法3，广西主要为醋煮4, 中国药典2005 年版收载为蒸切、醋煮法。已知传统不同炮制方法是莪术饮片中挥发油和姜黄素含量以及莪术的药理活性的重要影响因素5,6。本实验选择醋制的米醋用量、醋制温度、醋制加热时间 3 个因素，每个因素 3 个水平，按照L9(34)正交实验表安排实验，并提取出莪术各醋制品中的有效成分挥发油和总姜黄素，分别对其含量进行测定，对莪术饮片的醋制工艺进行优选
6、。31 仪器及材料挥发油提取器;BP211D 电子分析天平(德国赛多利斯);KQ-500E 型医用超声清洗器( 昆山超声仪器有限公司);UV 分光光度计(上海第三分析仪器厂);姜黄素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号为 0823-9802)。实验所用莪术药材购于广西灵山县，经广西中医学院韦松基教授鉴定为姜科植物广西莪术(桂莪术)Curcuma kwangsiensis S.G. LeeetC. F. Liang 的根茎;其余所用试剂均为分析纯。2 方法2.1 对照用炮制品制备2.1.1 生莪术取原药材，除净杂质，大小分档，浸泡 4 h，捞出吸润约 23 d，吸润时至透心为度，切成厚约 3
7、 mm 的薄片，晒干即可7。2.1.2 醋煮莪术取原药材，除去杂质，大小分档，略泡，洗净后置锅内，用醋与适量热水浸没，用微火加热煮，不断翻动，煮至醋吸尽透心，取出切中片，干燥，筛去灰屑。莪术每 100 kg，用4米醋 20 kg4。2.1.3 醋炙莪术取莪术片，加入定量醋拌匀，稍闷透，待醋被吸尽后，置炒制容器后，用文火加热，炒至微黄色，略带焦斑时，取出放凉，筛去碎屑。莪术每 100 kg，用米醋 20 kg8。2.1.4 醋炒莪术取莪术片，放入热锅内拌炒，每 100 kg 用醋10 kg，兑水适量，用武火边炒边洒，炒至醋水吸干，呈黄褐色，取出晾干即可5。2.1.5 醋拌莪术取原药材, 除杂，淋
8、醋拌透, 约 1 d，至醋被吸尽，切片晒干。每 100 kg 莪术用醋 25 kg8。2.1.6 酒制莪术取莪术片，用微火加热，炒热后，均匀喷入酒，继续炒干，取出晾凉。莪术每 100 kg，用米醋 12 kg9。2.2 正交试验样品的制备根据莪术挥发油和姜黄素的理化特性和文献资料5,6，以挥发油和姜黄素的含量为目标，选择米醋用量、加热时间、加热温度 3 个因素，每个因素 3 个水平，按照L9(34)正交实验表安排实验，见表 1。挑拣形状比较均匀，颜色比较鲜艳的净莪术根部饮片 100 g 9 份，加米醋(0 ，10 ，20 ml)，拌匀，常温下闷润 2 h，待醋被饮片吸干之后，分别放置于5(60
9、，80，100)于干燥箱中加热一段时间(5 ，15 ，30 min)取出，后于鼓风燥箱中鼓风干燥，温度为室温35，粉碎过 65 目筛，最后保存于硅胶 G 干燥皿中 1 个月。2.3 实验样品中挥发油测定根据 2005 年版中国药典部附录 XD 挥发油测定甲法测定，读取挥发油量，并计算药材的出油率。结果见表 24。2.4 总姜黄素含量测定 102.4.1 样品制备各取 100 g 正交实验样品中不同的莪术炮制品，以 15 倍量的水提取两次,1.5 h/次, 合并两次药液，于水浴锅上浓缩得莪术干膏;精密称定所得干膏适量, 置离心管中,加入 30 ml 石油醚超声脱脂,弃去石油醚液, 加入 95%乙
10、醇 20 ml,超声提取 2 次,每次 30 min,提取液滤过,定容至 50 ml。表 1 正交实验因素水平表 2 正交实验样品中挥发油和总姜黄素的含量测定结果2.4.2 标准曲线绘制精密称取姜黄素对照品适量,加乙醇溶解使浓度为 1.064 mgml-1。精密吸取对照品溶液 10,20,30,40,50 l加乙醇稀释至 10 ml 摇匀,在 426 nm 波长处测定吸收度 ,得回归方程:Y=0.144 6X+0.016 9,r=0.999。总姜黄素浓度在 1.0645.32 gml-1 范围内与吸收度呈良好的线性关系。6将正交实验各稠膏样品依法提取、测定,计算含量。2.4.3 稳定性实验取对
11、照品溶液和莪术供试样品液,间隔 15 min 测定吸收度,结果表明在 2 h 内吸收度稳定 ,RSD 分别为1.35%(n=9)和 1.27%(n=9)。2.4.4 精密度考察取同一莪术样品液,进行精密度测定,结果RSD 为 1.82%(n=5)。2.4.5 重复性考察取同一批莪术样品稠膏,重复提取测定 5 次,结果 RSD 为 1.56%。2.4.6 加样回收率测定精密称取姜黄素对照品加入到已知含量的莪术稠膏中,依法提取测定, 计算加样回收率。结果显示,平均回收率为 98.63%,RSD 为 2.19%(n=5)。3 结果1 号至 8 号实验方案所得饮片的挥发油含量和姜黄素含量测定结果如表
12、2 所示。方差分析如表 3 所示。表 3 方差分析4 讨论7实验结果表明：对挥发油，A：平均平均，表明A1 条件比 A2，A3 好。同理，B2 和 C1 条件较好;从极差看出，因素 B 的极差最大，是影响挥发油含量变化的主要因素，其次是C，A 因素影响没有统计学意义。在本实验中，不考虑交互作用的影响，把各主要因素的最优水平组合起来，得到较佳工艺条件是A1B2C1。对姜黄素，A 因素 A3 是影响姜黄素含量变化的主要因素，其次是 C， B 因素的影响没有统计学意义，A3-和 C3 为较佳工艺条件。表 4 广西莪术不同炮制品挥发油得率本文旨在初探醋制莪术的最佳工艺，从莪术药理活性姜黄素和挥发油成分
13、的理化性质出发和以姜黄素和挥发油为目标选择了 4个因素 3 个水平，试验结果表明，加热处理过程中，部分挥发油受热易挥发，过长时间过高温度可造成其含量下降，但是较短的加热时间较低的温度又不能使米醋更好地渗入药材细胞内，影响莪术饮片姜黄素有效成分的溶出;因此控制饮片炮制时受热程度以及加入足量米醋时保证莪术饮片质量的主要因素，以试验结果和方差分析为依据，对各个样品进行综合评分，确定最佳工艺为 A3B2C1，即 8号实验设计;本正交设计中温度因素 60， 100水平分别为太阳曝晒干燥饮片和水煎莪术的模拟条件，目的考察这两个因素对莪术饮片质量的影响。 但是何为最佳的炮制工艺标准还有待进一步深入研究，包括
14、对本实验进行药理研究。8正交设计试验 8 号方案工艺炮制的莪术饮片中挥发油和姜黄素含量与传统各种炮制规格莪术饮片挥发油和姜黄素含量比较都具有统计学差异，8 号方案工艺炮制的莪术饮片中挥发油和姜黄素含量比传统各种炮制规格莪术饮片挥发油和姜黄素含量高，而且所采用的米醋用量、温度和加热时间因素和水平范围没有超越各种传统炮制方法，因此这个莪术炮制的改进方案是可行的。【参考文献】1 国家药典委员会. 中国药典，部S.北京:化学工业出版社,2005:194.2 肖培根 .新编中药志,第 1 卷M.北京:化学工业出版社,2002:778.3 卫生部中医研究院中药研究所.中药炮炙经验集成M. 北京: 人民卫生
15、出版社,1963:99.4 广西壮族自治区卫生厅 .广西中药炮制规范S.北京：人民卫生出版社，1997：115.5 鲁汉兰，彭智聪，刘 勇，等.莪术炮制后对止痛及活血化9瘀作用的影响J.中成药， 2000，22(2)：136.6 陆兔林，杨光明，宋 坤，等.气质联用法分析炮制对莪术挥发油成分的影响J.中成药，2003，22(10)：136.7 云南省卫生厅. 云南省中药饮片炮制规范S.昆明:云南科技出版社,1988：101.8 河南省卫生厅. 河南省中药材炮制规范S.郑州:河南科技出版社,1993：144.9 贵州省卫生厅. 贵州省中药饮片炮制规范S.贵阳:贵州人民出版社,1986：123.10 黄燕芬，洪行球. 分光光度法测定总姜黄素的含量及方法学考察J.浙江中医学院学报 ,1999,23(6):24.
