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1、Q260046902 专业做论文1香菇菌丝体对不同氮源的利用研究周振荣，生命科学学院摘 要：采用液体深层培养方法，分析了六种氮源（豆粉，豆渣粉，硝酸 钾，硝酸铵，硫酸铵和尿素）对香菇菌丝体生长的影响。 实验结果表明：有机氮源比无机氮源更利于香菇菌丝体的吸收生长。在实验所选用的六种氮源中，豆粉、豆渣粉的效果都比较好，菌球密度大且大小均匀，72 小时培养后，每 100mL 培养液中菌丝体干重分别为 0.583mg 和 0.587mg。而且以豆渣粉为氮源最为经济且最易获得，菌丝体干重最高；在无机氮源中，以硝酸钾为氮源的培养液中香菇的菌丝球大且多，菌丝体干重为 0.487mg。然而以硝酸铵，硫酸铵和尿
2、素为氮源的培养基中，香菇的菌丝体几乎没有生长，和接种时差不多，菌 丝体干重分别为0.027mg、0.023mg 和 0.024mg，菌 丝球呈休眠状态。初步研究表明通常废弃的豆渣粉可以用来作为香菇菌种液体深层培养的氮源，从而为发展食用菌产业开辟了新的思路。关键词：香菇；氮源；深层培养；菌丝体The Study of the Utilization of Lentinus edodes Mycelia to Different Nitrogen SourcesZHOU Zhen-rong, College of Life SciencesAbstract: Submerged culture w
3、as used to study the effects of six nitrogen sources (soya flour, bean dregs powder, KNO3, NH4NO3, (NH4)2SO4 and urea) on the mycelial growth of Lentinus edodes. The results showed that: the mycelia of Lentinus edodes was more adaptable to organic nitrogen sources than inorganic nitrogen sources. Am
4、ong the organic nitrogen sources, both soya flour and bean dregs powder had good effects. In every 100mL liquid culture media, the weight of the dry mycelia in soya flour treatment was 0.583mg, in bean dregs powder was 0.587g. The densities JQ260046902 专业做论文2of mycelia were large and the sizes of my
5、celia balls were homogeneous. However, when bean dregs powder was used as nitrogen source, the weight of the dry mycelia was the highest one. Furthermore, bean dregs powder was the most economical one and it was easy to obtain. Among the inorganic nitrogen sources, the mycelia balls of Lentinus edod
6、es in KNO3 treatment were big and the mycelia balls number was large, the weight of the mycelia was 0.487g. However, the weight of the dry mycelia in NH4NO3 treatment was 0.027g, in (NH4)2SO4 treatment was 0.023g, and in the treatment of urea was 0.024g, from which we could see that the mycelia coul
7、d hardly grow and the mycelia balls were dormant. The primary study indicated that the waste bean dregs powder could be used as the nitrogen source for Lentinus edodes, which opened a new way for the development of the edible mushroom.Keywords: Lentinus edodes; nitrogen source; submerged culture; my
8、celia 1 引言香菇（Lentinus edodes）是真菌界香蕈的子实体，因其含有一种特殊的香味物质香菇精，形成独特的菇香，所以称为“香菇” 。其别名有香蕈、香椹、香信、合蕈、台蕈等 1，在分类学上属于担子菌纲、伞菌目、侧耳科、香菇属 2-4。香菇分布在我国浙江、福建、台湾、安徽、湖南、湖北、江西、四川、广东、广西、海南、贵州、云南、陕 西、甘肃等地区，是我国 传统的著名食用菌，我国在世界上最早人工 驯化栽培成功。香菇由于营养丰富，香气沁脾，味道 鲜 美，素有“菇中之王” 、 “蔬菜之冠”的美称，不但列于平菇、草菇之上，而且享有 “蘑菇皇后”之誉。香菇含有十多种氨基酸，其中有异亮氨酸、赖
9、氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等 8 种人体必需的氨基酸，还含有维生素 B1、B2、PP 及矿物盐；香菇中含不饱和脂肪酸甚高，还 含有大量的可转变为维生素 D 的麦角甾醇和菌甾醇，对于增强抗疾病和预防感冒及治疗有良好效果，所以经常食用香菇对预防人体，特别是婴儿因缺乏维生素 D 而引起的血磷、血 钙代 谢障碍导致的佝偻病有益 5-6，还可预防人体各种粘膜及皮肤炎病；香菇可预防血管硬化，可降低人的血压，从香菇中还分离出降血清胆固醇的成分 7；香菇灰分中含有大量钾盐及其它矿质元JQ260046902 专业做论文3素，被视为防止酸性食物中毒的理想食品。我国不少古籍中记载香菇“ 益气不饥，治风破
10、血和益胃助食” 。民间用来助痘疮、麻疹的诱发，治头痛、头晕。现代研究证明，香菇多糖可调节人休内有免疫功能的 T 细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力 8-9。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤 180 的抑制率为97.5，对艾氏癌的抑制率为 80%10。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力 11-12。另外香菇还含有水溶性鲜味物质，可用作食品调味品，其主要成分是 5-鸟苷酸等核酸成分，香味成分主要是香菇酸分解生成的香菇精。所以香菇是人们重要的食用、药用菌和调味品。香菇菌丝白色，绒毛状，具横隔和分枝，多 锁状联合，成熟后扭结成网状，老化后形成褐色菌膜。子实体中等大至
11、稍大，菌盖直径 512 厘米，扁半球形， 边缘内卷，成熟后渐平展，深褐色至深肉桂色，有深色鳞片。菌肉厚，白色。菌褶白色，密，弯生，不等长。菌柄中生至偏生，白色，内 实 ，常弯曲，长 38 厘米，粗0.51.5 厘米；中部着生菌环，窄，易破碎消失；环以下有纤维状白色鳞片。 孢子椭圆形，无色，光滑 1。香菇是我国食用菌栽培的主要品种，栽培面积逐年增加，为适应新形势下香菇产业的迅猛发展，采用液体菌种是实现香菇大规模栽培的关键因素。液体菌种具有生产周期短、接种方便、菌丝分散性好、萌 发点多、生长快、成品率高等优点，是香菇规模化和机械化生产的发展趋势 13-14。本文 对香菇液体菌种的氮源营养需求和发酵
12、条件进行了研究，旨在为香菇液体菌种的推广和应用提供理论依据。2 材料和方法2.1材料2.1.1 供试菌种JQ260046902 专业做论文4香菇菌种由安徽师范大学微生物实验室提供。2.1.2 主要仪器TOMY/SS2325型高压灭菌锅；SVC4A1型超 净无菌工作台； KYC100B型空气恒温调速回转式摇床；DGX-9143BC-1型电热鼓风干燥箱；FA-N/JA-N型电子天平； DYF-300型摇摆式高速中药粉碎机 。2.1.3 培养基（1）种子培养基（液体PDA培养基）：马铃薯20，葡萄糖2，葡萄糖为国产分析纯，马铃薯购于当地农贸市场。 配制方法：将马铃薯去皮称重，切成块，煮沸 30分钟，
13、用布 过滤，加入葡萄糖融化后加水至所需容量，分装在三角瓶中，在121 下灭菌30分钟。（2）液体基础培养基：葡萄糖3，磷酸二氢钾0.05， 硫酸镁0.05， 试剂均为国产分析纯。配制方法：分别称取葡萄糖、磷酸二氢钾和硫酸镁各36g、0.9g和0.9g，加热融化后加水补至所需容量，然后分装在18瓶500mL三角瓶中，每个三角瓶中100mL基础培养基。（3）氮源： 有机氮：豆粉、豆渣粉：将从本地市场中购买的黄豆和豆渣，放置干燥箱中在85 下烘干至恒重，然后放入粉碎机中粉碎使其呈粉末状。无机氮：尿素，硝酸钾，硫酸铵，硝酸铵，都 为国产分析纯。JQ260046902 专业做论文52.2 方法2.2.1
14、 菌种活化 将保存菌种从冰箱中取出后，室温下放置30分钟使处于低温中的菌种活化。2.2.2 种子制备 从活化的菌种中取4块大小相同的菌块（1.5cm1.5cm），分别接入4瓶装有150mL种子培养基的500mL三角瓶中，25下振荡 （130rmin）培养5天。2.2.3 氮源利用实验 在基础培养基中分别加入1的六种供试氮源，每种氮源3个重复，121 下高压灭菌30分钟。然后将培养好的种子以体积分数为10的接种量接入盛有100mL液体基础培养基的500mL三角瓶中，每种氮源3个重复，共18瓶。25 下振荡（130r min ）培养3天。2.2.4 菌球的观察 发酵终止后，在过滤称重前观察菌球的大
15、小、形 态、以及菌球的数目等性状。2.2.5 菌丝干重测定终止发酵后，每个样品有110mL，用 纱布过滤除去培养基，并用清水冲洗数次后收集菌丝体，并在75下烘干至恒重，然后用 电 子天平测定菌丝体干重。3 结果与分析在其它培养条件相同的情况下，不同的氮源对香菇菌丝体的生长的影响存在明显的差异。观察结果表明，以黄豆粉、豆渣粉和硝酸钾为氮源的培养液中菌球多，大小均匀。而以硝酸铵、硫酸铵和尿素为氮源的培养液中菌球少。菌球数量多少 顺序为：豆渣粉豆粉 硝酸钾硝酸铵尿素 硫酸铵。菌球大小顺序为：硝酸钾黄豆JQ260046902 专业做论文6粉豆渣粉 硝酸 铵尿素 硫酸铵（如表1）。表1 不同氮源对香菇菌
16、球生长的影响Table 1The effects of different nitrogen sources on the mycelia balls growth of Lentinus edodes氮源种类 黄豆粉 豆渣粉 硝酸钾 硝酸铵 硫酸铵 尿素菌球生长情况菌球中等且多，大小均匀。菌球偏小且数量很多。菌球大且多。菌球小，几乎未生长。菌球小，几乎未生长。菌球小，几乎未生长。总体来说有机氮源的培养情况都很良好，黄豆粉和豆渣粉的表现相似，菌球均匀而且多长势良好，72小 时培养后，每 100mL培养液中菌丝体干重分别为0.583g和0.587g。在挑选的无机氮源中，以硝酸钾为 氮源的培养液中，菌球 长势良好，菌球饱满、均匀，菌丝体干重为0.487g。 然而硝酸铵、硫酸铵以及尿素的效果出乎意料，其中的菌球几乎
