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1、项 目 载脂蛋白 A1（APOA1）方 法 免疫比浊法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录 A: 参数1. 检测原理APO A-1 与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在 340nm 测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对 APO A-1 浓度的标准曲线就可以测定出样品中的 A
2、PO A-1 浓度。2标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹 12h，不饮酒 24h 后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后 3 个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前 24 小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐 5 分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间
3、不超过 1 分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：血浆使用 EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4 标本处理：血标本室温放置 30min45min 后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖 2-8保存。3试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司 APOA1 试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：组 成 混合后的浓度R1: 聚乙二醇 4%氯化钠 106mmol/LTris/HCL 缓冲液 15mmol/LR2: 抗人 APO A-1 抗体表面活性剂3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的 40
4、 项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的 2SD 范围，需要全点定标。3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在 2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存 30 天。试剂储存在 18-22稳定 28 天，试剂应避免污染。试剂 R1 颜色为无色，试剂 R2 颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。项血脂类标准液或 APOA/B 标准液在 2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，2-8储存可稳定一周，参见校准血清说明书。4仪器KONELAB 30 型号仪器。性能：波长 340nm，仪
5、器测定吸光度的灵敏度应达到 0.001ABS 以上。5操作样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录 A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算A 测定C = C0A 标准式中：c 测定血清载脂蛋白 A1 浓度，g/L；A 测定 标本管吸光度；A 标准 标准管吸光度；CO 校准血清中载脂蛋白浓度，g /L；A A2 A17操作性能7.1 精密度：批内 CV 1.78，批间 CV 3.65。7.2 准确度：检测结果的相对不准确度10%。7.3 灵敏度：载脂蛋白 A1 浓度为： 1.1g/L 时，浊度吸光度 A340nm 约 1.1511.256。7.4 可报告范围：血
6、清与试剂用量之比为 2:260:65 时，测定上限为 2.4g/L。7.5 特异性：测量值在给定值的 90%-110范围内。7.6 干扰：内源性干扰物溶血为 1000mg/ml、脂血 2000mg/ml、黄疸 30mg/ml、抗坏血酸 300mg/ml 对测试结果无明显影响。8参考值1.2-1.8 g/L9临床意义载脂蛋白 A1 测定试剂盒用于定量测定血清中载脂蛋白 A1 的含量。ApoA 可分为 ApoA，A , A 。ApoA 和 A大部分分布在 HDL 中，是 HDL 的主要载脂蛋白。ApoA主要存在于 HDL 中，在 HDL3 中 ApoA占载脂蛋白的 65，在 HDL2 中 ApoA
7、占载脂蛋白的 62，在 CM、VLDL 和 LDL 中也有少量存在。血浆中呈现 迁移率的一种 -HDL，其内 80为 ApoA。ApoA的生理功能有：组成载脂蛋白并维持其结构的稳定性与完整性。实验表明，纯化的 ApoA在水溶液中可以自发地和脂类结合。用 CNBr 法将 ApoA裂解成四个肽段，发现仅有羧基末端的肽段可自发和磷脂结合。后来进一步确认这一段是 ApoA224-242 段，这一段既可维持双性螺旋的结构，又可以维持和脂质结合所具备的疏水性。ApoA可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）的活性。已经证实，ApoA 是通过激活 LCAT，再催化胆固醇酯化。ApoA肽段（肽段 116-151）是激活作用的中心。ApoA 可作为 HDL 受体的配体，含 ApoA脂蛋白可以和转铁蛋白及铜蓝蛋白形成大分子复合物以运输铁和铜离子。载脂蛋白 A1 是抗动脉搏粥样硬化的指标，检测血清中载脂蛋白的主要用于诊断冠心病。附录 A: 参数
