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1、1慢性阻塞性肺病患者血清对氧磷酶水平与全身炎症反应的关系作者：张扬帆 刘晓菊 包海荣 张艺【摘要 】 目的 探讨慢性阻塞性肺病急性加重(AECOPD)患者血清对氧磷酶(PON1)、氧化应激与全身炎症之间的关系。方法 采用乙酸苯酯法检测 40 例 AECOPD 患者和 30 例正常对照者血清PON1 活性; 改良 Hafeman 法检测血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性; 比色法测定总抗氧化能力 (TAC);硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA); 放射免疫法测定血清 IL6 和 IL8 水平;免疫投射比浊法测定血清 C 反应蛋白(CRP)含量。结果 AECOPD 患者血清 PON1 活性
2、(95.0357.4)U/ml 显著低于对照组(136.060.5)U/ml，GSHPx 活性(128.4628.27)U/ml 低于对照组(186.6039.50)U/ml(P0.05)， 血清 MDA (6.250.87)nmol/ml 显著高于对照组(3.650.54)nmol/ml(P0.01)， 血清TAC(9.863.19)nU/ml 明显低于对照组(18.428.23)nU/ml(P0.01); IL6 (64.8620.27)pg/ml、CRP(9.234.58)mg/L 显著高于对照组(46.3212.25)pg/ml、(3.341.29)mg/L(均 P0.01);IL8
3、(2.630.75)ng/ml 高于对照组(1.820.67)ng/ml(P0.05); PON1 活性与 IL8 呈显著负相关(r=-0.589,P0.01)，与 FEV1%呈正相关(r= 0.434,P0.05)，2GSHPx 活性与 IL6 呈负相关(r=-0.362,P0.05)，MDA 与CRP 呈显著正相关(r=0.512,P0.01) ，与 FEV1%呈显著负相关(r=-0.800,P0.01)，TAC 与 IL6 呈显著负相关(r=-0.573,P0.01)，与 FEV1%呈正相关(r=0.357,P0.05)。1.2 方法1.2.1 肺功能检测 采用 Medgraphics
4、公司生产的 ELITE/DX型肺功能仪测定肺通气功能。包括 1 秒钟呼气容积 (FEV1)、FEV1占预计值百分比(FEV1%)、FEV1/FVC%。1.2.2 PON1 检测 空腹采静脉血 5 ml，分离血清，置于-70冻存备用。血清 PON1 含量采用乙酸苯酯法检测，以4Eckerson7的方法为基础并稍加改进，将乙酸苯酯加入反应缓冲液(0.1 mmol/L 的 TrisHCl 缓冲液，2.0 mmol/L 的CaCl2,pH=8.0)，于 25预温 6 min 后，加入血清样本，反应 2 min 后用乙二胺四乙酸二钠终止反应，然后用日本岛津 751 型分光光度计于 270 nm 波长测定
5、吸光度值。 PON1 酶活性单位定义为每分钟催化 1 mol 乙酸苯酯水解所需的酶量为 1 U (U/ml)。乙酸苯酯和三羟甲基氨基甲烷购自 Sigma 公司。1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSHPx)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAC)检测 血清 GSHPx 活性采用改良 Hafeman 法检测，TAC 采用比色法，MDA 采用硫代巴比妥酸显色法，均采用南京建成生物工程有限公司试剂盒，严格按说明书操作。1.2.4 IL6、IL8 检测 血清 IL6、IL8 采用放射免疫法检测，试剂盒购自科美东雅生物技术有限公司，严格按说明书操作。1.2.5 C 反应蛋白(CRP)检测 血清 CRP
6、 含量采用免疫投射比浊法，用德灵公司特种蛋白仪检测。1.3 统计学处理 采用 SPSS 11.5 统计软件，数据以 xs 表示，两组间比较用 t 检验，采用 Pearson 直线相关分析相关性。52 结 果2.1 肺功能指标比较 AECOPD 组 FEV1、FEV1%及FEV1/FVC%均显著低于正常对照组 (P0.01)，表明 AECOPD 患者存在阻塞性通气功能障碍，符合 COPD 诊断标准,见表 1。2.2 PON1、GSHPx 、TAC 及 MDA 比较 AECOPD 组血清PON1 活性、TAC 水平均显著低于正常对照组(P0.01);GSHPx活性低于正常对照组(P0.05)，血清
7、 MDA 水平显著高于正常对照组 (P0.01)，见表 2。2.3 IL6、IL8 、CRP 水平比较 AECOPD 组血清CRP、IL6 水平与正常对照组比较显著增高 (P0.01);IL8 水平亦显著高于正常对照组(P0.05)，见表 2。表 1 AECOPD 患者和对照组肺功能比较与正常对照组比较：1)P0.01 表 2 AECOPD患者与对照组 PON1、 GSHPx、MDA、TAC 及CRP、IL6 、IL8 的比较与正常对照组比较：1)P0.05;2)P0.012.4 相关性分析 AECOPD 组血清 PON1 活性、TAC 水平与FEV1%呈正相关 (r=0.434、0.357
8、，均 P0.05);MDA 与 FEV1%之间呈显著负相关(r=-0.800，P0.01)。AECOPD 组血清 PON16活性与 IL8 呈显著负相关(r= -0.589，P0.05)，GSHPx 活性与 IL6 呈负相关 (r=-0.362，P0.05)，TAC 与 IL6 存在显著负相关(r=-0.573，P0.01)。MDA 与 CRP 呈显著正性相关(r=0.512， P0.01)。3 讨 论国内外文献报道 COPD 的发病与氧化应激关系密切，存在氧化/ 抗氧化失衡。氧化应激广泛参与 COPD 患者机体的病理损伤过程，引起脂质、蛋白质和 DNA 等一系列的损伤。TAC 即机体抗氧化防
9、御体系的整体状态，Gosker 等8对 COPD 患者骨骼肌活检发现其 TAC 显著降低，提示 COPD 患者机体抗氧化能力已处于失代偿状态。近期国外文献报道 COPD 患者的红细胞超氧化物歧化酶，过氧化氢酶活性增高，氧化型谷胱甘肽含量增高;而血清总巯基、GSHPx 活性下降 911 。MDA 是反映脂质过氧化损伤的常用客观指标，Joppa 等10研究发现 COPD 患者血清 MDA 水平增高，合并肺动脉高压患者中 MDA 增高更加明显。本研究发现COPD 患者 TAC 及 GSHPx 均降低，而血清 MDA 水平却明显升高，提示 COPD 患者体内存在氧化应激。PON1 是分子量为 4345
10、 kD 的糖蛋白，能部分水解脂质过氧化物，防止低密度脂蛋白被氧化修饰，减少氧化型脂质积聚，具有抗氧化、延缓或阻止动脉粥样硬化发生和发展的作用12 。7Selek 等3研究发现肺结核患者的 PON1 活性下降且与过氧化物呈负相关，与 TAC 及总巯基呈正相关，表明与游离自由基所致的氧化应激有关。Seo 等 13研究发现 PON1Q192 R 基因多态性与 COPD 患者的肺功能有关，含 Q192 R 等位基因的 COPD 患者的 FEV1 和 FVC 降低，提示 PON1Q192 R 等位基因是造成 COPD患者气道损伤的危险因素。本研究显示 AECOPD 患者血清 PON1活性明显降低，且与
11、FEV1%呈正相关，推测可能与氧化应激导致的抗氧化酶消耗过度有关。COPD 是以气道慢性炎症为特征的肺部疾病，近年来其对全身的影响越来越受到重视。前炎因子 IL6、IL8 通过与靶细胞表面受体结合发挥多种生物学活性，参与机体细胞免疫、炎症反应、造血调控等。同时，IL6 也是一种脂肪细胞因子，与瘦素、抵抗素和其他脂肪细胞因子共同参与营养代谢、能量摄入与消耗平衡的调节。IL8 能促使炎性细胞在炎症部位浸润，增加超氧阴离子释放，加重炎症反应。Tumkaya 等4 研究发现 COPD 患者支气管肺泡灌洗液中的 IL8 与 TNF 含量均明显高于健康对照组。Foschino等5研究发现 COPD 患者诱
12、导痰中 IL6 及 TNF 的含量均明显高于正常对照组。CRP 是在 IL6、TNF 等促炎性因子刺激下生成的非特异性急性相蛋白，在许多疾病如创伤、急性炎症时可迅速增高。Karadag 等14研究发现稳定期 COPD 患者 CRP 水平升高，在低体重指数 COPD 患者中升高更加明显，推测 CRP 可以8反映全身炎症以及营养不良状况。本研究证实 AECOPD 患者血清CRP、IL6 和 IL8 均高于正常对照组，提示 AECOPD 患者存在全身炎症反应，这可能与吸烟、内皮功能障碍以及炎症细胞功能和表达异常有关。文献报道氧化应激状态与肺功能恶化相关，研究发现红细胞GSHPx 与 FEV1 呈正相
13、关，MDA 与 FEV1、FEV1%之间呈负相关15，16 。 本研究发现 AECOPD 患者的 PON1、TAC 与 FEV1%存在正相关， MDA 与 FEV1%呈显著负相关，证实氧化应激与肺功能恶化密切相关。Sadowska 等16 研究表明红细胞 GSHPx与 IL8 呈负相关， Takacova 等17研究发现 AECOPD 患者红细胞 GSHPx 与 CRP 呈负相关。本研究证实 AECOPD 患者血清PON1 活性与 IL8 呈显著负相关，血清 GSHPx 活性与 IL6 存在负相关，MDA 与 CRP 呈显著正性相关，血清 TAC 与 IL6 存在显著负相关，表明 COPD 患者的氧化应激与全身炎症反应之间存在相关性。综上所述，AECOPD 患者存在氧化应激，且与 FEV1%降低相关，PON1、氧化应激与全身炎症反应之间相关，为 COPD 抗氧化治疗提供理论依据。【参考文献】nts
