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1、1大鼠血管性痴呆模型的改良作者：郑敏,赵 骥, 陈红光 ,王帮华，鲍翠玉【摘要 】 目的 对大鼠血管性痴呆双侧颈总动脉永久性结扎模型（permanent bilateral common carotid artery occlusion，2VO）进行改良，提高模型动物存活率。方法 采取改良造模方法（间隔 3 天分 2 次结扎双侧颈总动脉）和传统的 2VO方法（同时结扎双侧颈总动脉）建立血管性痴呆模型，观察并比较2 种方法大鼠的成活率和学习记忆能力差异。 结果 术后 60d， 改良模型组动物存活率（80.0%）明显高于传统模型组（ 45.0%）（P0.05） ，而均显著低于假手术对照组（P0.0
2、1） 。 结论 改良 2VO 法是建造大鼠血管性痴呆模型的理想方法。 【关键词】 动物模型；血管性痴呆；Morris 水迷宫;大鼠ABSTRACT：Objective To establish a better permanent bilateral common carotid artery occlusion method which is used to establish the vascular dementia model and increase survival rate of the model animals.Methods The bilateral common car
3、otid arteries were occluded in two times 2operation at 3 days interval for improved method or,blocked simultaneously at one surgery for traditional one.The differences between the two methods about the survival rates of the rats,and the learning and memory ability were compared.Results 60 days after
4、 the last operation,the survival rate of the improved model group animals(80%) was much higher than that of the traditional group animals(45%) (P0.05),and was decreased as compared to the control group(P0.01).Conclusion The improved permanent bilateral common carotid artery occlusion is a better met
5、hod to establish the vascular dementia model than the traditional one.KEY WORDS： Animal model；Vascular dementia；Morris water maze；Rat双侧颈总动脉永久性结扎模型是血管性痴呆研究中常用的模型之一1。传统方法因双侧颈总动脉同时永久性结扎，对动物打击过大，动物死亡率高，导致实验成本升高，标本获取困难，实验周期延长。我们拟对传统方法进行改良，降低动物死亡率，同时观察其行为学3指标的变化。1 材料与方法1.1 动物及仪器健康雄性 Wistar 大鼠 45 只，体质量 220
6、20g，购于湖北省实验动物研究中心（合格证号为 0001450） 。MT200 Morris 水迷宫视频分析系统，成都泰盟科技有限公司。1.2 实验方法大鼠随机分为 3 组：假手术对照组（10 只） 、改良模型组（15只）及传统模型组（20 只） 。具体实验方法如下。改良模型组：大鼠术前 12h 禁食，自由饮水。以 10%水合氯醛（350mg/kg，ip）麻醉后，将大鼠仰卧位固定于鼠台，颈部皮肤剪毛备皮，碘伏酒精常规消毒。切口位于颈正中线左侧旁开 0.5cm处，长约 1cm。钝性分离皮下组织后，于切口正下方的斜方肌与气管夹角处可见颈总动脉搏动。分离出颈总动脉后，以 4 号丝线双重结扎。术中动作
7、轻柔，避免钳夹和过分牵拉迷走神经，注意无菌原则。行间断缝合。术后 3d，每天以碘伏消毒伤口及周围皮肤。 3d4后于颈正中线右侧旁开 0.5cm 处切开，进行相同手术。传统模型组：大鼠麻醉、固定，取颈正中切口，切口长约1.5cm。钝性分离皮下组织，于一侧肌肉间隙中分别分离出颈总动脉，以 4 号丝线双重结扎。完成一侧后，进行另外一侧。其余同改良方法。假手术对照组：双侧颈总动脉不结扎，余同传统模型组。1.3 指标测定术后 60d 观察大鼠成活率以及学习记忆成绩。使用 Morris 水迷宫对大鼠进行学习记忆能力的测定2。Morris 水迷宫实验分为两部分： 定位航行实验：用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆
8、的获取能力。实验历时 6d，第 1d 让大鼠自由游泳 2min；从第 2d 起，每天分上、下午两段，每段训练 4 次。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中， 系统自动记录大鼠寻找并爬上平台时所需时间(逃避潜伏期 )及运动轨迹，每次训练间隔为 60s。如果大鼠在120s 内未找到平台，须将其引至平台，这时潜伏期记为 120s。空间搜索实验：在第 6d 最后一次训练后撤除水下平台，在同一入水点将大鼠面向池壁放入水中，系统自动记录其在 120s 内跨过原平台相应位置的次数及运动轨迹。51.4 统计学分析计量资料以均数标准差（s）表示。使用 spss12.0 for windows 软件。
9、对计量资料进行 t 检验，取 =0.05 作为检验水平；对大鼠成活率进行 2 检验，也取 =0.05 作为检验水平。2 结 果术后 60d，改良模型组死亡 3 只，存活 12 只，存活率 80.0%；传统模型组死亡 11 只，存活 9 只，存活率 45.0%（表 1） 。与对照组比较，两个模型组大鼠逃避潜伏期明显延长，在 120s 内穿越平台的次数明显减少（P0.05） （表 2） 。表 1 两种血管性痴呆模型大鼠成活率的比较表 2 两种血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力的改变 与对照组比较，* P0.013 讨 论2VO 模型是血管性痴呆研究中常用的模型之一。有文献报道报道，传统 2VO 法动物
10、存活率仅为 12.5%3，我们实验中传统方法的动物存活率也只有 45.0%。在实验中，传统模型组大鼠在结扎了双侧颈总动脉后，出现哮鸣音样呼吸，抽搐，动物恢复缓慢，甚至6持续昏迷直至死亡。而行改良模型组的大鼠则没有出现这些症状。传统方法存活率较低的原因分析有以下两个：由于采取正中切口，分离两侧颈总动脉时难免会对迷走神经有所牵拉甚至损伤；一次性结扎两侧颈总动脉，椎动脉不能迅速代偿以提供脑部所需营养，导致脑部缺血改变严重。改良模型组动物存活率高达 80.0%，优越性显而易见，其优点：采取颈正中线旁切口，利于分离颈总动脉，减少了对迷走神经的牵拉和损伤；分次结扎，有利于脑部血流重新分配，脑部血供重新建立
11、，机体逐渐代偿适应。更接近临床上常见的脑部慢性缺血的病理过程。实际观察也发现，改良模型组大鼠术后苏醒较快，苏醒后对其进食和活动的影响也较小。经典的 Morris 水迷宫所检测的是大鼠在多次的训练中, 学会寻找固定位置的隐蔽平台, 形成稳定的空间位置认知, 这种空间认知是加工空间信息(外部线索) 形成的。平台的位置与大鼠自身所处的位置和状态无关, 是一种以异我为参照点的参考认知(allocentric cognition) , 所形成的记忆是一种空间参考记忆( reference memory) 。从信息的加工和提取方式来看, 这种空间参考记忆进入意识系统, 其储存的机制主要涉及边缘系统(如海马
12、) 以及大脑皮层有关脑区4,属于陈述性记忆(declarative memory) 。而临床健忘和痴呆的病人, 正是陈述性记忆首先受损而且比较突出5 。实验结果提示，两组模型大鼠逃避潜伏期明显延长，在规定时间内穿越平台的次数明显减少，空间记忆损害明显，成功建造了大鼠痴呆模型。7故而我们认为，采取颈前区正中线旁切口、间隔 3 天分 2 次永久性结扎同侧颈总动脉的方法，可以成功建立血管性痴呆模型，且较传统 2VO 法动物成活率显著提高，实验成本降低，实验周期缩短；在慢性脑缺血和慢性脑低灌流性疾病尤其是血管性痴呆的相关研究中，不失为一种理想的建模方法。【参考文献】1蔡晶，杜建 . 血管性痴呆动物模型
13、的制作方法及其评价J.中医药学刊，2002，20(5):6172Vorhees CV，Williams MT. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memoryJ.Nature Protocols，2006，1(2)：8483张留宝，陈进贵，刘平，等.不同动物的不同脑供血动脉结扎后存活率比较J 南京军医学院学报，2002，24(2) ：734Moris RM.Developments of a watermaze procedure for studing spatial learning in the ratsJJ Neurosci methods，1984，11(1)：4785Squire LR, ZolaMorgan S. Memory, brain system and behaviorJ.Trends in Neuroscience,1988，11:170
