《黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询黄芪总苷对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体作用的研究作者：黄可儿李燕舞王汝俊王建华 【关键词】黄芪总苷药理学；,受体,胃肠激素；,脾虚；,疾病模型,动物；,大鼠 摘要：【目的】观察黄芪总苷(AST)对脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数变化的调控作用。 【方法】SD 大鼠采用胃饲大黄液(10?g/kg)方法复制脾虚模型；采用 Lewin 胃袋法及 Percoll 密度梯度纯化法分离与纯化大鼠胃粘膜壁细胞；按 10、20、30?g/L 设 AST低、中、高剂量组，在每 2?mL 脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST20?体外孵育，并设正常对照组与模型组
2、；采用放射配基结合法检测壁细胞胃泌素受体结合位点数。 【结果】模型组壁细胞胃泌素受体结合位点数下降，与正常对照组比较具有显著性差异（） ；AST 高剂量组可上调胃泌素受体结合位点数，与模型组比较具有显著性差异（） 。 【结论】黄芪总苷可增加脾虚模型大鼠因脾虚而降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数，可能是黄芪发挥益气健脾作用的主要有效成分(部位)。 关键词：黄芪总苷药理学；受体，胃肠激素；脾虚；疾病模型，动物；大鼠 黄芪是补中益气汤中的君药。既往研究显示补中益气汤对大黄所致“脾虚”大鼠低下的泌酸功能有一定的提升作用 ；采用黄芪精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询注射液腹腔注射对大黄
3、、利血平所致的“脾虚”大鼠降低的胃壁细胞胃泌素受体结合位点数有提升作用2-3 。作为黄芪主要有效部位的黄芪总苷(astragalosides,AST)，是否也能调节胃壁细胞的胃泌素受体结合位点数尚未见相关报道，本实验试图观察 AST 的这一作用。 1 材料与方法 11 动物 SD 大鼠，雄性，体质量 190?g230?g，购自广东省卫生厅实验动物中心，合格证号：0005609。 12 主要仪器和设备 3K30 高速冷冻离心机(Sigma);XDS1 倒置生物学显微镜(重庆光学仪器厂)；HYS4 型多头细胞收集器(上海跃进医疗器械厂)；2XZ05 型旋片真空泵(浙江临海市精工真空设备厂)；DP5
4、500 型 计数器(Beckman)等。 13 主要试剂与药品 链霉蛋白酶(Pronase,BoehringerMannheim)；牛血清白蛋白(BSA，华美生物工程公司)；乙二胺四乙酸(EDTA，汕头市化学试剂厂)；羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES，Pharmacia);二硫苏糖醇(DTT，华美生物工程公司)；硅化聚乙酰胺吡咯烷酮(Percoll,Pharmacia);胃泌素标准品(纯度为 97%，Sigma)；胃泌素(比活度为629?Bq mol L，放化纯度为 963%，批号为200503，中国原子能科学研究院同位素室提供)；黄芪总苷由上海沪精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查
5、询丰生物科技有限公司研究所提供，批号为 20041021，含黄芪甲苷1021%；大黄由广州中医药大学第一附属医院药剂科提供，经鉴定为唐古特大黄；其他化学品均为国产分析纯。 14 动物分组与造模 SD 大鼠随机分成正常对照组、脾虚模型组。模型组以大鼠 1?kg/L大黄液灌胃(10?g/kg)，2 次d，连续 14?d；各组动物常规喂养，自由饮水。第 15 天上午处死，实验前不禁食。 15 大鼠胃壁细胞的分离与纯化 采用胃袋法分离大鼠胃壁细胞，经 Percoll 纯化后，台盼兰排除试验鉴定，细胞活率可达到 95%，细胞涂片苏木素伊红(HE)染色后鉴定细胞纯度可达 70%75%，调整细胞浓度为?6。
6、 16 黄芪总苷的体外孵育 设 AST 高、中、低 3 个剂量组，用 9?g/L 生理盐水配成浓度分别为 10、20、30?g/L，在每 2?mL 脾虚模型大鼠胃壁细胞悬液中加入AST?L，正常对照组及模型对照组则加入 PBS?20?L；37孵育 30?min，并振荡 100?r/min，1?000?r/min 离心 5?min，弃去上清，用 Medium?C(MC)液重新混悬，并保持 2?mL 的体积，进行放射配基结合实验。 上一页 1 2 下一页17 放射配合结合实验6 根据既往基础试验确定?胃泌素饱和终浓度为100?pmol/L，并以此为基础进行单点结合实验，求出各组大鼠胃壁精品文档欢迎
7、来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询细胞特异结合位点数。每样品均做总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)两组复管，加样后 37孵育 30?min，加冷 MC 液 720?L 中止反应，迅速用多头细胞收集器抽滤至玻璃纤维滤膜，并用冷 MC 液每管 2?mL 淋洗滤膜 3 次。烘干滤膜后，用统一打孔器将滤膜打孔，并置于一次性塑料测定管中进行 计数。胃泌素受体放射配基结合实验中总结合管(TB)、非特异性结合管(NSB)的加样顺序见表 1。 18 壁细胞胃泌素受体结合位点数(n)的检测 根据放射配基结合实验所检测 nTB 与 nNSB 之差计算特异性结合nSB，再以 nSB 与仪器计数效率(7
8、0%)之比计算 n 蜕变，以 n 蜕变与标记物放射性比活度 之比与 ncell 之积计算结合容量，然后根据结合容量进一步计算得出壁细胞结合位点数，计算公式如下：nSBnTB-nNSB，n 蜕变nSB07，结合容量（n 蜕变）ncell，壁细胞结合位点数 n结合容量0210。 19 统计分析 采用 SPSS?110 统计软件，以CompareMeans：oneWayANOVA(multiplecompare)方法进行统计。表1 胃泌素受体放射配基结合实验的加样顺序 2 结果 21 一般表现 造模结束后，大黄“脾虚”模型大鼠出现如下表现：腹泻明显，大便稀软不成形，带黄色黏液，扎堆，活动减少，进食减
9、少，被毛精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询枯黄无光泽，眼部分泌物多，喜欢闭眼；但体质量减轻不明显。 22 胃泌素受体放射配基结合实验测定的结果 大黄“脾虚”大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常对照组；采用黄芪总苷体外孵育，对其具有上调作用，并呈现剂量依赖趋势。结果见表 2。表 2AST 对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数(n)的作用 3 讨论 胃泌素(gastrin)是一类能引起胃酸分泌的胃肠道多肽激素。胃泌素通过与壁细胞膜上的胃泌素受体结合发挥生理活性，在胃肠黏膜疾病中起着双重作用：它既能刺激胃酸的分泌，又能刺激胃黏膜细胞的生长，维持黏膜的完整性。胃泌素与其受体的正常结合
10、是壁细胞发挥泌酸功能的前提，而胃泌素受体的活化又是胞内信号传递的直接前提 。因此，对胃泌素受体结合位点数的影响可能是药物作用的一个重要中间环节。 脾虚证主要表现为消化系统为主的多系统、多器官的功能低下。作为胃黏膜泌酸、营养及生长的主要激素，胃泌素与受体及受体后的信号传递与脾虚证关系密切，两者可能为脾虚证在消化系统的一个重要的病理表现。不少健脾益气、调理脾胃方药对胃泌素有明显的调节作用 。因此，推测胃泌素及其受体很可能是一些健脾益气方药对消化系统病证发挥药理作用的重要靶点之一。 已有的研究显示，黄芪在体外对标记胃泌素与受体的结合具有促进作用，在体内对脾虚证胃泌素受体具有向上调节作用精品文档欢迎来
11、主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询 。还有研究表明 ，大黄脾虚模型大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常大鼠，经黄芪注射液治疗后，其外观症状得到一定程度恢复的同时，壁细胞胃泌素受体结合位点数也增加。 近年来，人们对 AST 的药理作用及其机制做了大量研究，发现AST 具有抗病毒、肝保护、改善心脏功能、抗炎镇痛等方面的作用 。本实验对大黄脾虚大鼠模型胃壁细胞采用 AST 不同浓度体外孵育，结果显示 AST 对因脾虚降低的胃泌素受体结合位点数有上调作用，并呈现剂量依赖趋势。 综上所述，黄芪和 AST 均能增加因脾虚而降低的壁细胞胃泌素受体结合位点数，推测胃泌素受体可能参与了脾虚证的病理过程，
12、而黄芪的作用是通过调节胃泌素受体结合位点数，并通过胃泌素受体所介导的分泌、营养和促生长效应而实现的，其中黄芪总苷则可能是黄芪这一作用的主要有效成分(部位)，该结论有待进一步研究证实。 参考文献： 1周金黄，王建华中药药理与临床研究进展M 北京：军事医学科学出版社，1995：183 2聂克，王汝俊，王建华，等脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合容量及黄芪对其调控作用 中药药理与临床，2000，16(Suppl):39 3张根水，王汝俊脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察 中国中医基础医学杂志，2002，8(6)：44 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询4王汝俊，傅定中，邵庭荫，等补中益气汤对“脾虚”大鼠胃黏膜易损伤性的复健作用研究 广州中医学院学报，1995，12(3)：31 5聂克，王汝俊，王建华大鼠胃壁细胞的分离方法 世界华人消化杂志，1999，7(11)：994 6徐叔云，卞如濂，陈修药理实验方法学M 第 2 版北京：人民卫生出版社，199：， 7张根水，王汝俊，崔琦珍胃壁细胞胃泌素受体及受体后信号传递的研究 中国中西医结合消化杂志，2001，9(2)：121 8赵军宁，王建华，黄衡，等大鼠胃粘膜胃泌素受体的放射配基结合法 中国药理学通报，1999，15(6)：566 上一页 1 2 下一页
