《麻黄碱在大鼠脑缺血》由会员分享，可在线阅读，更多相关《麻黄碱在大鼠脑缺血（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询麻黄碱在大鼠脑缺血作者：王鑫 肖农 周江堡 张晓萍 【关键词】 血栓素；前列腺素；麻黄碱；脑缺血；大鼠 【Abstract】 AIM: To investigate the protective effects of ephedrine on the rats with cerebral ischemiareperfusion injury. METHODS: In vivo: Normal rats were randomly divided into 4 groups and injected respectively with ephe
2、drine （2， 4， 8 mg/kg） and equal volume normal saline, once every 3 d, totally for 4 times. The plasma concentrations of thromboxane B2 (TXB2) and 6ketoPGF1 were detected by radioimmunohistochemistry. The ratio of TXB2 to 6ketoPGF1 (T/P) was calculated. The subgrouping, administrated doses and manner
3、 in middle cerbral artery occlusion (MCAO) group are same as the normal control group; In vitro: The brain microvascular endothelial cells were cultured and divided into 3 ephedrine groups (2， 4 and 8 mg/L） and 1 control group （no ephedrine）. The plasma concentration of 6ketoPGF1 was detected after
4、2 h. RESULTS: In vivo: In the normal rats, T/P, the plasma concentrations of TXB2 and 6KetoPGF1 in the groups treated with 8mg/kg ephedrine 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询were significantly lower than those in the control group (P 0.05). In the MCAO rats, compared to the control group, the TXB2 concentra
5、tion and T/P in all treated groups were significantly lower (P 0.05); In vitro: The concentration of 6KetoPGF1 in each group was not different statistically (P 0.05). CONCLUSION: The protective effects of ephedrine on the MCAO rats may be related to balancing the ratio of TXA2/PGI2. 【Keywords】 throm
6、boxane； prostaglandin； ephedrine； cerebral ischemia； rat 【摘要】 目的: 探讨麻黄碱对缺血-再灌注损伤大鼠的神经保护机制. 方法：体内部分：正常大鼠，分为 4 组，每组 6 只，分别腹腔注射不同剂量（2，4，8 mg/kg）麻黄碱和等体积生理盐水，每 3日 1 次，共 4 次，应用放射免疫组织化学方法检测大鼠血浆中血栓素 B2 和 6 酮前列腺素 F1 浓度，并且计算两者比值. MCAO 模型大鼠分组、给药剂量及方法同于正常组. 体外部分：培养大鼠脑皮质微血管内皮细胞，分为麻黄碱给药组（培养基麻黄碱的浓度分别为2，4，8 mg/L）和对
7、照组（培养基无麻黄碱）培养 2 h 后检测 6 酮前列腺素 F1 浓度. 结果： 体内部分：正常大鼠：麻黄碱 8 mg/kg 组 TXB2，6KetoPGF1 和 T/P 低于正常对照组（P 0.05）. MCAO 模型大鼠：各给药组 TXB2 和 T/P 均低于对照组（P 0.05）. MCAO 模型对照组 TXB2，6KetoPGF1 和 T/P 高于正常对照组（P 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询0.05）. 体外试验：麻黄碱各浓度组 6KetoPGF1 与对照组的差别无统计学意义(P 0.05). 结论：麻黄碱对大鼠血浆 TXA2PGI2 平衡的影响可能与其对缺血-
8、再灌注损伤大鼠的神经保护性作用有关. 【关键词】 血栓素；前列腺素；麻黄碱；脑缺血；大鼠 0 引言 祖国传统医学认为，麻黄具有活血通络的功效，可明显改善中风后神经功能. 我们前期研究发现麻黄碱可以促进中脑动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)大鼠的运动功能康复，在蛋白及基因水平可以促进 GAP43 及 SYP 的表达增高1 ，对大鼠脑缺血-再灌注损伤有一定保护作用. 为此，我们试图通过体内和体外试验观测麻黄碱对 SD 大鼠 TXA2PGI2 平衡的影响，进一步探讨麻黄碱对大鼠脑缺血-再灌注保护作用的可能机制. 1 材料和方法 1.1 材料清洁级成
9、年 SD 大鼠 48 只，体质量 220250 g， 雌雄各半， 重庆医科大学试验动物中心提供. 随机分为 8 组：正常对照组，模型对照组，正常大鼠给药组与 MCAO 模型大鼠给药组（麻黄碱2， 4 和 8 mg/kg） ，每组 6 只. SL 型 CO2 培养箱（美国，Nuaire） ，荧光显微镜（日本，Olympus）, 电子分析天平（西班牙，COBOS） ，手术器械等. 血栓烷 B2 放射免疫分析试剂盒及 6 酮前列腺 F1 放射免疫分析试剂盒购自江苏血液研究所，人 VIII 因子相关抗原试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）. 1.2 方法 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我
10、主页查询1.2.1MCAO 模型制备参考 Koizumi 等2方法. 大鼠麻醉后，仰卧位固定于手术台上，行颈前正中纵行切口；分离暴露右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉，剥离迷走神经，结扎颈总动脉近端和颈外动脉根部；在颈总动脉距分叉部约 2 mm 处剪开一小口，将制备好的栓线插入颈总动脉并伸入到颈内动脉内，推进深度约为 1820 mm，微遇阻力时停止；栓线经过颈总动脉分叉处、颈内动脉进入颅底至较细的大脑前动脉，以阻断来源于同侧颈内动脉、大脑前动脉及大脑后动脉的血流供应，完成对右侧中动脉的阻塞；缺血 2 h 后取出栓线，实现再灌注. 1.2.2 大鼠脑皮质微血管内皮细胞培养采用陈彬等3方法进行细胞原
11、代培养. 1.2.3 处理因素体内试验，给药组每 3 日腹腔注射麻黄碱一次，对照组注射等体积的生理盐水，共 4 次，12 d 后 SD 大鼠心脏取血检测 TXB2 和 6KetoPGF1；体外试验，SD 大鼠脑皮质微血管内皮细胞培养第 7 日，传代至 6 孔培养板，接种密度为 3107/L，随机分为给药组 3 组（根据体内实验及麻黄碱的药物动力学4培养基麻黄碱的浓度分别是 0.2，0.4 和 0.8 mg/L）和对照组（培养基无麻黄碱） ，每组 6 孔. 加入无血清 M199 培养基培养半 0.5 h 后，2 h 后取培养基检测 6KetoPGF1 的浓度. 1.2.4TXB2 和 6keto
12、PGF1 浓度测定用放射免疫方法检测血浆TXB2 和 6ketoPGF1 浓度及培养基 6ketoPGF1 浓度. 试剂盒由苏州盛苏州大学血液研究所提供，严格按照试剂盒步骤进行. 结果由精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询重庆医科大学附属儿童医院核医学室检测（GC911 放射免疫计数器，中国科技大学科技实业公司中佳光电仪器分公司）. 统计学处理： 用 SPSS 13.0 进行处理分析 . 检测结果以 xs 表示. 各组均数先行方差齐性检验，各个样本均数的比较先进行方差分析，组与组间采用 SNKq 检验，正常对照组和模型给药组之间进行T 检验，P 0.05 为检验水准. 2 结果
13、 2.1 大体观察各组动物在实验过程中进食、活动均无影响, 生长发育良好, 无中毒症状及死亡. 2.2 大鼠脑微血管内皮细胞培养显微镜观察分离的微血管段形态各异，长短不等，呈单枝或多枝状（图 1A） ；3 d 可见细胞分裂增殖形成散在细胞群落，7 d 融合成片状，细胞紧密排列，互不重叠，呈典型的铺路卵石样结构（图 1B） ；传代培养细胞形态同原代培养（图 1C）. 原代与第二代内皮细胞进行人因子相关抗原免疫组化检测，细胞计数 90%以上细胞的胞浆和核膜周围被染成棕褐色（图1D） ，证实培养的内皮细胞为血管内皮细胞. A：分离的微血管段 100；B：培养 3 d 的脑微血管内皮细胞 100；C：
14、培养 7 d 的脑微血管内皮细胞 100；D：脑微血管内皮细胞因子相关抗原免疫组化 DAB 400. 图 1 大鼠脑微血管内皮细胞的培养与鉴定（略） 2.3 体内实验正常大鼠：麻黄碱 2 mg/kg 与 4 mg/kg 组 T/P 与精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询正常对照组相比，差异无统计学意义（P 0.05）. 麻黄碱 8 mg/kg组 T/P 低于正常对照组，差异有统计学意义（P 0.05，表 1）. MCAO 模型大鼠：麻黄碱各给药组 TXB2 和 T/P 低于模型对照组，差异有统计学意义（P 0.05，表 1）. 模型对照组 TXB2 与 T/P 高于正常对照组，
15、差异有统计学意义(P 0.05). 2.4 体外试验麻黄碱各浓度组培养基中 6KetoPGF1 的浓度（ng/L, 1144.7733.23, 1126.9746.34, 1134.5557.75）与对照组（ng/L, 1128.2956.93）相比，差异无统计学意义（P 0.05）. 3 讨论 麻黄（Ephedra）是我国宝贵的药用植物，早在神农本草经中就有麻黄治疗中风后遗症的记载. 宜明方中也有不少以麻黄治疗中风的临床验证. 千金中指出麻黄能 “破坚积聚” ，有名的小续命汤即以麻黄为主药. 目前仍有不少中医名家善用麻黄组成方剂治疗脑梗塞，并且有确切疗效5. 表 1 麻黄碱对大鼠 TXB2，
16、6ketoPGF1 及 T/P 的影响（略） aP 0.05 vs 对照. 缺血-再灌注损伤时 TXA2PGI2 平衡失调，可以通过氧自由基6的生成，局部血管收缩、血小板聚集等加重脑和脊髓的再灌注损伤7. Fang 等8发现在脑缺血模型大鼠的血与脑组织中TXB2 明显升高、6KPGF1 升高或不变. 通过药物治疗或其他疗法能降低 TXB2、调节 T/P 的比值，从而达到治疗脑缺血的效果. 阎福岭精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询等9就研究发现中药丹参可以通过调节 TXA2PGI2 平衡减轻脑组织病理损害达到其神经康复作用. 本研究体内实验表明，在大鼠脑缺血-再灌损伤时，MCAO 大鼠血浆中 TXB2 浓度及 T/P 高于正常大鼠，TXA2PGI2 平衡受到破坏. MCAO 伤后引起全身应激反应，通过神经、体液因素使机体释放儿茶酚胺、组织胺、缓激肽等活性物质，通过氧自由基的
