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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询阿司匹林滴眼液防治糖尿病性白内障【关键词】 糖尿病性白内障；,阿司匹林；,糖基化；,氧化损伤Preventive effect of aspirin eyedrops against diabetic cataract【Abstract】AIM: To investigate the role and mechanism of aspirin (Asp) eyedrops in preventing diabetic cataract. METHODS: Diabetic cataract was induced by streptozoci
2、n （STZ）. The diabetic rats (blood glucose 14 mmol/L) were randomly divided into 3 groups: lower concentration aspirin treatment group （0.5 g/L）, higher concentration aspirin treatment group (1 g/L) and untreated group . The former two groups received Asp eyedrops to the left eye, twice daily. Progre
3、ssion of lens opacification was recorded using slit lamp at regular time intervals. The levels of advanced glycation end products (AGE), glutathione reductase (GR), catalase (CAT), and glutathione (GSH) were determined spectrometically. RESULTS: Asp treatment delayed the progression of cataracts in
4、diabetic rats and the delay was 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询statistically significant from the 6th to the 9th week of diabetes (about 0.5-1 grade, P 0.05 vs untreated diabetic rats). An increase in CAT（about 260%） and GSH（about 20%）was found in the lens of Asp treated diabetic rats (P 0.05 vs untreate
5、d diabetic rats). The level of glycated lens protein in the untreated diabetic rats was significant higher as compared with that in Asp treated diabetic rats (28%, P 0.05). CONCLUSION: Asp can delay the progression of lens opacification only during the earlier stages. The delay may associate with th
6、e protective effect of Asp against inactivation of antioxidation enzymes and the formation of AGEs. 【Keywords】 diabetic cataract; aspirin; glycosylation; oxidative damage【摘要】 目的：探讨阿司匹林滴眼液抑制糖尿病性白内障的作用效果及作用机制. 方法： 复制链脲佐菌素（streptozocin, STZ）糖尿病大鼠模型，成模后（血糖 14 mmol/L）将动物分为低浓度阿司匹林治疗组（0.5 g/L） 、高浓度阿司匹林治疗组（
7、1 g/L）和精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询未治疗组. 治疗组每日给予 2次阿司匹林滴眼液治疗左眼，采用裂隙显微镜观察并记录晶状体混浊的程度，使用分光光度计测定晶状体中谷胱甘肽、糖基化终末产物(advanced glycation end product, AGE)的含量以及谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶的活性. 结果： 建立糖尿病大鼠模型后 6至 9 wk，与糖尿病大鼠相比，治疗组大鼠晶状体混浊程度降低 0.51个级别，谷胱甘肽的含量升高 20，过氧化氢酶的活性增强 260,而 AGE的含量降低 28，它们之间差异均具有统计学意义（P 0.05）. 结论： 阿司匹林可能通过
8、抑制晶状体蛋白质糖基化和氧化损伤的综合作用，延缓早期的糖尿病大鼠晶状体混浊.【关键词】 糖尿病性白内障； 阿司匹林； 糖基化； 氧化损伤0引言糖尿病性白内障已成为严重危害人群生活质量的疾患. 随着对糖尿病性白内障发病机制逐步深入的研究，药物治疗糖尿病性白内障越来越多的受到人们的关注. 研究表明晶状体蛋白质糖基化反应是糖尿病性白内障重要发病机制之一1. 晶状体蛋白质糖基化引起的构象改变2 ，以及蛋白质巯基暴露带来的氧化损伤3 ，均能增加晶状体蛋白质交联和积聚，最终导致白内障的形成. 而阿司匹精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询林是优秀的抗糖基化、抗氧化剂4. 本研究对使用阿司匹林
9、滴眼液治疗的糖尿病大鼠进行了系统的监测，对它的晶状体进行了综合的生化分析.1材料和方法1.1材料实验使用 50只 SD雄性大鼠（由第四军医大学实验动物中心提供） ，体质量 90160 g. 适应性喂养大鼠 5 d后，尿糖试纸检测大鼠尿糖均呈阴性. BQ900裂隙灯检查大鼠晶状体及角膜未见异常. 随机抽取 5只为正常对照组（A 组） ，其余大鼠腹腔注射 10 g/L STZ（链脲佐菌素，Sigma 公司）枸橼酸溶液， STZ 枸橼酸溶液0.22 m 微孔过滤器过滤后，以 65 mg/kg的注射量进行大鼠腹腔注射，同时向正常组大鼠腹腔注射同量的枸橼酸溶液5. 72 h后，取鼠尾血测血糖（乐康全 2
10、血糖检测仪 罗氏公司）. 13只大鼠血糖14 mmol/L被剔除6. 32只大鼠血糖14 mmol/L纳入实验.5只正常大鼠为对照组（A 组） ，32 只糖尿病大鼠随机分为低浓度治疗组 9只（B 组） 、高浓度治疗组 9只（C 组） ，未治疗组 14只精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询（D 组）. 配制 0.025 mol/L pH 7.4的磷酸钠缓冲液，阿司匹林分别以 0.5 g/L和 1 g/L的浓度溶于磷酸钠缓冲液. 给予 B组大鼠双眼滴 0.5 g/L阿司匹林磷酸钠溶液，C 组大鼠双眼点 1 g/L阿司匹林磷酸钠溶液，D 组大鼠双眼只点磷酸钠缓冲液，均为每日两次.1.
11、2方法1.2.1实验动物血糖的监测每月从大鼠尾端针刺取血，滴于血糖试纸上准确反应 5 s，使用罗氏血糖仪（爱康全）比色并记录.1.2.2晶状体混浊程度的监测使用 BQ900裂隙灯观察大鼠，使用裂隙灯自带数码相机照相. 每周根据晶体混浊情况分级. 分级标准参考牛津大学眼科实验室晶状体分级方法7. 每周观察一次并记录. 1.2.3分离大鼠晶状体 STZ注射 13 wk后，脱颈法处死所有大鼠，摘除大鼠双眼，分离晶状体，称重标记，分类保存于-70冰箱.1.2.4晶状体糖基化终末产物的测定8取备用沉淀参照Blakytny 的方法，绘制不同浓度 5氢甲基康醛的标准曲线，从标准精品文档欢迎来主页查询更多精品
12、文档,欢迎来我主页查询曲线上查出标本中糖基化终末产物的含量.1.2.5晶状体内谷胱甘肽及酶类的测定谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶的活性以及谷胱甘肽的含量都是通过南京建成化学试剂公司试剂盒测定. 组织蛋白浓度通过考马斯亮蓝法测定.统计学方法: 所有数据在 Windows环境下经 Spss11.0统计软件包处理. 重复测量资料的方差分析、完全随机设计资料的 OneWay ANOVA分析，显著性水平为 =0.05.2结果2.1血糖 STZ注射前，所有大鼠血糖均正常. STZ注射 72 h后32只大鼠血糖大于 14 mmol/L，占总数的 58（32/55） ，它们与注射前相比血糖明显升高（P 0.05）
13、. STZ注射 8 wk后 B组大鼠中 1只大鼠血糖降至 14 mmol/L以下，占总数的 3.1（1/32） ，各时间段血糖检测发现 B,C,D组间血糖差别无统计学意义（P 0.05）. 正常组大鼠血糖一直处于低水平，明显低于 B,C,D组大鼠（P 0.05，表 1）.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2.2晶状体混浊的程度在实验过程中对晶状体混浊程度分级并记录. 实验过程中，A 组大鼠晶状体一直保持透明，而 B组、C 组与 D组大鼠均于 STZ注射 4 wk后开始出现晶状体混浊，6 wk后混浊程度显著加剧，至 10 wk后出现乳白色混浊. 在 STZ注射后 6至 9 wk
14、，B,C 组大鼠晶状体混浊程度低于 D组大鼠，其差别具有统计学意义（P 0.05，图 1）.表 1血糖的变化（略）aP 0.05 vs A. A：正常组； B：低浓度阿司匹林治疗组；C：高浓度阿司匹林治疗组；D：糖尿病组. 动物在点药前后无明显结膜充血，角膜损伤等刺激症状. 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询图 1阿司匹林滴眼液对大鼠晶状体混浊程度的影响（略）而对 B, C组与 D组中血糖过高（血糖 20 mmol/L）的大鼠进行统计分析，发现晶状体混浊程度的差别无统计学意义（P 0.05）. 对 B, C与 D组中血糖微高的大鼠（1420 mmol/L）进行统计分析，发现第
15、 5至 11 wk B,C组大鼠晶状体混浊程度均明显低于 D组大鼠, 其差别具有统计学意义（P 0.05，图 2）.图 2阿司匹林滴眼液对血糖微高（1420 mmol/L）的大鼠晶状体混浊程度的影响（略）上一页 1 2下一页23 晶状体中糖基化终末产物、谷胱甘肽及酶类测定 STZ注射13 wk后，所有糖尿病大鼠晶状体均进展到 7级，对晶状体离体分析发现 D组晶状体中谷胱甘肽的含量及谷胱甘肽还原酶、过氧化氢酶的活性均明显低于 A组（P 0.05） ，并且 D组晶状体中过氧化氢酶的活性及谷胱甘肽的含量明显低于 B,C组（P 0.05） ，糖基化终末产物含量明显高于其他组（P 0.05）. 而及谷胱
16、甘肽还原酶的活性B,C,D组间差别无统计学意义（P 0.05）. 水溶性晶状体蛋白各组间差别无统计学意义（P 0.05，表 2）.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询表 2在 STZ注射后 13 wk时，晶状体中蛋白及酶的测定（略）aP 0.05 vs A, cP 0.05 vs D. A：正常组； B：低浓度阿司匹林治疗组；C：高浓度阿司匹林治疗组；D：糖尿病组.3讨论在实验中，我们采用阿司匹林滴眼液的给药方式，避免了重复腹腔注射引起的多发感染等全身副反应，也简化了操作. 阿司匹林滴眼液 pH值控制在 7.257.45 之间，Perlovich 曾报道阿司匹林溶液不稳定，容易分解9. 为了防止阿司匹林滴眼液失效，我们每次新鲜配置阿司匹林滴眼液，局部应用后大鼠未出现结膜充血等异常表现. 所以局部应用阿司匹林滴眼液是安全和简便的，滴眼液比腹腔注射更适用于眼科临床，在筛选其他防治糖尿病性白内障药物研究中，滴眼液是良好的给药途径.
