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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询血管生成素2 在食管鳞癌中的表达及意义【关键词】 血管生成素2 食管肿瘤 血管形成 免疫组织化学【Abstract】 Objective To investigate the expression of angiopoietin2 (Ang2) in human squamous carcinoma of esophagus and determine its relationship with pathological grades, infiltration and metastasis factors. Methods SP immun
2、ochemical method was performed to detect the expression of Ang2 in esophagus tissues from 54 cases with squamous carcinoma of esophagus and 22 normal persons. The pathological grades, infiltration and metastasis factors were statistically analyzed. Results Of 54 cases with squamous carcinoma of esop
3、hagus, 37 cases had positive expression of Ang2, with positive rate of 67.06%, which was significantly higher than that in normal esophagus (P 0.05). The expression rate of Ang2 increased significantly with the increase of pathological grading and lymphatic metastasis (P 0.05). Conclusions The expre
4、ssion of Ang2 may be positively related to clinical stages and pathological grades in squamous carcinoma of esophagus, indicating that Ang2 may be involved in the 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询neovascularization of carcinoma and in the occurrence and progression of squamous carcinoma of esophagus and he
5、nce can be a useful biological predictor of progression in esophageal carcinoma.【Key words】 Angiopoietin2; Squamous carcinoma of esophagus; Angiogenesis; Immunohistochemistry血管生成素2(Angiopoietin2 ，Ang2) 作为血管生成素家族(Angiopoietins,Angs)重要成员之一，在肿瘤血管生成中发挥调节作用。我们采用免疫组织化学方法对食管鳞癌组织标本中的 Ang2进行检测,旨在探讨其与食管鳞癌病理分级
6、及浸润、转移之间的关系。1 资料和方法1.1 临床资料精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询收集我院 2005 年 10 月至 2006 年 3 月行电子胃镜检查发现的原发性食管鳞状细胞癌患者 85 例，其中男 63 例，女 22 例；年龄4176 岁，平均 59.0 岁。病理分级采用常用 3 级分级法1 ，其中级 50 例、 级 27 例、级 8 例。另选 22 例正常食管组织标本作对照。所有标本经 10%甲醛溶液固定后常规石蜡包埋，制备成 5 m 厚的连续切片，用于免疫组织化学染色，并做常规苏木精 伊红染色，病理证实诊断。患者病理组织活检及术前均未接受任何放疗或化疗。1.2
7、主要试剂和方法羊抗人 Ang2(N18) 多克隆抗体为 Santa Cruz 公司产品，工作浓度 1100。SP 免疫染色试剂盒购自北京中山生物公司。实验方法：经 10%甲醛固定标本，石蜡包埋后切片，一抗为 1100 Ang2 多克隆抗体，二抗为生物素标记兔抗山羊 IgG，三抗为 ABC复合物，DAB 液显色，苏木精复染，以 PBS 缓冲液代替一抗作空白对照，用已知的大肠癌阳性片作为阳性对照。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.3 结果判断标准采用 Ang2 阳性染色强度结合阳性细胞所占百分比作为判断标准。在 400 倍显微镜视野下每张切片随机观察 4 个视野，将切片中平均
8、阳性细胞比例及染色深浅分别记 03 分。切片中无阳性细胞为0 分，阳性细胞25%为 1 分，阳性细胞 25%50%为 2 分，阳性细胞50%为 3 分；染色深度以多数细胞为准，无阳性细胞为 0 分，淡黄色显色为 1 分，棕黄色为 2 分，棕褐色为 3 分。再按这两项指标的积分相加将结果分为 4 级：0 分为“-” ；12 分为“+” ；34 分为“” ；56 分为“” 。其中“” 、 ” 为强阳性表达。1.4 统计学处理用 SPSS 10.0 统计软件行 2 检验，P0.05 为差异有统计学意义。2 结果精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2.1 Ang2 在食管鳞癌组织及正常
9、食管组织中阳性染色结果及分布在食管癌组织中， Ang2 的阳性表达率为 67.06%，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒状或线网状染色，分布于胞质及胞膜，部分微小血管也可见 Ang2 着色(图 1)。在正常食管黏膜组织中 Ang2 多为阴性表达，少数为弱阳性表达(表 1)。结果示 Ang2 的表达在食管癌组织及正常组织之间比较，两者间差异有统计学意义(P 0.05)。提示食管癌组织中 Ang2 呈高表达。表 1 食管鳞癌组织及正常食管组织中 Ang2 表达组织类型2.2 Ang2 的表达与食管鳞癌病理分级及浸润、转移的关系Ang2 表达有明显的异质性，强阳性表达的癌细胞常位于浸润前缘或癌组织的边缘，也有
10、少量成纤维细胞和血管内皮细胞等间质细胞表达阳性；正常对照组只有少数呈弱阳性表达。Ang2 在不同病理分级中表达阳性率比较，差异有统计学意义(P 0.05)，且Ang2 表达的阳性率与浸润深度及淋巴结转移相比较，差异均有统精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询计学意义(P 0.05)。提示 Ang2 阳性表达率随食管癌病理分级上升而升高(表 2)。表 2 食管鳞癌中 Ang2 的表达与肿瘤病理分级及其浸润、转移的关系上一页 1 2 下一页3 讨论肿瘤性血管是一种高度不成熟的血管。它的生成需要依赖于肿瘤组织产生的促血管生成因子的作用，克服维持血管稳定的诸多因素，包括离断血管周细胞、破
11、坏血管生成的微环境及刺激内皮细胞的增生和迁移。在众多的促血管生成因子中，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和 Angs 是现已发现的内皮细胞特异性因子，在控制血管生成过程中起着主导作用。Angs 是惟一含受体激动剂及抑制剂的促血管生成因子，编码 4 种结构相似的蛋白质，包括 Ang1 、Ang2 、Ang3 和 Ang4 ，均能与内皮细胞膜上的酪氨酸激酶2 (tyrosine kinase with immunoglobulin and epidermal growth factor homology domains2 ，Tie2
12、)特异性结合，作为调节血管稳定的信号，参与生理性及病理性的血管生成2 。Angs 家族中 Ang2 基因定位于第8 号染色体短臂上(8p23)，相对分子质量接近 75 000。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询天然的 Ang2 是 Ang1 拮抗剂，与受体 Tie2 结合，不能引起后者的磷酸化，从而可作为阻断血管稳定的信号，离断血管内皮细胞与周细胞的结合，引起血管的不稳定，使其更易接受其他促血管生成因子的刺激，在后者的共同作用下，引起肿瘤的血管生成，从而促进肿瘤的生长。目前研究3-4认为，Ang1 的表达与肿瘤血管形成的多少关系不大，而 Ang2 表达是肿瘤血管新生起始及加强
13、的因素，与肿瘤血管形成数目、临床分期、预后关系密切。Peng等5在研究 Ang1 和 Ang2 在肝细胞癌异位表达中的生物学效应中认为血管生成素基因参与了肝细胞癌生长与演进，但 Ang1 基因的表达没有明显增加肿瘤血管生长的作用，而 Ang2 能促进肿瘤的血管生成。Koga 等6运用免疫组化技术检测 Ang2 在胶质瘤中的表达时发现 Ang2 不仅表达在血管内皮细胞上，肿瘤细胞亦有表达，高表达的部位位于肿瘤周边的血管生成区。Ang2 在参与肿瘤血管生成中的具体作用机制尚不清楚。陈林莺等7在 Ang2 对胃癌血管生成的双向效应研究中发现 Ang2 对胃癌血管生成具有双向调节作用，即在 Ang2
14、表达上调的情况下 VEGF 促进血管生成，而Ang2 抑制血管生成则与 VEGF 的表达无相关性。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询本实验结果表明，食管鳞癌组织中 Ang2 的表达明显高于正常组织，且食管鳞癌中 Ang2 蛋白表达与其病理分级、浸润程度及淋巴结转移密切相关。肿瘤分化越差，Ang2 表达越强。有淋巴结转移的 Ang2 阳性率明显高于无淋巴结转移组，这说明 Ang2 与肿瘤的侵袭转移关系密切。Ang2 不仅在肿瘤相关血管的内皮细胞中有表达，而且在食管鳞癌组织中亦有表达，表明来源于肿瘤细胞的Ang2 很有可能参与了肿瘤血管的退化及新生血管的成熟。Ang2在肿瘤组织中
15、表达明显高于正常组织，特别是 Ang2 特异表达于肿瘤边缘的血管重建区，参与肿瘤血管新生的起始及延续过程，影响肿瘤生长和转移，并有望成为一种新的抗肿瘤血管新生靶向因子。其表达调控及活性调节的研究是目前阐明肿瘤血管新生机制并进行抗肿瘤血管新生治疗的研究热点及难点，所以这一研究仍有待于进一步深入。【参考文献】1 阎晓初.食管疾病M/史景泉，陈意生.现代外科病理学.北京：人民军医出版社，1998：107.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2 Li L Y, Barlow K D, MethenyBarlow L J. Angiopoietins and Tie2 in health
16、 and diseaseJ. Pediatr Endocrinol Rev,2005,2(3):399-408.3 Ahmad S A, Liu W, Jung Y D, et al. The effects of angiopoietin1 and 2 on tumor growth and angiogenesis in human colon cancerJ. Cancer Res,2001,61(4):1255-1259.4 Etoh T, Inoue H, Tananka S, et al. Angiopoietin2 is related to tumor angiogenesis in gastric carcinoma: poss
