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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用【关键词】微柱凝胶技术新生儿溶血病血清学检测 新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（haemolyticdiseaseofthenewborn） ，简称 HDN。在我国，因 ABO 血型不合引起的新生儿溶血病较为常见，Rh 血型不合引起的新生儿溶血病次之。新生儿溶血病严重时，可出现核黄疸，导致智力发育不全、脑瘫等后遗症。新生儿溶血病是严重影响新生儿健康的疾病。采用微柱凝胶技术对新生儿溶血病诊断的三项试验(直接抗球蛋白试验、抗体放散试验、血清游离抗体试验)的快速检出，更有利于
2、临床及时对患儿的诊断和治疗。微柱凝胶技术（microcolumngetImmunoassay）是目前国内外血型血清学检查方法之一。其设计理论先进，具有操作简单迅速、标本用量少、结果易判断、敏感性高和特异性强的优点。 1 材料与方法 1.1 试剂与仪器试剂：DianaGeLcoombs 卡（每卡含 8 个微柱孔管） ，每个微柱孔管含低离子强度缓冲液（LISS）浸泡中的微粒筛，加上多价抗人球蛋白（兔多克隆抗 IG 和单克隆抗 C3d 克隆 12011.D10） 。标准红细胞：0.8%O 型筛查细胞（）批号：8004801801001801101801201900201900101900301900
3、401。0.8%A 型细胞 0.8%B 型细胞批号：8001801800190180078018002501900201901001900501900601901001精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询。 DiasnvsticGrifolsS.A 卡：用于 ABO、Rh 血型、直接抗球蛋白试验，批号：500401016001010180010201800103018003010180060201。 DianaGeLCoombs 卡（抗人球卡）批号：800801018042010180750101811801018138010181470101。 仪器：专用的 DianaFua
4、g 离心机和 Diana 孵育器。 以上试剂和仪器均为 GRIFULS 公司产品，由沈阳麦迪卡尔有限公司提供。 1.2 样本来源 2007 年 1 月-2009 年 5 月住在我院新生儿科患儿（母亲是 O 型，患儿是 A 型或 B 型）出生后 1-3 天皮肤巩膜黄染，血红蛋白降低，血清胆红素高于正常值，对患儿采集 EDTA 抗凝血 3毫升共 541 份标本，实验室对所送标本必须在接到后 24 小内检查完毕。 1.3 实验方法 1.3.1 标本处理取患儿 EDTA 抗凝血 3 毫升，将血浆分离，剩余红细胞经 0.9%生理盐水洗涤 4 遍后，取压积红细胞 5 微升加入 Diana稀释液 2（低离子
5、介质液）500 微升中制成 1%红细胞悬液。剩余的压积红细胞加入和压积红细胞一倍的生理盐水，经 56水浴（手拿试管不断在水中轻轻震动 10 分钟） ，拿出保温离心提取粉红色上清（放散液）备用。 1.3.2 取 DignosticGrifols.SA 微柱凝胶卡一张，各孔加入患儿 1%红精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询细胞悬液 50 微升，放入 DianaFuge 离心机离心 10 分钟，观察结果。上一页 1 2 下一页1.3.3 取 DianaGeLcoombs 卡一张，拿出 6 孔分别标识ABO、ABO，按标识的血型分别在各孔中加入 0.8%A 型红细胞、0.8%B型红细
6、胞和 0.8%O 型红细胞（等量、O 型红细胞混合液）50 微升。前 3 孔各加入患儿血浆 50 微升(游离抗体试验)，后 3 孔各加入患儿红细胞放散液 50 微升（抗体放散试验） 。置 Diana 孵育器 15 分钟后，放 DianaFuge 专用离心机离心 10 分钟，按照微柱凝胶卡式法的三项试验说明书判读结果。 1.4 实验室新生儿溶血病诊断标准三项试验同时阳性或放散试验阳性可确诊为新生儿溶血病。若直抗试验和游离试验 1 项或 2 项阳性者，可判断为疑似新生儿溶血病。 2 结果 3 讨论 目前，在我国诊断新生儿溶血病的实验室检查主要是三项试验（直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验）
7、，直接抗球蛋白试验主要检测新生儿红细胞是否被来自母亲 IgG 抗 A（B）所致敏；游离抗体试验是患儿血清的 IgG 抗 A（B）来自母亲，如果新生儿血清中发现与其红细胞不配合的 IgG 抗 A(B)时，表明婴儿体内有抗体，可能受害；放散试验采用的是试管抗球蛋白技术和微柱凝胶技术，用放散液与标准 ABO 型红细胞反应， （与 O 型红细胞反应视做阴性对精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询照）均无凝集者，表明未查出抗体，A 型新生儿红细胞放散液只与标准 A 型红细胞凝集，表明放散液检出抗-A，而 B 型新生儿红细胞放散液只与标准 B 型红细胞凝集，表明放散液检出抗-B，而 A 型新
8、生儿红细胞放散液与标准 B 型红细胞凝集或 B 型新生儿红细胞放散液与标准 A 型红细胞凝集,表明放散液中检出抗-A，B。我们采用微柱凝胶技术对我院 541 例母婴血型不合且有严重的新生儿黄疸或高胆红素血症患儿的血标本进行了三项试验，结果表明：ABO 母婴血型不合新生儿溶血病（HDN）171 例，其中 OA115 例，OB56 例。ABO溶血病因红细胞的抗体结合较少，直接抗球蛋白试验常为阴性或弱阳性，血清游离抗体阳性，抗体释放试验阳性。Rh 溶血病直接抗球蛋白试验强阳性，游离抗体强阳性，抗体释放试验强阳性。我院新生儿科对溶血严重的患儿及时进行了换血治疗（ABO 溶血采用 O 型洗涤红细胞+AB
9、 血浆的血液，Rh 溶血采用 ABO 血型同患儿，Rh 血型同母亲的血液）微柱凝胶技术用于新生儿溶血病的检测，方法简便、快速、判断结果标准，可成为医院实验室常规检测方法。实验室能为临床快速准确提供试验报告，有利于患儿的早期诊断、早期治疗，对提高新生儿健康水平有很重要的意义。 参考文献 1胡丽华.临床输血与检验.全国高等医药院校规划教材. 2微柱凝胶卡式法和传统试管法检测新生儿溶血病 3 项结果比较.中国输血杂志,2009，22（11）:913-914. 3O 型孕妇血清 IgG 抗-A,B 对新生儿红细胞致敏作用的研究.中精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询国输血杂志,2009,22（7）：559-561. 上一页 1 2 下一页
