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1、1反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和1,7-二羟基 -3,8-二甲氧酮的含量作者：景明李季文樊秦师霞【摘要 】 ：目的 建立湿生扁蕾药材中木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的含量测定方法。方法 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为 ZORBAX SB-C18(4.6 mm250 mm,5 m)；流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,015 min,AB5050,1560 min,AB5545；检测波长 260 nm；流速 1 mL/min；柱温 30 。结果 1,7-二羟基-3,8- 二甲氧酮和木犀草素分别在 0.0840.84 g 和 0.
2、1841.84 g 范围内线性关系良好,相关系数分别为 0.999 4 和 0.999 7；平均回收率分别为 96.82%和 97.19%,RSD 均小于 3%。结论 该方法简便准确,重现行好, 可作为湿生扁蕾药材的质量控制方法。 【关键词】 湿生扁蕾1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮木犀草素反相高效液相色谱法Abstract：Objective To establish the determination of luteolin and 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone in Herbal Gentianopsis paludosa. Method T
3、he RP-HPLC with ZORBAX 2SB-C18 (250 mm4.6 mm, 5 m) comlum was used. Mobile phase was methanol (A)-0.4% H3PO4 (B) Gradient elution was used, 015 min, AB5050, 1560 min, AB5545. Detection wavelengh was 260 nm. Flow rate was 1.0 mL/min. Temperature of column was 30 . Result The linear relationship of 1,
4、7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone and luteolin were showed at the range of 0.0840.84 g and 0.1841.84 g (r0.999 4 and r0.999 7). The average recovery rate of 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone and luteolin were 96.82% and 97.19%, RSD3%. Conclusion The method was accurate, reproducible and can be use
5、d to control the quality of Gentianopsis paludosa.Key word：Gentianopsis paludosa；1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone；luteolin；RP-HPLC湿生扁蕾 Gentianopsis paludosa (Mum.) Ma 为龙胆科扁蕾属一年生草本植物。具有清热解毒、利湿消黄、健脾止泻等功能,用于肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎等1。由于受诸多因素的制约,致使目前藏药材使用不规范,缺乏理化控制标准, 因此 ,加强藏药材质量标准基础性研究,是保证和提高藏药标准化、
6、规范化,进一步开发藏药以及发展民族医药事业的重要课题。湿生扁3蕾主要含有 酮类、黄酮类、三萜类化合物2, 酮类和黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌、护肝等生物活性3-4,其中木犀草素是湿生扁蕾抗腹泻活性成分,而 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮是湿生扁蕾抗菌活性成分5-6,所以,选择这两种成分进行含量测定,为湿生扁蕾药材的质量控制提供可行的方法。1 仪器与试药Agilent HP1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ；AE-240 电子天平(瑞士布奇)；KQ-100 超声波清洗器( 昆山市超声技术有限公司)； R-200 旋转蒸发仪(瑞士布奇) 。木犀草素对照品(批号 111520-200
7、201)购自中国药品生物制品检定所；1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮对照品(自提,HPLC 归一化法测定纯度达 98%以上)；湿生扁蕾药材经甘肃农业大学陈垣教授鉴定为 Gen tianopsis pa ludosa Ma。甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件4色谱柱为 ZORBAX SB-C18(250 mm4.6 mm,5 m)；流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,AB5050(015 min),AB5545(1560 min)；检测波长 260 nm；流速为 1.0 mL/min；柱温 30 。理论塔板数均大于 3 000。色
8、谱图见图 1。2.2 对照品溶液制备精密称取木犀草素对照品 2.1 mg、1,7- 二羟基-3,8-二甲氧基 酮对照品 4.6 mg,置 10 mL 量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀, 精密吸取1 mL,用甲醇定容至 5 mL 量瓶中,作为对照品溶液。2.3 供试品溶液制备精密称取湿生扁蕾药材粉末 1 g,用 50 mL 丙酮回流提取 4 h,提取水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至 10 mL,摇匀,用 0.45 m 微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。2.4 线性关系考察精密吸取混合对照品溶液 2、4、8、10 、12、16 、18、20 L,进样测定,以对照品进样量(g)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,
9、绘制标准曲线。木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的回归方5程分别为：Y84.526X49.163,r0.999 4 和Y 112.431X117.129,r0.999 7。结果木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮分别在 0.0840.84 g 和 0.1841.84 g 范围内线性良好。2.5 精密度试验精密吸取混合对照品溶液 10 L,按上述色谱条件,重复进样 5次, 结果木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的 RSD 分别为1.63%和 0.97%,表明仪器精密度良好。2.6 稳定性试验精密吸取同一样品溶液,按上述色谱条件,分别于0、2 、4 、 6、
10、8 、12 h 各进样 10 L,木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的 RSD 分别为 2.71%和 1.33%,表明样品溶液在 12 h内稳定。2.7 重复性试验精密称取同一批湿生扁蕾药材 1 g,共 5 份,分别按“2.3” 项下方法制备样品溶液,各取 10 L 进样测定,结果木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的 RSD 分别为 2.79%(平均含量 0.051%)和61.36%(平均含量 0.167%)。2.8 加样回收率试验精密称取已知含量的湿生扁蕾药材(木犀草素含量：0.51 mg/g、1,7- 二羟基-3,8- 二甲氧基 酮含量：1.67 mg/g) 0
11、.5 g,共6 份, 每份精密加入一定量的木犀草素和 1,7-二羟基-3,8- 二甲氧基酮对照品,按 “2.3”项下方法制备样品溶液,依法测定含量,计算回收率。结果见表 1、表 2。表 1 木犀草素回收率试验结果（略）表 2 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮回收率试验结果（略）2.9 样品含量测定取 5 批湿生扁蕾药材样品, 按“2.3”项下方法制备供试品品溶液。分别精密吸取 10 L,按上述色谱条件测定,结果见表 3。表 3 样品含量测定结果（略）3 讨论首次通过 RP-HPLC 法测定了湿生扁蕾药材中木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基 酮的含量, 为湿生扁蕾药材的质量控制提供可
12、行的方法。7在选择提取溶剂时,对甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯进行了比较, 结果发现, 用丙酮作提取溶剂不仅效率高而且杂质少。流动相用甲醇- 水(5545) 等度洗脱时木犀草素的分离效果差,与相邻峰分不开,而用甲醇-水(5050)等度洗脱时,分离的时间又偏长。因此,选用梯度洗脱, 且在水中加入少量的磷酸,使峰的对称性得以改善,分离效果提高。【参考文献】1 张宝琛,甄润德 ,胡柏林,等.湿生扁蕾的化学成分研究J.中草药, 1980,11(4)：149.2 王焕弟,谭成玉 ,杜昱光,等.藏药湿生扁蕾的化学成分研究J.中国药学杂志,2005,40(14)：1059.3 李作平, 霍长虹,郑小莉.扁蕾的化学成分研究J.中国现代应用药学杂志,2003,20(1)：24.4 米 琴, 曹长年,赵宙光,等. 藏药湿生扁蕾有效成分的研究 J.青海师范大学学报(自然科学版),2005,23(2)：64.85 米 琴,曹长年, 王慧春,等.湿生扁蕾有效成分抑菌活性的测定J.青海师范大学学报 (自然科学版),2004,22(2) ：84.6 王焕弟,谭成玉,白雪芳,等. 藏药湿生扁蕾有效成分抑菌作用初探J.天然产物研究与开发 ,2005,17(5)：598
