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1、1全自动加样系统造成 ELISA 实验拖带现象分析【摘要】 目的通过对血液标本使用全自动加样系统在酶联免疫吸附测定(ELISA)实验中出 现的拖带现象进行分析，寻求有效的解决拖带现象的方法。方法用 Freedom EVO Clinical 和 ML-STAR 全自动加样系统加样，对 ELISA 实验出现拖带阳性的标本，采取手工加样用原试剂盒进行双孔复试，比较两种加样方法的检测结果。结果经手工加样 ELISA 双孔复检，结果均为阴性，证实为拖带阳性。结论拖带现象是由全自动加样系统加样针污染引起的，做好对仪器的维护保养可以减少拖带现象的发生，而最好、最根本的解决办法是使用一次性加样针。 【关键词】
2、 全自动加样系统;酶联免疫吸附测定;拖带现象;设备污染全自动加样系统在血站的使用日趋普及，但目前使用的多为固定加样针，这样分配位置在前的样本会使其后的样本出现不同程度的污染，引起假阳性或假阴性，也就是通常所说的拖带现象。拖带现象会导致大量标本待检或试验重做，这样不但增加了工作量，浪费试剂，更为严重的是有可能导致阳性标本的漏检，影响检验质量。现将本站 43 242 份标本的检测情况作回顾性分析，以寻求有效的解决拖带现象的方法。21 材料与方法1.1 标本来源 43 242 份标本均为本站无偿献血者现场留样抗凝标本。1.2 拖带现象的识别通常做酶免实验的 96 孔微板 8 行以AH 标示、12 列
3、以 112 标示。根据全自动加样系统的分配规律，运行方向是以微板从左到右，即从第 1 列开始，每次加 8 孔。ML-STAR 有三组钢针，每组 8 根针，通过循环轮换三组钢针模式实现样本的批处理;Freedom EVO Clinical 200 只有一组 8 根钢针。如果阳性(特别是强阳性) 标本后经同一根针所加标本出现一个或多个连续阳性，比如用 ML-STAR 加样，如果 A1 阳性，A4 或后面每隔2 孔也是阳性;若是用 Freedom EVO Clinical 200 加样，如果 A1是阳性，A2 或后面的板孔也是阳性，且越往后反应强度越弱则怀疑是拖带所致。1.3 仪器与试剂 Freed
4、om EVO Clinical 200 全自动加样系统(瑞士 TECAN)、ML-STAR 全自动加样系统( 瑞士 HAMILTON);HBsAg 试剂盒由厦门新创和北京万泰提供，抗-HCV 试剂盒由北京万泰和北京金豪提供，抗-HIV 试剂盒由珠海丽珠和北京金豪提供，TP 抗体检测试剂盒由北京万泰和厦门新创提供。31.4 实验方法按照试剂说明书要求编制加样程序，初、复检四项的加样顺序为 HBsAg、抗-HCV、抗-HIV 、TP ，先加初检，后加复检，最后加对照。对疑似拖带现象导致假阳性的标本挑出原试管和小辫进行复检，经手工加样双孔复试为阴性则证实为拖带所致的假阳性。2 结果本组 43 242
5、 份标本中因拖带现象引起的假阳性结果，见表1。表 1 拖带现象导致的假阳性结果有报道 1称污染现象与实验中加样程序的先后顺序有关，TP 加样顺序在后，所以出现前排孔阳性污染后排孔的现象以 TP 多见。本组结果显示，造成拖带现象最严重的是抗-HIV，抗-HCV 和 TP 也常见。而 HBsAg 采血前虽经金标试剂筛查，仍有不少漏检，其中不乏 HBsAg 强阳性者，但因拖带导致 HBsAg 假阳性则罕见，是与检测试剂的灵敏度有关，还是因为绝大多数献血者血液中含有抗-HBs 所致，或者是别的原因，值得进一步探讨。笔者通过观察发现，阳性反应越强拖带越严重，抗-HIV 最多连续拖带达 8 孔，同时发现同
6、一项目不同厂家的试剂拖带程度不同，这可能也跟检测试剂的灵敏度有关。另外一个有趣的现象是，因抗-HIV 阳性而造成后面拖带的百分之百都是 HIV 确证阳性，而抗-HIV 假阳性哪怕反应有多强都不会引起拖带现象。43 讨论对于全自动加样系统所出现的拖带现象，有报道用改变冲洗方式2或定期用 HCl 和 NaOH 冲洗和浸泡加样器的管道等方法来解决3，但笔者认为最好的解决办法是使用一次性加样针，这才是最根本的解决办法。在没有改用一次性加样针的情况下，遇到拖带现象则应将被污染的标本重新取样进行再检，以避免假阳性的产生，而因拖带所致的 HBsAg 假阴性则难以避免，因为如果拖带抗-HBs会中和 HBsAg
7、。现在有的血站利用全自动加样系统进行同步留样保存标本4，如果用的还是固定加样针，肯定会造成样本之间的交叉污染，这样的留样就会失去其意义，所以说使用一次加样针是势在必行。实践证明本站最近 Freedom EVO Clinical 200 全自动加样系统采用一次性加样针已无拖带现象出现。【参考文献】1 孙振秀,于仁波,马秀敏. 对加样针致高滴度阳性标本污染酶标板后孔的观察J.中国输血杂志 ,2005,18(1):46-47.2段友斌,寸伟 ,裘俊梅,等.全自动加样系统抗-HIV 阳性样本拖带现象对试验的影响及解决方案J.中国输血杂志,2007,20(5):385-386.53修淑丽,李燕 ,吴硕,等.阳性拖带现象产生的原因和解决方法J.中国输血杂志,2006,19(3):218-219.4潘海平,吴玉清 ,赵林.应用全自动加样仪留取血样的探讨J.中国输血杂志,2007,20(2):142-143.
