《依达拉奉改善大鼠血脑屏障损伤的AQP4机制研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《依达拉奉改善大鼠血脑屏障损伤的AQP4机制研究（8页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1依达拉奉改善大鼠血脑屏障损伤的 AQP4机制研究【摘要】 目的 研究大鼠脑出血后血脑屏障(BBB) 通透性与水通道蛋白 4(aquaporin4,AQP4)的关系及依达拉奉的干预作用。方法 采用自体动脉血注入尾状核法制成大鼠脑出血模型，免疫组化法观察 AQP4的表达，伊文思蓝法测 BBB 的通透性，干湿重法计算脑含水量表示脑水肿。结果 与对照组相比，模型组及依达拉奉组 BBB通透性均在出血后 6h 开始升高，1 3d 最高，依达拉奉组明显小于模型组(P0.01)。2 组 AQP4也于 6h 开始升高，13d 达到高峰依达拉奉组明显小于模型组(P0.05)。BBB 通透性与AQP4表达呈显著正
2、相关(r = 0.880,P0.01),与脑水肿变化趋势一致。结论 脑出血后产生的 AQP4增多,从而增加 BBB 通透性,参与脑水肿形成和发展，依达拉奉可抑制 AQP4的表达，从而有减轻脑水肿的作用。 【关键词】 脑出血;脑水肿;血脑屏障;AQP4; 依达拉奉【Abstract】 Objective To investigate the relationship between bloodbrain spinal fluid barrier (BBB) permeability and aquaporin4 (AQP4)and the effect of edavarone after ex
3、perimental intracerebral hemorrhage (ICH) in rats.Methods 2The ICH model were established by stereotaxic injection of autologous artery blood into caudate nucleus to detect AQP4 expression by immunohistochemical method, BBB permeability by EB method and brain water contents by dry wet weight method.
4、 Results In contrast to the controlled group, BBB permeability increased at 6 hours in ICH group and edavarone group after ICH, reached peak at 13 days, and which in edavarone group was lower than that in ICH group (P0.05). Edavarone expression increased at 6 hours in two groups reached peak at 3 da
5、ys , and which in edavarone group was lower than that in ICH group (P0.05). There was a significantly positive correlation between AQP4 expression and BBB permeability (r = 0.880, P 0.01).Conclusion After ICH AQP4 expression up regulate and BBB permeability increase, which could be inhibited by edav
6、arone【Key words】 Cerebral hemorrhage; Cerebral edema; AQP4; Bloodbrain spinal fluid barrier; Edavarone脑出血(intracerebral hemorrhage, ICH)脑水肿是影响患者病情程度及预后的重要因素,而后期血脑屏障损伤引起的血管源性脑3水肿是主要的原因。由于伊文斯蓝具有不能透过血脑屏障的特性, 本实验以检测脑组织中伊文斯蓝(EB) 含量来分析脑出血后血脑屏障和 AQP4的关系，进一步探讨依达拉奉改善脑出血大鼠血脑屏障损伤的 AQP4机制。1 材料与方法1.1 实验动物 成年 SD雄
7、性大鼠 90 只，由新乡医学院动物实验中心提供，体质量 280300g。标准饲料喂养和自由饮水，保持室温 2025及恒定的湿度。按数字表随机分为对照组、模型组、依达拉奉组各 30 只。每组在随机分为术后6h、1d 、3d、5d 、7d 5 个时相点，每个时相点下 6 只。1.2 实验方法 (1)模型组：以 4%水合氯醛 300mg/kg 腹腔麻醉。参考 Hua 等1方法固定大鼠。头正中切约 lcm 的纵切口，暴露前囟，使微量注射仪套管尖端移至前囟前 0.5mm，左侧中线旁 3mm，用大针头钻孔,穿透颅骨。用 40水温浴鼠尾约 10min取出擦干，在距鼠尾末端约 5mm 处剪断，用微量注射仪吸新
8、鲜血液约 50l，迅速插入钻好的孔内，向内进针 6mm。在 2.5min 内注入，留针 5min 后缓慢退针。拔针后无血液自针道返流，苏醒后出现神经功能缺损症状视为造模成功。(2)对照组：前期操作同模型组，但不注血液。(3)依达拉奉组：建模前每隔 12h 腹腔注射依达拉4奉 2mg/kg 直到相应的时相点 ,对照组及模型组用等量的生理盐水腹腔注射。1.3 检测方法1.3.1 干鲜质量的测定: 取血肿中心前半分区脑组织 ,准确称重置于 100110 的烤箱中烘烤 24 h 至恒重后,称取干质量，根据公式：脑组织含水量(%) = (鲜质量-干质量 ) /鲜质量来计算,精确度为 0.1。1.3.2
9、血脑屏障通透性测定：采用伊文思蓝甲酰胺法，大鼠处死前 1 h 经尾静脉注入 2% EB (2ml/kg) ,称取血肿内侧部分置于甲酰胺(1ml/100g 脑组织 )中 60孵育 24h。1000 r/ min ,离心5min,分光光度计 (= 632nm) 测定上清液 OD 值,根据标准曲线计算出 EB 含量。1.3.3 AQP4免疫组化检测：常规脱水,加一抗AQP4(150),加生物素标记山羊抗兔 IgG,脱片, 显微镜下观察。棕黄色为强阳性,黄色为阳性, 浅黄色为弱阳性,与间质颜色一致者为阴性。随机采集 5 个高倍视野 (1040)，采用双盲法计算每个高倍镜视野 AQP4阳性细胞表达率。5
10、1.4 统计学分析 实验数据计量资料均以s 表示，应用 SPSS 13.0 统计软件包对数据进行处理。多组间比较采用单因素方差分析检验，变量之间做两两的直线相关分析，P0.05 差异有统计学意义。2 结果见表 1、2、3、4 。表 1 脑出血后不同时间点脑含水量注：与假手术组比较，*P0.05;与 ICH 组同一时间点比较，#P0.05 表 2 脑出血后不同时间点脑组织 EB 含量 表 3 脑出血后不同时间点脑组织 AQP4表达含量 表 4 EB 含量与 AQP4表达的相关分析注：相关性检验，*P0.05),推测 BBB 通透性的高峰出现在 1 3d。BBB 通透性与 AQP4表达的相关分析显
11、示二者呈显著正相关,表明脑出血后 AQP4表达的上调可能引起7BBB 的开放,使 BBB 通透性增加。脑含水量在脑出血后 6h 也开始升高,3d 达到高峰, 之后开始下降,7d 仍然高于正常,与 AQP4表达的变化一致,二者呈显著正相关，与文献报道一致。脑出血后 AQP4表达水平和脑含水量在相应时间点上均高于对照组,提示 AQP4表达的上调导致脑含水量的增加,说明 AQP4与脑出血后脑水肿的形成有密切关系。本实验中依达拉奉组与出血组相比,BBB 通透性高峰出现的时间趋于一致,但峰值明显降低, 其他时间点脑组织内 EB 含量也低于脑出血组,表明依达拉奉能显著降低 BBB 的通透性，依达拉奉组 A
12、QP4表达及脑含水量在各时间点均低于脑出血组,说明应用依达拉奉能够降低脑出血后脑内 AQP4的表达及脑含水量。自由基清除剂依达拉奉是目前临床试验证明惟一有效的自由基清除剂3，具有自由基清除和抑制脂质过氧化的作用，可以抑制脑细胞 (血管内皮细胞和神经细胞) 的过氧化作用，静脉给药后可清除脑内的具有高度细胞毒性的羟基基团。体内试验显示4，依达拉奉还能抑制血管内皮细胞损害，抑制脑水肿、改善神经功能。【参考文献】1 Hua Y, Schallert T, Keep RF, et al. Behavioral test after intracerebral hemorrhage in the rat
13、J. Stroke, 2002, 33(10): 2 4782 484.82 Kiening KL, Frank KH,Landeghem V,et al. Decreased hemispheric aquaporin4 is linked to evolving brain edema following controlled cortical impact injury in rats J.Neuroscience Letters, 2002, 324(2):105108.3 渡边俊明，幸敏志，齐藤健一，等 .新规脑保护药 MCI186药理学的检讨J.药理与治疗，1997，25(suppl7):S181S188.4 陈勇，高朴，常娜，等. 依达拉奉治疗脑出血的临床疗效观察J.中国实用神经疾病杂志， 2008，11(6)：104105.
