依达拉奉在鼠氧自由基心肌损害和人病毒性心肌炎中的抗氧化作用研究

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1、1依达拉奉在鼠氧自由基心肌损害和人病毒性心肌炎中的抗氧化作用研究【摘要】 目的 研究依达拉奉在鼠氧自由基(OFR) 心肌损害和人病毒性心肌炎(VMS)中的抗氧化作用。方法 通过检测大鼠心肌细胞培育液的心肌细胞存活力(CMV)，超氧化物歧化酶(SOD)，丙二醛(MDA)，肌钙蛋白 T(cTnT)指标以对比依达拉奉、维生素 C 和辅酶Q10 对经氧自由基预处理的心肌细胞的保护作用。检测治疗前后血清 SOD，MDA, cTnT 指标以对比依达拉奉、维生素 C 和辅酶 Q10 对 VMS 患者的治疗作用。结果 (1)大鼠实验示：依达拉奉组 CMV高于维生素 C 组(P0.05)和辅酶 Q10 组(P0

2、.05),SOD 活性高于维生素 C(P0.05);MDA 低于维生素 C 组(P0.05)及辅酶Q10 组(P0.05); cTnT 低于维生素 C 组(P0.05)及辅酶 Q10 组(P0.05)。(2)VMS 研究示：经治疗，依达拉奉组患者 SOD 活性上升高于维生素 C 组及辅酶 Q10 组( 均为 P0.05); MDA 和cTnT 下降高于维生素 C 组及辅酶 Q10 组( MDA 均为P0.01，cTnT 均为 P0.05)。结论 依达拉奉在鼠 OFR 心肌损害和 VMS 的抗氧化治疗中有明显效果。 【关键词】 依达拉奉;氧自由基;病毒性心肌炎ABSTRACT Objective

3、 To study the anti-oxygen effect of 2edaravone on the injured myocardial cells of rats by oxygen free radicals (OFR) and on those of patients with viral myocarditis. Methods The detected index of cardiomyocytes viability (CMV), superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA) and troponin T (cTnT)

4、of the injuried myocardial cells of rats by OFR were applied in the comparative observation of the protective effect of edaravone, Vitamin C and coenzyme Q10 on the myocardial cells pre-prepared by OFR; the index of SOD, MDA and cTnT in serum detected before and after treatment were applied in the c

5、omparative observation of the therapeutic effect of edaravone, Vitamin C and coenzyme Q10 on patients with viral myocarditis (VMS). Results (1) The experiment on rats showed out: the CMV in edaravone group was higher than that in Vitamin C group (P0.05) and that in coenzyme Q10 group (P0.05); the SO

6、D activity in edaravone was higher than that in Vitamin group (P0.05); the MDA and cTnT in edaravone group were lower than those in Vitamin C group (P0.05) and those in coenzyme Q10 group (P0.05). (2) The observation of the patients with VMS showed out: the SOD activity of the patients in edaravone

7、group rose higher than that in Vitamin C group (P0.05) and that in coenzyme 3Q10 group (P0.05); the decrease of MDA and cTnT in edaravone group was more significant that that in Vitamin C group (P0.01) and that in coenzyme Q10 group (P0.05). Conclusions Edaravone is of obvious effect on the injuried

8、 myocardial cells of rats and in anti-oxygen treatment of the patients with VMS.KEYWORDS edaravone oxygen free radicals viral myocarditis国内外多项研究已证实氧自由基(oxygen free radicals OFR)对心血管系统的损害1-2,OFR 参与了心肌炎、心力衰竭、克山病和冠心病等多种心血管疾病的发生发展过程3，尤其在病毒性心肌炎(VMS)的过氧化损害中起重要作用。目前 VMS 的抗氧化治疗主要是大剂量维生素 C4,但剂量过大可使血液酸度升高，对心肌

9、亦有损害。其他抗氧化剂如辅酶 Q10 存在难溶解，易沉淀，质量不稳定等工艺问题。依达拉奉(Edaravon 3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮)是一种新型氧自由基清除剂5，该药能高效清除病变部位氧自由基，在脑缺血再灌注损伤的治疗中有一定疗效，因此用于 VMS 的抗氧化治疗应具有很大潜力。本研究旨在观察依达拉奉对氧自由基所致大鼠心肌损害的保护作用和对人 VMS 的治疗作用，探讨其机制，为临床寻找 VMS 抗氧化治疗的可行方法提供参考。41 材料与方法1.1 研究对象和材料 (1)实验动物：wistar 大鼠乳鼠 10 只，购于四川大学华西医学中心，平均体重(25020)g( 合格证号：川实动

10、管第 70 号)。(2) 临床患者： 2007 年 5 月2009 年 6 月间就诊于我院满足：发病 1 周内， 肌钙蛋白 T(cTnT)阳性，特异型柯萨奇 B 组病毒(CVB)IgM 阳性，符合 1999 年全国心肌炎心肌病专题研讨会提出的成人急性心肌炎诊断参考标准的患者 30 名，平均(18.715.62)岁。(3)材料：小牛血清由成都华西生物研究所提供 ;DMEM 培养基、胰蛋白酶由 GIBCO 公司(美国)提供;依达拉奉注射液(10mg/5ml)由先声药业提供(国药准字 H20031342);辅酶 Q10注射液(5mg/250ml)由西南药业提供( 国药准字 H10061135);丙二

11、醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD) 实剂盒均购于南京建成生物工程研究所。1.2 方法1.2.1 动物实验1.2.1.1 模型制作及指标测定 参考文献6方法在四川大学华西基础医学与法医学院实验室进行大鼠模型制作：wistar 大鼠无菌5条件下开胸取心，剪碎，胰蛋白酶消化成单细胞，用含胎牛血清、青霉素、链霉素的 DMEM 培养基制成心肌细胞悬液。接种于六孔板，密闭静置 37培养，第 3 天供实验用。用 Mossman 法测定心肌细胞存活力(CMV);肌钙蛋白 T(cTnT)测试仪测算 cTnT 浓度;硫代巴比妥酸(TBA

12、)法测算 MDA 活性;黄嘌呤氧化酶法测算 SOD 活力。1.2.1.2 实验分组及指标测算 大鼠心肌细胞随机分为 5 组：第组：对照组;第组：(H2O2 组)心肌细胞培养液中加入200mol/L H2O2;第组：(H2O2 加维生素 C 组) 培养液中加入200mol/L H2O2 和 50mg/L 维生素 C;第组：(H2O2 加辅酶Q10 组 )培养液中加入 200mol/L H2O2 和 5mg/L 辅酶 Q10 注射液; 第 组： (H2O2 加依达拉奉组 )培养液中加入 200mol/L H2O2 和 30mg/L 依达拉奉注射液。于 20min 后测算各组 CMV，SOD 活力，

13、MDA，cTnT 指标。1.2.2 临床研究1.2.2.1 药物干预及实验分组 本研究程序符合人体实验伦理标准，所有患者均需签署知情同意书。入院后诊断为 VMS 的患者按计算机产生的随机序号分为维生素 C 组、辅酶 Q10 组及依达拉奉组，均常规给予卧床休息，利巴韦林抗病毒感染及对症治疗。维生素 C 组 (第组)给予静脉维生素 C 500mg/d;辅酶 Q10 组(第组)6给予静脉辅酶 Q10 5mg/d;依达拉奉组(第组)给予静脉依达拉奉50mg/d 治疗;疗程 7 天。1.2.2.2 监测指标 所有患者治疗前检测血清 SOD，MDA, cTnT，治疗 7 天后复查 SOD，MDA, cTn

14、T，并测算各指标治疗前后差值。实验结束后对三组患者平均年龄、性别比(男/ 女)、入院cTnT 值和 CVBIgM 滴度等基本情况进行比较。1.3 统计学处理 实验数据采用“均数标准差(s)”表示，应用 SPSSl5.0 统计软件对实验数据进行分析，多组间比较应用单因素方差分析，组间两两比较应用 q 检验。2 结 果大鼠心肌细胞实验示(表 1):(1)H2O2 组心肌细胞 CMV 低于对照组(P0.01)，维生素 C、辅酶 Q10 及依达拉奉组 CMV 高于H2O2 组(各组均为 P0.01)，但均低于对照组 (各组均为P0.01)。依达拉奉组 CMV 高于维生素 C 组(P0.05)和辅酶Q1

15、0 组(P0.05)。(2)H2O2 组 SOD 活性低于对照组(P0.01);MDA 和 cTnT 均高于对照组 (P0.01)。维生素 C、辅酶 Q10 及依达拉奉组 SOD 活性均高于 H2O2 组(各组均为 P0.01);MDA和 cTnT 均低于 H2O2 组(各组均为 P0.01)。依达拉奉组 SOD活性高于维生素 C(P0.05);MDA 低于维生素 C 组(P0.05)及7辅酶 Q10 组(P0.05); cTnT 低于维生素 C 组(P0.05)及辅酶Q10 组(P0.05)。VMS 患者抗氧化治疗实验示 (表 2)：依达拉奉组 SOD 活性上升高于维生素 C 组 (P0.0

16、5)及辅酶 Q10 组(P0.05);MDA下降高于维生素 C 组 (P0.01)及辅酶 Q10 组(P0.01);cTnT下降高于维生素 C 组 (P0.05)及辅酶 Q10 组(P0.05，无统计学差异。表 1 各组大鼠心肌细胞生化指标比较表 2 各组 VMS 患者生化指标差值(治疗前后差值的绝对值)比较注：*与、组比较 P0.01, 与、组比较 P0.053 讨 论正常心肌代谢可产生 H2O2、O-2、OH 等高活性物质，即所谓 OFR。OFR 可作用于生物膜中多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化反应，造成心肌细胞膜脂质过氧化作用和巯基氧化作用，损伤细胞膜，使大量细胞外 Ca2+进入细胞内，造成细胞内钙超负荷，引起细胞致死性损伤。在正常情况下体内存在清除自由