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1、 南 昌 大 学 实 验 报 告学生姓名： 学 号： 专业班级： 实验类型： 验证 综合 设计 创新 实验日期： 实验成绩： 实验六 细菌淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定一、实验目的：通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定，加深对酶和酶促反应的感性认识。二、实验基本原理：酶是生物细胞产生的、能在体内或体外起催化作用的生物催化剂，是一类具有活性中心和特殊构象的生物大分子。生物体内的一切化学反应，几乎都是在酶的催化下进行的。微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶即表面酶。亦可根据其催化作用的底物的不同而命名，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等等。本实验对淀粉酶和过氧化氢酶（亦称接触酶）进行定性测定。细菌淀
2、粉酶能将遇碘呈蓝色的淀粉水解为遇碘不显色的糊精，并进一步转化为糖。淀粉水解后，遇碘不再显蓝色。过氧化氢酶能将过氧化氢水解为水和氧。三、主要仪器设备及耗材：1、 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌；2、肉膏胨、淀粉琼脂培养基；0.2淀粉溶液、革氏碘液、310过氧化氢、枯草芽孢杆菌培养液；3、试管（18mm180mm） 、试管架、培养皿（120mm） 、接种环四、实验步骤：（一）枯草杆菌培养液中淀粉酶的测定1、 取 4 支干净的试管，按 0(对照)、1、2、3 编号。放在试管架上备用。2、 往 1、2、3 号试管中分别加入 5、10、15mL 的枯草杆菌培养液，再往 1、2号试管内分别加入 10、5mL
3、 蒸馏水。往 0（对照）号管内加入 15mL 蒸馏水。3、分别往 1、2、3 号试管中加入 0.2淀粉溶液若干滴，迅速摇匀并记下反应的初始时间。4、迅速往以上 4 个试管内分别滴加若干滴碘液，迅速摇匀，这时各管均呈蓝色。5 、观察结果。注意各管的变化，记下各管蓝色完全消失的时间，并对结果进行分析。（二）细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验1、 将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至 45左右倒入无菌培养皿内（每皿约 10mL） ，共倒 5 个，静置待冷凝即成平板。2、 在无菌操作条件下，所有的平板在培养皿底部贴好标签后，用接种环分别挑取枯草杆菌和大肠杆菌分别在 2 个平板上点 5 个点。3、再打
4、开一个平板，在空气中放置 30 分钟，盖上培养皿盖。4、剩余的两个平板处理如下：一个涂布接种土壤悬液，另一个让学生用手在平板里按手印，或取硬币在平板里按一下，或打开培养皿盖摇头、咳嗽等，所有平板倒置于 37恒温培养箱内培养 24-48 小时。5、 观察结果，取出平板，分别在 5 个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。并记录结果。（三）过氧化氢酶的定性测定1、 将培养好的枯草杆菌和大肠杆菌斜面各 1 支放在试管架上。2 、用滴管吸取过氧化氢滴加入两管菌种斜面上。3 、分析结果，把所观察到的现象记录下来，进行分析。五、实验数据及处理结果表一 枯草杆菌培养液中淀粉酶的测定结果记录与分析试管编号 0 号 1 号 2 号 3 号蓝色消失时间结果分析：表二 细菌淀粉酶在固体培养基中的扩散实验结果记录与分析培养皿编号 1 号 2 号 3 号 4 号 5 号菌源淀粉酶产生情况注：产生记为阳性“+” ，不产生记为阴性“” 。结果分析：表三 过氧化氢酶的定性测定结果记录与分析菌种 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌过氧化氢酶注：有记为阳性“+ ”，无记为阴性“” 。结果分析：六、实验体会及对实验改进的建议
