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1、利用16S rDNA鉴定细菌的种属,1,鉴定细菌的种属,1.什么是 16S rDNA？,16SrRNA为原核生物核糖体RNA的一个亚基，16SrDNA就是编码该亚基的基因。 原核生物的rRNA含有3种类型：23S、16S、5S rRNA，它们分别含有2900、1540和120个核苷酸。 2.用16S rDNA进行细菌鉴定的原因 16S rDNA在原核生物中普遍存在。 16 S rDNA的相对分子量大小适中，约1500 bp，便于序列分析。 在16S rRNA分子中， 既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。 bp=base
2、pair,2,鉴定细菌的种属,图16S rDNA基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）,16S rDNA基因全长1542 bp，由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。,3,鉴定细菌的种属,4,鉴定细菌的种属,DNA的提取,挑取单菌落,然后置于装有100 LPrepMan Ultra的离心管中,涡旋震荡混匀30s左右，然后100水浴10min 后，以离心机最大转速离心3min，取10L上清液与490L ddH2O（即稀释50 倍），混匀作为下步PCR 的模板DNA 。提取的DNA 于-20保存。 检测
3、：核酸蛋白仪/琼脂糖凝胶电泳,5,鉴定细菌的种属,1525R 5 AAG GAG GTG WTC CAR CC 3,6,鉴定细菌的种属,PCR 反应条件,试剂使用量（ 20L体系） 模板DNA （10ng100ng） 2L Taq 酶(5U/L) 0.2 L 10Taq Buffer(Mg2+) 2 L dNTPs(2.5mM) 1 L 引物F(10 M) 0.5 L 引物R(10 M) 0.5 L ddH2O 13.8 L,1min30s,7,鉴定细菌的种属,判断16Sr DNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500 bp附近出现条带，说明16s rDNA已经扩增成功。,8,鉴定细菌的种属,9,鉴定细菌的种属,https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/,10,鉴定细菌的种属,11,鉴定细菌的种属,12,鉴定细菌的种属,13,鉴定细菌的种属,14,鉴定细菌的种属,15,鉴定细菌的种属,16,鉴定细菌的种属,17,鉴定细菌的种属,18,鉴定细菌的种属,19,鉴定细菌的种属,20,鉴定细菌的种属,21,鉴定细菌的种属,22,鉴定细菌的种属,23,鉴定细菌的种属,24,鉴定细菌的种属,25,鉴定细菌的种属,26,鉴定细菌的种属,27,鉴定细菌的种属,28,鉴定细菌的种属,29,鉴定细菌的种属,30,鉴定细菌的种属,
