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1、实验六 霉菌的形态观察13 生物基地 201300140059 刘洋 2014-11-13同组者：吕赞 刘沛余 马华峥一、 实验器材1. 菌种青霉、毛霉、黑根霉、黑曲霉 48h 马铃薯琼脂斜面培养物2. 溶液和试剂75%乙醇、20%甘油3. 仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，载玻片夹子，镊子，显微镜，接种环，U 形玻棒，平皿，试管，烧杯，滴管，无菌水等4. 培养基马铃薯琼脂培养基（简称 PDA，配方见附录）二、 实验目的1. 学习并掌握霉菌的形态观察方法和小室培养法。2. 了解四种常见霉菌的基本形态。3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。三、 实验原理1.霉菌概述霉菌的营养体是分枝的丝状
2、体。其个体比细菌和放线菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝生长到一定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 2.霉菌的观察霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为 3-10m）,常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。霉菌的观察可以采取直接制片法、透明胶带法和载玻片培养法（小室培养法）观察。霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易飞散，所以制标本时常用乳酸石炭酸棉蓝染色液，用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防
3、止孢子四处飞散，棉兰具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。本次实验采用载玻片培养法。3.载玻片培养法（小室培养法）通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。四、 实验步骤1. 培养小室及灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上面放一个 U型玻棒，在 U 型玻棒上放一块载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，于 121灭菌30min，烘干备用（如图） 。2. 琼脂块制备：通过无菌操作，用解剖刀由马铃薯琼脂薄层平板上切下 1cm2 左右的琼
4、脂块，将其移至培养小室的载玻片上，每片两块。3. 接种：通过无菌操作，用接种针从目标霉菌的马铃薯琼脂斜面培养物中挑取很少量孢子，接种于培养小室中琼脂块边缘上，将盖玻片覆盖在琼脂块上，每个菌接种两个平皿。4. 培养：通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加 3-5mL 灭菌的 20%甘油（用于保持湿度） ，盖上皿盖，28培养三天。5. 镜检：根据需要于不同时间取出载玻片用低倍镜和高倍镜镜检（不用油镜） 。五、 注意事项1. 若采用直接制片观察法，用镊子取菌和用解剖针分散菌丝时要细心，尽量减少菌丝断裂及形态被破坏，盖盖玻片时避免气泡产生。2. 在载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分
5、散孢子接种在琼脂边缘，避免培养后菌丝过于密集影响观察。六、 实验结果各菌种典型形态特征表菌种 形态特征青霉 菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。小梗顶端有孢子。曲霉 营养菌丝具有分隔；气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。根霉 菌丝无隔、多核、分枝状，有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗，其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托，中间有球
6、形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。毛霉 菌丝无隔、多核、分枝状，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，无囊托。青霉曲霉分生孢子梗菌丝有横隔球状顶囊、分生孢子梗以及孢子足状体根霉毛霉假根球形孢子囊七、 思考题1. 黑曲霉和黑根霉在形态特征上有何区别？黑根霉菌无隔，有匍匐菌丝和假根，假根周生处有直立的向上孢子囊梗，其顶端膨大成孢子囊，囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。黑曲霉菌丝有隔，且菌丝体分枝，气丝分化成分生孢子梗，顶端膨大形成球型顶囊，顶囊表面辐射出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生孢子。2. 如果教师要求你对某放线菌或霉菌不同发育期（基内菌丝气生菌丝孢子丝或繁殖菌丝）进行连续观察，请给出你的实验方案。小室培养，每隔一段时间在无菌操作下取出观察，之后放回继续培养，直至观察完成。八、 附录马铃薯培养基（PDA）配方马铃薯 200g蔗糖（或葡萄糖） 20g琼脂 15-20g水 1000mLpH 自然马铃薯去皮，切成块煮沸 2030min，然后用 1 层及 6 层纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至所需量，110灭菌 30min。
