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1、菠萝蛋白酶分离方法,1,菠萝蛋白酶分离方法,菠萝蛋白酶分离方法,2,菠萝蛋白酶简介,菠萝蛋白酶，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素。是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000，等电点为9.55。品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工，采用超滤方法进行过滤浓缩，低温冷冻干燥而得的。产品已被广泛应用于食品、医药等行业。,菠萝蛋白酶分离方法,3,菠萝蛋白酶制备方法及比较,工业生产上对菠萝蛋白酶的制备主要是从菠萝的下脚料中提取，制备工艺有高岭土吸附法、单宁沉淀法、盐析法和超滤法等。 比较:高岭土吸附法获得
2、的菠萝蛋白酶虽然纯度较高，酶活力在41010 Ug以上，但工艺流程长，原料消耗多，酶活总回收率低，会对环境有污染； 单宁沉淀法比高岭土法简单，原料消耗少，酶活回收率较低，产品酶活力在31510 41010 Ug，会对环境造成污染； 盐析法获得的菠萝蛋白酶活性较低，纯度与药用要求相差甚远,菠萝蛋白酶分离方法,4,超滤法能有效分离提取菠萝蛋白酶。从超滤法提取菠萝蛋白酶的工艺流程上看，其操作步骤简单，并且该法具有无相变、低温、能耗少、活力损失小、操作简单等特点，应用于菠萝蛋白酶的浓缩和分离，不仅能保护其活性，降低生产成本，使用的有机溶剂可回收再生产，基本上没有废物排放，而且超滤透过液还可用作饮料添加
3、剂，可以达到清洁生产的要求；另外，超滤法分离得到的菠萝蛋白酶质量好，纯度高，能达到医药级水平。,菠萝蛋白酶分离方法,5,超滤法,超滤法提取菠萝蛋白酶的主要工艺操作包括： 压榨。将菠萝下脚料洗净，用压榨机压出汁液，加入0.05 苯甲酸钠防腐，迅速过滤除杂质。可采用压滤法或离心法去杂质。 超滤浓缩。将澄清液在管式超滤设备中进行浓缩，使体积浓缩至原体积的1/5。 沉淀。将浓缩液降温至04 ，边搅拌边加入-20 的95 乙醇，直至混合液中乙醇浓度为50，静置，使酶沉淀，移出上清液，即得湿酶。 干燥。将湿酶在0 下减压干燥或冷冻真空干燥即得菠萝蛋白酶精品。,菠萝蛋白酶分离方法,6,工艺流程如图 所示。超
4、滤法生产工艺和操作比较复杂，且设备一次性投资大。超滤浓缩后的浓缩液若再用高岭土吸附法或者单宁沉淀法提取，可大大节约其他辅助原料的用量，总生产成本减少，且产品质量好，纯度高，酶活力高，酶活总回收率高，经济效益明显比传统工艺好。超滤浓缩后的浓缩液用有机溶剂沉淀法提取精酶，由于需要低温使生产成本上升，但产品质量、纯度、酶活都优于前者，是菠萝蛋白酶升级换代的新工艺。,菠萝蛋白酶分离方法,7,菠萝下脚米 汁液 澄清 液 浓缩液 湿酶 酶制品 超滤法提取菠萝蛋白酶工艺流程图,压榨,去杂质,超滤浓缩,降温，加有机溶剂、沉淀,减压干燥,菠萝蛋白酶分离方法,8,单宁沉淀法,试剂：5苯甲酸钠溶液； 单宁溶液； 0
5、1EDTA溶液；05EDTA溶液； 15氯化钠溶液； 05乙酸锌溶液； 006抗坏血酸溶液； 05硫代硫酸钠溶液； 1L一半胱氨酸溶液。,菠萝蛋白酶分离方法,9,实验步骤,菠萝蛋白酶的提取：称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 rmin离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、01、02、03、04、06单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 rmin。离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物
6、。分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加01EDTA溶液100 ml搅匀，再将15氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以,菠萝蛋白酶分离方法,10,4 000 rmin离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加05乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加006抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加15氯化钠溶液20 ml搅匀，静止5 min，最后再加05EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 rmin离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂酶复合沉淀物。把洗涤剂酶复合沉淀物倒入烧杯中，加05硫代硫酸钠溶液20 m1，搅匀，静止5 min；加1L一半胱氨酸溶液10 ml，搅匀，以4 000 rmin离心7 min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。冷冻、干燥把提取的酶糊放入冰室中(一12)，低温冷冻1520 h，取出解冻，离心得酶膏，把酶膏倒人装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥610 h得干酶，研磨成粉状，低温保存。,
