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1、 广西南丹白裤瑶族mtDNA D-Loop HVR区研究 白裤瑶是瑶族中民族特色保留较为完整的支系之一，自称“努格劳”,因其男子穿及膝的白裤而得名“白裤瑶”,主要集居在广西南丹县和贵州荔波县相接壤的里湖瑶族乡、八圩瑶族乡和瑶山瑶族乡等地1.人类线粒体 DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）是一个由 16569 个碱基组成的闭合环状双链分子，由于母系遗传的特性，缺乏重组、进化速率高、群体内变异大等特点，而被广泛地应用于人类群体的起源、演化和亲缘关系以及疾病的遗传的研究。 本文采用聚合酶链反应（PCR）技术及 DNA 测序法对广西南丹白裤瑶族 mtDNA D-Loop HVR区
2、进行了研究， 为少数民族群体遗传学研究提供新的数据。1 材料与方法1.1 样本来源31 名体检健康的白裤瑶样本均采自广西河池市 南丹县 , 彼此间无亲缘关系，3 代均为白裤瑶族，所有研究对象均知情同意。1.2 mtDNA 的提取用消毒棉签刮取口腔黏膜细胞，浸泡于生理盐水中，将采集口腔黏膜细胞的棉签用生理盐水把口腔细胞清洗出来于 1.5mlEP 管中，进行13000 rpm,离心 15min,小心弃去上清 ,然后加入 200ul 10%chelex100树脂，56水浴 30min, 取出后振荡 5-10s,100水浴 10min, 离心3min,4保存，上清用于 PCR 扩增。1.3 HVR区的
3、 PCR 扩增PCR 反 应 总 体 积 为 50ul, 引 物 各 1 umol/L, 上 游 引 物 :5 -TTAACTCCACCA -TTACCACC -3, 下 游 引 物 :5 -GAGGATGGTGGTCAAGGGAC -3（由生 工生物工程 （ 上海 ） 股份有 限公司合成，扩增片段长度为 440bp），2Taq PCR Master Mix 25ul, DNA模板 5ul,去离子水补足 50 ul. 反应条件：94预变性 1min,94变性30s,58退火 30s,72延伸 30s,30 个循环后 72延伸 10min.1.4 PCR 产物的检测及测序每个样品均取 10l P
4、CR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色观察扩增结果； 40ulPCR 产物委托上海立菲生物技术有限公司进行测序。1.5 统计学分析测序结果与剑桥标准 Anderson 序列比较， 统计变异位点及变异类型。 按照公式 P=x2（ x 为每个个体单倍型频率）计算偶合概率，按公式 h =（1-x2） n / （ n - 1）（ n 为样本含量）计算基因变异度。2 结果2.1 HVR区的 PCR 扩增用 1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物大小及纯度，结果表明，31例白裤瑶样本均成功扩增，扩增片段大小为 440bp（见图 1）。2.2 HVR 区的多态性将 31 例白裤瑶族 HVR区的 PCR 扩增
5、产物测序后，所得的核苷酸序列分别与 Anderson 标准序列进行比较， 共检测出 88 个突变位点，其中以碱基置换为主，包括 30 个碱基转换，57 个碱基颠换，1 个碱基缺失，1 个碱基插入。 碱基颠换明显高于碱基转换、插入及缺失，碱基颠换占总碱基变异的 64.77%, 其中 A-C 的颠换占总碱基变异的39.44%（见图 2）。（图 2c） 中在 2240cm-1附近明显存在一个吸收峰， 为 PAN 的特征谱带，而碳纳米管在该处没有吸收峰。 可以认为已经成功地获得 MWNTs/PAN 复合物。2.3 MWNTs/PAN 复合物的热失重分析图 3 所示，碳纳米管性质稳定，在氮气保护条件下，
6、在加热到高温时，降解很少。 MWNTs/PAN 大约在 300开始降解，与纯的聚丙烯腈相比，起始降解温度变化不大 ,这揭示加入碳纳米管后，聚合物起始降解温度不受影响。 纯 PAN 的第二降解温度是 400左右，加入碳纳米管后，第二阶段的降解温度为 350左右，第二分解温度降低。 聚丙烯腈的热性能受碳纳米管的影响不大。2.4 MWNTs/PAN 复合物的 X 射线衍射分析从上图可以明显看出，碳纳米管（图 4a）在 26处有一个很强的衍射峰，与石墨的（002）面相对应；在 44附近的衍射峰较弱，与石墨的（100）面相对应。 ;PAN（图 4b）在 17和 29附近出现两个特征峰，分别对应聚丙烯腈中的 100 晶面和 110 晶面。 MWNTs/ PAN 复合物（图 4c）在 17， 26，29附近有衍射峰，对应于聚丙烯腈和碳纳米管的特 征 峰， 说 明 MWNTs/PAN 复合物的成功制备。3 结语通过简单的“一步法”制备出碳纳米分散均匀的 MWNTs/PAN 复合物。 碳纳米管在硝酸铈铵/硝酸溶液中超声后， 形成分散均匀的 MWNTs 溶液，铈离子引发丙烯腈聚合，成功制备出MWNTs/PAN 复合物。-全文完-
