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1、动物生物化学实验实验三血清蛋白含量测定一、弦8目的河s学习光谱光度法测定物质含量的原理s掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的基本原理和技术二、实验原理阀。1.光淦光度技术原理利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征,以此来确定物质性质、结构或含皿。目光谐分析技术分类:发射光谱分析技术:火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法吸收光谱分析技术:袋外、可见光分光光度法,原子吸收分光光度法和红外光谱法散射光谱分析技术:比洋法当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况:一部分光被散射,一部份光被吸收,另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0,透射光强度为I,I和Io之比称为透光度,即:T
2、=I即Tx100为T%祢为百分透光度。透光度的负对数称为吸光度A=-lgT=-lgUIo=lgIo/1La/mpert-5ee/怡参至菖=.Lambert押江-当一定的光线(In)通过呈色溶液时|“如果溶液的浓度(C)是一定的,则透过光线的强度(1)通过液层的厚度(L)的增加成指数函数的减少,即I=Iox10-KLEeer痔尘-当液层厚度(L)一定时,透过光线的强度随吸收光门一线物质浓度(C)增加而成指数函数的减少,即:|国国国国I-Iixl0e一h一二一=一朋一合并上两式:eTI=IoX10-KcL。取对数:-1gI/Io=KCLhA(0D)=-1gT=-lgI/Io=1gIo/I=KLC式
3、中A为吸光度或光密度(Copticaldensity),也可用0D表示;K为比例常数,称为吸光系数;L为溶液层厚度,称为光径;C为溶液浓度与书A(0D)故Lambert-Beer定律可表述为,当一单色=光透过呈色溶液时,光密度或消光度与被测溶液的浓度,3成反比。液层的二_1gT巳厚度成正比;透光度的对数-LgI/Io=1gIo/I=KLC据Lambert-Beer定律,当液层厚度单|3位为cm,浓度单位为mol/L时,吸光系数K称为摩尔吸光系数(3。7莲七复-当液层厚度为1cm,物质浓度为1m。l/L时在特定波长下的吸光度值。映物质的特征性常数。A(OD)=tC2分兄光度法的定春分析河峡丫躲=4C招、对同一物质,在特定测定条件下,是相同的常数A(OD)标=虫C林A(OD)木=一C札C#=A(OD)未/A(OD)#xC
