--用2-△△Ct法分析real-time PCR数据-----联合应用LightCycler Data Analysis软件和MS ExcelBy netmee，netmee163.引用请注明作者1、打开存取的数据文件，点击2、依次点击，，这是适合SYBR green为染料的选项点击step1：Baseline下的“change graph settings”小图标取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK”按钮，退出选项卡3、点击下的“change graph settings”小图标，取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK”按钮，退出选项卡4、在选项卡中拖动红色标记线，选取个条曲线都为直线上升部位5、可以在选项卡中观察是否需选取的是曲线直线上升部分观察绿线部分与S型曲线交叉的部分是否为直线6、如果确为直线，则左侧的“Crossing Point”值为所需要的Ct值。
7、依次选取下图菜单：将数据导出为文本文件8、打开所保存的文本文件，如图选取9、将数据粘贴入新建的excel文件，“Crossing Point”列即是Ct值，删除“Standard”和“Calculated Concentration”列10、将目的基因，本例中为“iNOS”的Ct值按标本对应剪切入beta-actin值右侧一列分别标记两列数据为“beta-actin”和“iNOS”11、设置所有Ct值的单元格格式12、数字选项卡，分类选择为数值，点击确定13、将E列（目的基因Ct值右侧一列）输入公式“=D4-C4”，求出目的基因与同管beta-actin Ct值之差，即△Ct14、向下拉复制公式，将△Ct列数值计算出15、在△Ct 列右侧一列插入公式“=POWER(2,(0-E4))”，此即目的基因相对beta-actin的相对表达量，即2-△Ct（2的-△Ct次方）16、在2-△Ct列右侧插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-△△Ct”列，复制公式填满所有标本对应的2-△△Ct空格17、至此，2-△△Ct法计算的各标本目的基因的相对表达量完成，2-△△Ct列的数据可以用统计软件进行分析。
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