实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,实 验 二蛋白质的两性反应与等电点测定,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,了解蛋白质的两性解离性质 掌握测定蛋白质等电点的方法,实验目的,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,P,COOH,NH2,P,COO,NH3,P,COO,NH2,P,COOH,NH3,pH=pI,pHpI,pHpI,兼性离子,阳离子,阴离子,实验原理,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,在等电点时蛋白质颗粒上的净电荷为零,缺乏同电相斥的因素,蛋白质溶解度最小,最容易析出沉淀,维持蛋白质胶体稳定的因素,表面电荷、水化膜,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,本实验配制了各种不同pH值的缓冲液,沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,实验器材与试剂,大试管、滴管、刻度吸量管,0.5酪蛋白醋酸钠溶液,0.01溴甲酚绿指示剂(指示范围: pH3.8-5.4,0.02M HCL溶液、 0.02M NaOH溶液,0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、 1.00M醋酸溶液,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,蛋白质的两性反应(1,实验步骤,取一干净试管,酪蛋白液10滴,溴甲酚绿指示剂3滴,观察溶液颜色 并解释现象,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,蛋白质的两性反应(2,滴加0.02M HCL溶液,边滴加边混匀,有最大沉淀产生,观察溶液颜色变化,至沉淀消失,观察溶液颜色并解释现象,继续滴加0.02M HCL溶液,边滴加边混匀,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,蛋白质的两性反应(3,继续滴加0.02M NaOH溶液,边滴加边混匀,有最大沉淀产生,观察溶液颜色变化,至沉淀消失,观察溶液颜色并解释现象,继续滴加0.02M NaOH溶液,边滴加边混匀,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,溶液呈蓝色,蛋白质的两性反应(1,实验结果,酪蛋白溶液呈碱性 (pH5.4),使溴甲酚绿指示剂显蓝色,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,H+ ,沉淀,蛋白质的两性反应(2,出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点,溶液由蓝色变成浅绿色(3.8pH5.4,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,继续加酸,H+继续增大,pHpI。
酪蛋白所带正电荷不断增加,同电相斥,沉淀溶解,沉淀完全溶解时,溶液显黄色(pH3.8,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,OH- ,沉淀,蛋白质的两性反应(3,出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点,溶液由黄色变成浅绿色(3.8pH5.4,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,继续加碱,OH-继续增大,pHpI酪蛋白所带负电荷不断增加,同电相斥,沉淀溶解,沉淀完全溶解时,溶液显蓝色(pH5.4,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,结论 1,酪蛋白的等电点在pH3.8-5.4之间,pH= pI时,蛋白质溶解度最小,蛋白质是两性电解质,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,取7支同样规格的干燥试管,精确加入各试剂,酪蛋白等电点的测定,注:单位均为mL,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,向每个试管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴, 加一管,立即混匀一管,静置30分钟后,以0、+、+、+、+表示各管的混浊度,并指出哪一种pH是酪蛋白的等电点,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,酪蛋白等电点的测定,1,2,3,4,5,6,7,实验结果,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,结论 2,4号试管沉淀量最多,说明4号管溶液的pH值为酪蛋白的等电点,即pI=4.7,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,什么是蛋白质的等电点? 在等电点时,蛋白质溶液为什么容易发生沉淀,思考题,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,实验项目 实验原理 试剂和器材 操作方法(主要步骤) 结果分析 思考题,请按时交实验报告,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,实验三 凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾,预 习,实验二蛋白质的两性反应与等电点测定,23,此课件下载可自行编辑修改,供参考! 感谢您的支持,我们努力做得更好。