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1、胃癌组织VEGF、MMP-9及PCNA表达的相关性及其与胃癌生物学行为的关系中文摘要前言肿瘤的发生机制十分复杂，不仅涉及多种癌基因、抑癌基因的变化，而且一些细胞因子在肿瘤的发生发展中也起到一定的作用。尽管这些基因、细胞因子对细胞的作用方式不同，作用途径和作用部位有别，但最终结果都将导致细胞的恶性增殖。因此，肿瘤的生长不仅是病变体积的增长，更重要的是细胞增殖活性发生变化，研究增殖活性是了解肿瘤生物学行为的一个重要手段。肿瘤细胞增殖活性的增加可能导致多克隆亚群的产生并有助于其中的某些亚群获得浸润、转移能力。增殖细胞核抗原（）是一种分子量为的酸性核蛋白，为多聚酶的辅酶。可作为细胞周期的内源性组织标记
2、物，其表达程度与细胞增殖周期关系密切，因此作为评价细胞增殖活性的指标之一。在许多恶性肿瘤如结肠癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌中，阳性表达率表示肿瘤细胞的增殖活性，与肿瘤转移潜能、复发均有显著相关性。肿瘤的生长是一个多阶段、多步骤并涉及到多因素的过程。在此过程中，微血管的形成同肿瘤生长和转移密切相关。现已证实，肿瘤细胞能分泌某些促血管形成物质称之为肿瘤血管形成因子（），对肿瘤血管的生成十分重要。血管内皮细胞生长因子（）在肿瘤血管形成中发挥着重要作用，血管内皮生长因子及其受体是血管生成过程中的关键因子，与肿瘤生长侵袭及转移关系密切。实体瘤增生和转移离不开血管生成，血管生成是恶性肿瘤迅速增殖、转移扩散的主
3、要条件之一，其中发挥着重要作用。基质金属蛋白酶（）是一类以为辅助因子的蛋白酶家族，在体内主要降解细胞外基质（），参与结缔组织的降解和重建、炎症反应、肿瘤扩散转移和缺血缺氧损伤等。体内多种细胞均能产生，如各种肿瘤细胞、成纤维细胞、血液中的单核细胞和巨噬细胞等。血管内皮细胞也能产生，内皮细胞产生的在血管发生、形成租再生中具有重要意义。基质金属蛋白酶（）是家族中的重要一员，它的底物为?基底膜和细胞外基质的主要成份型胶原酶，起骨架的作用，是降解基底膜和细胞外基质成分的蛋白水解酶，可促进癌细胞对周围组织的浸润，在肿瘤的浸润、转移及血管的生成中发挥重要的作用。具有转移倾向的癌细胞可以自身分泌或诱导其他细胞
4、分泌大量的，破坏基底膜的完整性，导致癌细胞向其他部位转移。血管发生极大的依赖于基质金属蛋白酶的活性，肿瘤新生血管的生长也可为基质金属蛋白酶抑制剂所抑制。能上调肿瘤血管化的损害程度，是血管发生启动系统中重要的一员。本文检测了人胃癌手术切除标本和与的表达，研究、和的关系，探讨三者在胃癌中促肿瘤生长的作用机制及相互关系，探讨三者与胃癌生物学行为的关系。材料与方法临床资料全部例胃癌标本均为我院年月年月间手术切除的胃癌标本，均经病理学检查证实为胃腺癌。其中男例，女例。中位年龄岁。所有病人术前均未接受任何治疗。标本采集手术后的肿瘤组织，避开缺麻坏死组织，切取大小，将一块标本装在一个小管中，的福尔马林保存液
5、保存，并且使保存液的体积为标本体积的倍。标记小管，并在记录本上做标本登记。将登记好的标本存于冰箱中，一个月左右，集中数例标本用石蜡包埋一次，石蜡切片厚度微米，石蜡块长期保存。主要试剂和仪器鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体，鼠抗人基质金属蛋白酶单克隆抗体，鼠抗人增殖细胞核抗原单克隆抗体，均购于福州迈新生物技术有限公司。即用型免疫组化试剂盒、抗原修复缓冲液购于福州迈新生物技术有限公司。方法石蜡切片常规脱蜡、水化。洗分钟次。抗原修复：抗原热修复法（水浴法）：取一定量的抗原修复液于烧杯中，放人盛水的电饭锅中，盖上锅盖进行热煮，至锅中水沸腾，再将组织切片放在耐高温染色架上，放进烧杯中，注意组织片一定要完
6、全浸泡在溶液中，继续煮分钟。煮好后，从锅中取出烧杯，室温下放置分钟，待冷却后从烧杯中取出切片。蒸馏水洗分钟次，洗分钟次。每张切片加滴过氧化酶阻断溶液（试剂），以消除内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育分钟。洗分钟次。每张切片加滴非免疫动物血清（试剂）封闭消除非特异性染色，室温孵育分钟。倾去血清，勿洗。滴加一抗（鼠抗人血管内皮生长因子单克隆抗体鼠抗人基质金属蛋白酶单克隆抗体，鼠抗人增殖细胞核抗原单克隆抗体），过夜。洗，分钟次。甩去液，滴加生物素标记的二抗（试剂），室温孵育分钟。洗，分钟次。甩去液，滴加链霉菌抗生物素一过氧化物酶溶液（试剂），室温孵育分钟。洗，分钟次。甩去液，显色剂显色（）。自来水充
7、分冲洗。苏木素复染。分化，洗返蓝。梯度酒精脱水。二甲苯透明，中性树胶封片。结果判定胞浆或胞膜呈棕黄、棕褐色颗粒者为阳性细胞。按染色强度和阳性细胞数两方面来计算评分：染色强度（阴性，：弱阳性，阳性，强阳性）；阳性细胞数（无阳性细胞，阳性细胞数，阳性细胞数一，阳性细胞数）。（）之和即为最后得分，得分者评为免疫组化阳性。胞浆呈棕黄、棕褐色者为阳性细胞。阳性细胞为阳性表达。癌细胞与基质中的纤维母细胞、单核吞噬细胞同时显示阳性颗粒的定为阳性反应，如果只有基质中的纤维母细胞、单核吞噬细胞显示阳性反应而肿瘤细胞阴性则定为阴性反应。?绝大多数阳性细胞以胞核棕褐色染色，部分也可胞浆着色。根据提出的方法记数个高倍
8、镜视野中个肿瘤细胞中的阳性细胞数，阳性细胞数占癌细胞总数的百分数为阳性细胞表达率，即为标记指数（）。对照试验：阳性对照，用已知阳性片重复染色；阴性对照，正常胃粘膜片染色；替代对照，用正常羊血清替代一抗。统计学处理采用软件分析。和表达之间的相互关系用检验。的统计指标以叉表示，不同组闻用检验。结果的表达例胃癌组织中有例表达，阳性率，阳性颗粒主要分布在癌细胞胞浆内，肿瘤血管内皮细胞也有部分表达。的表达例胃癌组织中有例胃癌组织中表达，阳性率，阳性颗粒主要见于癌细胞胞浆中。和的表达及其相关性和均阳性者例，（）（一）者例，（一）（）者例，和均阴性者例。二者统计学有意义（）。和的表达与的关系例胃癌组织的均数
9、为（）。阳性的为（），阴性的为（），二者相比前者显著升高（）；阳性的为（），阴性的为（），二者有显著性差异（）。、和与胃癌生物学行为的关系表达与患者的病理大体类型、生长方式无关（），丽与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关（）。表达与患者的病理大体类型、生长方式、分化程度无关（），而与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关（）。表达与患者的病理大体类型、生长方式无关（），而与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关（）。结论和的表达具有明显相关性，提示和表达问有着内在的联系。随着和表达的增加而增加，说明：二者对胃癌细胞增殖具有促进作用。随着胃癌浸润深度的加深、淋巴结转移程度的提高，、和的表达逐渐升高，说明其表达可能是胃癌发生发展的一个晚期事件，提示转移的发生。关键词：胃癌；?五、，。，（），
