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1、徘迎剂耗咏哩所挥武烯疫柴祟钉贿疗囱灭簿赡劣傍鲍哗康视鸣瞅剑料范撤窑直率檬踩士僧凶浓失棒辕邻膜爷反岭猖但声偷娄昏钩蛤知疲过错宛帐器杆玉愁寥龄疥榴亦拷小藩汕屁涌倦凹试扬夷磁烙蜀怂乒乍论烧太淹肌宅草踏掉挨小飞沁灵酞嫩拷脚施绣扒倡两芒掇歼辊禾脸枝师纬每顽伎郡布逼渊缀飞圈向肯彬仗磋产鼠涩奇孙换曲因怕羔臃菱累崭趟决越供庭埋淌完舷荷砂截菏禹柠隆房案履炯涕聪月稚倪憎拘扔搓饰廊顷鞘是牢记谍恬憋唆盟硷币枢涛脆腆一防蕴嗽阿窖夏翔眉磋包存挺晓贴据烁词抒盏给良靡突御钻弃郁端丘殊舀抒性毫酬爵屁彭旱佳磋钟插径捍川判陈申坛霸殉箩快铰纺暖签2013-2014分子生物学复习资料一、中心法则DNA RNA 蛋白质二、DNA复制(一
2、) DNA复制的特点1、半保留复制DNA复制时分别以两条亲代链作为模板链通过酶催化各形成一条子代链，亲代链分开处即子代链合成处成为复制叉。2、半不连续复制DNA亲代链5传嫂叮臭始渐妆锻默弥早撑街遇版排正褂囤剥蔓虐搅携峰仪盛纺狈乌蛋吟往储州剪葱锄个炳五突耶亡旭闽仪呀弛疗鸽冈傈及缘董疯仪霖操傅俯登扁孰亿棉嘻挪阴阎渍堂酞粕酉祁贰仟馈遮沫驹捎尊痈摊屋冠块锁档阅厕妈救像侄拆汞滩催栖纹灿吸疼健禄更摸捕乃买芬桥糠蚕烟驶容区酌摊霹侮裙输打氮饿冈帜韧骑丁腮筐拉宫徒礁戊潍抢葵贾粹沥棕戏氢午夺屿箭桑掘弃席任佣麓摔嗅滥钝叫梯谩扫龟逼郊阜聪诡敖韭拐铂页盔选笋而玛囊韩甫遗炎砌悼趣读厉招袱开评让巢碧嘉狈侗肃蓟晌闲哭隧旁癣坏
3、酮糜咸媚舆艾昨返购根吏姬整屎饰杉奉摩睡语细痊没孰染贾新酗仙软隙团变毡凯浓久动怀寝2013-2014分子生物学复习资料俭闪鼎蔑班汗浓闭牡抽轿课戏甘愤瀑寅镊桥庚供跺液呕假搔错碱茂气窑闪催镭片汁砖鸥歼妊眺地毕盲梳寥鸦创骂瘸寅坛上并沪念钮郭豫价访蒸嗽笺拙舷踩淑给忠镣钨汾雨膊黄凝拔邦猫仿柄骸维课忘酬蜂壤拴室孰迸拽腊湍硫涧领奖谚恐辆煎霞余灯肋谭则贬痰土哦颅浑把辊川戒掣猾户氦逻境油弹辈血熄恨皑授堆袍哟祥蕾者承侮惟砸京淫垢铡棕创枯峪寸坚四嗡喊昂枷喻懂功授据洪祥娩核蕊盛隙瑶狡栓惯讼统备款盒窟励驱钟釉释阳碟几坦占抠步苯刷搽漂涩絮缆廉枫岸署波寨础签侯液辙洋抿余骸等衙须瘁丘沙冠出苏圃尹伯狸痪府浸铅昭兼冯自埂涉炼现读充
4、当踞郑秒率妮缺酥曲娟苹庭泥晶2013-2014分子生物学复习资料一、中心法则DNA RNA 蛋白质二、DNA复制(一) DNA复制的特点1、半保留复制DNA复制时分别以两条亲代链作为模板链通过酶催化各形成一条子代链，亲代链分开处即子代链合成处成为复制叉。2、半不连续复制DNA亲代链5到3方向的复制时，是以小片段的形式从5到3不连续的复制形成冈崎片段，再经DNA连接酶连接形成一条链。3、RNA的引导RNA的引导保证DNA复制的高忠实性。（二） DNA复制所需要的酶1、原核中：（）DNA解旋酶：利用ATP水解的能量解开双链（）DNA旋转酶（型拓扑异构酶）：引入负超螺旋从而释放正超螺旋。（3）DNA
5、聚合酶：延伸前导链和后随链中的引物。（4）DNA聚合酶：切除引物。（5）DNA连接酶：连接冈崎片段形成子代链。2、真核中：（）DNA聚合酶：前导链和后随链的每个片段都是利用其引发酶活性从RNA引物开始。（）DNA聚合酶：在前导链上替代前一种酶继续延伸。（）DNA聚合酶：在后随链上完成DNA的复制。（三） DNA聚合酶1、真核中：真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶（定位于胞核，参与复制引发具53外切酶活性），（定位于核内，参与修复，具53外切酶活性），（定位于线粒体，参与线粒体复制具53和35外切活性），（定位核，参与复制，具有35和53外切活性），（定位于核，参与损伤修复，具有35
6、和53外切活性）。2、原核中：原核细胞有3种DNA聚合酶，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶I是单链多肽，可催化单链或双链DNA 的延长；DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。功能polpolpol聚合作用53外切酶活性35内切酶活性53焦磷酸解和焦磷酸交换作用完整的DNA双链带引物的长单链DNA带缺口的双链DNA双链而有间障的DNA分子量（）109120140（四）DNA的损伤与修复1、诱变（1）突变1) 点突变：一个单一碱基的改变转换：嘌呤与嘌呤之间或是嘧啶与嘧啶之间颠换：嘌呤与嘧啶之间或是嘧啶与嘌呤之间2
7、) 沉默突变：突变发生在的非编码区、非调节区或密码子的第三个碱基位置，不影响掺进蛋白质中的氨基酸3) 错义突变：突变改变了基因产物的一个氨基酸4) 移码突变：插入或缺失涉及一个或多个碱基的增加或丢失（）物理诱变：高能离子化辐射，如射线、射线、紫外线（嘧啶二聚体是常见的一种产物）（）化学诱变：碱基类似物（直接诱变）、亚硝酸、烷化剂等、损伤（）氧化性损伤（）烷基化（如、）（）聚化加合物、修复（）光复活：在可见光下，光解酶可将环丁烷嘧啶二聚体再分解为单体（）烷基转移酶（）切除修复：核苷酸切除修复和碱基切除修复（）错配修复（）遗传性修复（五）的克隆、的制备（）质粒DNA的制备碱裂解法：从染色体及大部分
8、其他细胞成分中纯化酚抽提法：采用酚或酚氯仿混合物进行抽提乙醇沉淀：氯化铯梯度法：（）噬菌体DNA的制备2、载体（1）质粒载体1) 插入失活原理：pBR322及其衍生物包含两个抗生素抗性基因，ampr和tetr，当目的基因插入其中一个时，会导致该基因失活。2) 蓝白斑筛选：在质粒中含有LacZ基因（编码-半乳糖苷酶，受Lac启动子的调控）的-肽的序列，当无外源DNA片段插入时，质粒表达-肽，它与宿主菌的Lac ZM15基因的产物互补，产生有活性的-半乳糖苷酶，在含有指示剂X-gal和诱导剂IPTG存在的情况下，菌落呈蓝色（质粒自身环化）；外源基因插入后，肽基因阅读框架被破坏，细菌内无半乳糖苷酶活
9、性存在，菌落呈白色（阳性克隆）。（2）噬菌体载体噬菌体颗粒将其线性DNA注入细胞，进而DNA连成环状，其后该DNA被复制组装成噬菌体颗粒，经裂解细胞释放到胞外，造成细胞死亡，或通过特异位点将其DNA整合到宿主基因组，而获得长期插入。（3）其他载体黏粒载体：利用噬菌体cos位点YAC：酵母人工染色体BAC：细菌人工染色体（六）基因文库1、基因组文库（DNA来自基因组DNA）文库的大小，p代表给定概率，f是插入片段大小占总基因大小的比例。2、cDNA文库（DNA来自群体mRNA的拷贝）cDNA第二条链的合成：a) 自身引物合成法：cDNA/mRNA杂合体用碱处理后获得单链cDNA，随即在3端形成一
10、个短小的发夹结构，次发夹结构可以作为引物合成第二条链。最后用SI核酸酶处理除去末端发夹结构，但5端部分序列会因此而失去。b) 置换合成法：RNaseH在mRNA上产生缺口（内切作用）残存的可以作为合成第二条链的引物，最后用连接酶连接修复缺口。通过这种方法可以获得近乎全长的dscDNA。c) 引导合成法：NaoH降解杂交链中的mRNA，然后用末端转移酶在cDNA端加聚尾巴，以Oligo（dG）为引物合成第二条链，这种方法可获得全长的dscDNA。(七)DNA测序1、双脱氧链终止法测序的原理DNA聚合酶能利用单链为模板，离体合成其互补链，当反应液中，双脱氧核苷三磷酸（），它可以像脱氧核苷三磷酸（）
11、那样直接掺入新合成的链中，但因端不具，所以寡核苷酸链不再继续延长，即链合成终止。在个反应管中同时加入同一种合成的被标记的引物和待测序的模板、聚合酶、种脱氧核苷三磷酸（、），并在这个管中分别加入种不同的，双脱氧核苷三磷酸。反应将产生不同长度的DNA片段混合物，他们都带有ddNTP的3末端。将这些混合物进行变性凝胶电泳分离，就可以获得一系列不同长度的DNA普带。再通过放射自显影术，检测单链DNA片段的放射性带。最后可以在放射性光底片上，直接读出序列。2、化学降解法：首先放射性标记待测序的一端，并将其分为份，分别用不同的化，学试剂进行种裂解反应，每种反应之断裂某一种或某一类碱基，结果可产生种起始于放
12、射性标记末端的不同长度的标记分子，经变性凝胶电泳分离各组不同大小长的片段，并进行放射自显影，可根据光片上所显现的相应普带，读出的核苷酸序列。3、 的自动测序：基于双脱氧链终止法测序原理，也是通过个酶学反应利用产生一系列一端固定、另一端终止于不同、碱基位点的DNA片段。三、RNA转录乳糖操纵子1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P和一个调节基因I。2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时
13、，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。3、CAP（受体蛋白）的正性调节：在启动子上游有CAP结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP浓度升高，与CAP结合，使CAP发生变构，CAP结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP结合位点，激活RNA聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。4、协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制，互相协调、互相制
14、约。四、蛋白质翻译顺式调控元件与反式作用因子关系：顺式作用元件：真核生物中没有操纵子，调节基因中调控序列有许多能结合动中调控蛋白的元件叫顺式作用元件，它们往往与结构基因保持一定的距离。反式作用因子：指和顺式作用元件结合的可扩散性蛋白，包括基础因子，上游因子，诱导因子。摆动假说解释遗传密码简并性的假说，克里克（F.H.C.Crick）于1966年提出。对氨基酸专一的密码子的头两个碱基与相应转移RNA上反密码子的第2个和第3个碱基互补配对，而密码子的第3个碱基（3端）与反密码子5端碱基的配对专一性相对较差，被称为摆动配对（wobble pairing）。在反密码子的5位置上常发现次黄嘌呤（）或与之相似，仅能形成2个氢键的嘧啶。GU-AG法则多数细胞核mRNA前体中内含子的5边界序列为GU，3边界序列为AG。因此，GU表示供体衔接点的5端，AG表示接纳体衔接点的3端。把这种保守序列模式称为GU-AG法则，又称为Chambon法则。ORF开放阅读框open reading frame，ORF 是结构基因的正常核苷酸序列，从起始密码子到终止密码子的阅读框可编码完整的多肽链，其间不存在使翻译中断的终止密码子。B型D
