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1、感谢您的阅览,动物细胞工程ppt,2,2.2.1动物细胞培养和核移植技术,3,动物细胞培养,4,一）、概念,是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖,二）、原理,细胞分裂增殖,5,三）、过程,幼龄动物,剪碎组织,原代细胞培养,细胞悬浮液,6,细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖,7,细胞接触抑制,细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加,8,有关概念,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细
2、胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养,9,归纳 过程,取 的组织、器官,细胞悬浮液,酶,贴满瓶壁的细胞,单个细胞,加入 液,动物胚胎或幼龄动物,胰蛋白,培养,接触抑制,原代 培养(分装前,1-10代细胞,10,培养,加 液,4050代细胞(细胞株,未,无限传代（细胞系,已,传代培养,胰蛋白,酶,11,有关概念,细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的
3、改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养,12,思考题,1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料,2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞,因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养,成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养,13,3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份,催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等,4、细胞膜的主要成份是什么,蛋白质和磷脂,5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗,
4、能,14,6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢,7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么,注意时间的控制,不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近,15,1、无菌、无毒的环境,保证细胞顺利的生长增殖,添加一定量的抗生素，定期更换培养液,添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等,四）、动物细胞培养的条件,2、营养,16,3、温度和PH,培养室中控制,使之达到 36.5 0.5, 7.27.4,培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2,4、气体环境,17,植物组织培养和动物细胞培养的
5、比较,全能性,增殖,蔗糖,动物血清,细胞株、细胞系,细胞,某些蛋白质,18,五）、动物细胞培养技术的应用,3）细胞的生理、药理、病理研究,1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植,2） 基因工程的受体细胞,19,前景展望,资料一,20,培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段,资料二,21,人工关节软骨再生,1.第一次手术: 从病人关节软骨中未 受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。 2.分离软骨细胞并
6、经三星期的体外 培养，使细胞数增加约1020倍。 3.第二次手术: 清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方,资料三,结果: 经过复健一年后即可恢复正常的生活,22,动物体细胞核移植技术和克隆动物,23,一）、动物细胞核移植的概念,动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体,克隆动物：用核移植的方法得到的动物,24,动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育
7、为动物个体,25,二）、分类,细胞分化程度低，恢复 全能性容易,细胞分化程度高，恢复 全能性困难,克隆动物:用核移植方法得到的动物. 克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物,26,27,28,去核卵细胞,供体 细胞,重组细胞,代孕母牛C,无性生殖,三）、体细胞的核移植过程,29,四）、体细胞核移植技术的应用前景,1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程,2、保护濒危物种,3、生产医用蛋白质 及组织器官的移植的供体,30,五）、体细胞核移植技术存在的问题,1、克隆动物基因
8、组重新编程的机制尚不清楚。 2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出 现早衰等问题。 3、生产克隆动物费用昂贵,31,2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 （ ） A获得不死性的细胞 B10代以内细胞 C原代细胞 D传代细胞,1、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养,A,D,课堂反馈练习,32,3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ） A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散 C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中 D、培养至50代后传代细胞
9、遗传物质没有发生改变,B,33,4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（,无毒的环境 无菌的环境 培养基需要加入血清 温度与动物体温相似 需要O2，不需要CO2 CO2能调节培养液PH,A、 B、 C、 D、,D,34,5、动物细胞培养的特点 （ ） 细胞贴壁 有丝分裂 细胞分化 接触抑制 减数分裂 原代培养一般传110代 A、 B、 C、 D,A,35,6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答： （1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。 （2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是,动物胚胎或幼龄动物
10、,剪碎,胰蛋白,使细胞与培养液充分接触，便于培养,36,3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为_ 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。,动物血清,10,原代培养,胰蛋白酶,细胞悬浮液,37,38,动物细胞融合与单克隆抗体,39,动物细胞融合,40,细胞A,细胞B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,41,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,42,细胞融合与融合诱导细胞融合物质,诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的病毒必须灭活。 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病
11、毒需要灭活,43,44,45,46,47,48,49,二、单克隆抗体,什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体,50,单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、灵敏度高,51,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,52,单克隆抗体的应用,与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高,应用主要有,1、临床诊断,2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤,53,54,55,56,Dr.Feng
