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1、药用植物“三叶青”的组培快繁技术研究杭州农业科技 2007 年第 6 期药用植物三叶青 的组培快繁技术研究钱丽华(杭州市农业科学研究院生物技术研究所,杭州 31002,4-)摘要以药用植物三叶青的腋芽为供试材料,通过开展腋芽外植体诱导技术 ,不定芽继代增殖技术及试管苗生根技术研究,形成一套完整的三叶青 组培快繁技术.试验结果表明:1/2MS+BAO.o3.O.5mg/1 可作为三叶青 腋芽外植体诱导配方 ,25d 腋芽平均萌发率最高达92%,在此诱导配方上,23 邮?m_2?s 的光照强度有利于腋芽的萌发,较 8tanol?m_2?s-1 下最高萌发率高出l5.38%;Ms 基本培养基+BA2
2、mg/1+NAA0.2mg/1 或 BA2mg/1 为不定芽继代增殖配方,不定芽平均增殖系数达 5.455 和 4,135,继代周期缩短到 3540d;1/2MS+20l 蔗糖+NAA0.2nwl 为三叶青不定芽生根培养基配方,l015d 不定芽生根率达到 98%以上.关键词三叶青;诱导;萌发率;生根率三叶青是葡萄科多年生蔓生藤本植物,分布于浙江,江西,福建等 lO 多个等省区,有效成分为黄酮类物质,医学临床试验表明具有清热解毒,消肿散结,祛风化痰,活血止痛的功效,可用于治疗 dxJL 高热,扁桃体炎,肝炎及病毒性脑膜炎等多种疾病,也是抗肿瘤常用药物,其三叶青乙酸乙酯提取物为最有效的成分,它不
3、但能减慢癌细胞的生长,而且对肝癌和血癌细胞株具有促凋亡作用 ,这一重要发现极大地推动了其在医学上的应用价值和前景,在国内已有少量三叶青药理,三叶青化学成分分析方面的研究报道.但三叶青野生资源已被狂采滥挖,已濒临灭绝,远远满足不了医学需求,作者拟通过对三叶青开展组培快繁技术研究,起到保护已濒临灭绝的三叶青野生资源和提供医药原材料,这项研究在国内外尚未见报道.1.2.2 不定芽继代增殖将带有三张叶片的不定芽接种到外加 4 种不同浓度的 6 一 BA 的培养基上 ,每个处理 l0 瓶,每瓶接种 3 株不定芽,置 25左右温度,46tanol-m-2-s-1 光照强度下培养,培养 35d统计增殖系数,
4、筛选单因素的适宜处理浓度;然后将筛选出的 6 一 BA 的适宜处理浓度与 4 种不同浓度的 NAA 进行组合处理,试验设 8 个处理组合,2 次重复,每个处理组合 l0 瓶,每瓶接种 3 株不定芽,置 25左右温度,46tanol?m-2?s-1 光照强度下培养,培养 35d 统计增殖系数,最终筛选出两种激素组合的适宜处理浓度,确定三叶青不定芽继代增殖培养基配方.1.2.3 不定芽生根将带有三张叶片的不定芽在节间分节处切断接种到生根培养基上,置 25左右温度,46tanol-m-2?s 光照强度下培养 ,统计生根率.1 试验材料与方法 2 试验结果与分析1.1 试验材料以三叶青腋芽,试管不定芽
5、为试验材料1.2 试验方法1.2.1 腋芽诱导将经 0.1%升汞消毒后的带茎段的单个腋芽接种于 1/21培养基附加 6 个不同 6一BA 浓度处理的培养基上,每个处理 30 瓶,每瓶接种 1 个外植体,分别置于 23panol?m-2?s-1 和 8p.mol?m-2?s 光照强度下培养 ,25d 左右统计腋芽萌发率.2.1 不同 6 一 BA 浓度处理对三叶青腋芽萌发的影晌由表 1 可见:在 6 个处理中,培养 25d 后,处理15 中腋芽萌发率均极显着高于处理 6,前 5 个处理中腋芽平均萌发率最高可达到 92%,即当 6 一 BA浓度从 0.03mg/1 逐渐上升至 0.5mg/1,各处
6、理腋芽萌发率之间不存在显着差异,但当 6 一 BA 浓度达到1mg/1,腋芽萌发率呈急剧下降,与前 5 个处理之间腋芽萌发率最大差值达到 35.75%,所以 1/21+BA0.030.5mg/1 可作为三叶青腋芽萌发培养基作者简介:钱丽华(975 一 ),女,浙江淳安人,农艺师,多年从植物生物技术研究.Tel:05718731t794;Emall:menoyqlhhotmail.corn?22?钱丽华:药用植物三叶青 的组培快繁技术研究配方.2.2 不同光照强度对三叶青腋芽萌发的影响23tanol?m?s 下三叶青腋芽的萌发率明显高于 8tanol?m?s,腋芽萌发率最高达到 100%,而 8
7、mol?m?S 一下三叶青腋芽萌发率最高为84.62%,两者相差 15.38%.因此可认为适宜的光照强度即 23tmaol?m?s 一更有利于三叶青腋芽的萌发(详见表 1).表 1 不同 6 一 BA 浓度处理及光照强度对三叶青腋芽萌发的影响2.36 一 BA 不同浓度处理对三叶青不定芽继代增殖的影响表 2 结果表明:在 6 一 BA4 个不同浓度处理中,以 6 一 BA1.5me/1 和 2.0me/1 处理三叶青不定芽继代增殖最好,平均增殖系数达到 3.125 和 4.135,两者之间不存在显着差异,但均显着优于 0.8mg/l 和1.0me/1 两处理,不定芽增殖系数差值达到 1.212
8、.22,因此可选择在 MS 基本培养基+6 一 I3A1.5mg/1 或 2.0me/1 基础上,外加不同浓度 NAA,进一步开展两种激素浓度组合对三叶青不定芽继代增殖的影响(详见表 2).表 26 一 BA 不同浓度处理对三叶青不定芽继代增殖的影响2.46 一 BA 和 NAA 不同浓度处理组合对三时青不定芽继代增殖的影响表 3 结果表明:处理因素 A 即 6 一 BA 之间不存在显着差异,这与表 2 结果一致;处理因素 B 即 NAA之问也不存在显着差异.在 8 个处理组合中,以处理 2,处理 4 和处理 5 对三叶青不定芽继代增殖效果明显,均显着优于其它 5 个处理组合,不定芽增殖系数为
9、 3.685.455,并极显着优于处理 3 和处理 6,因此 MS+6 一 BA2.0me/1+NAA0.2me/1 或 MS+6 一BA2.0me/1+NAA0.1mg/l 或 MS+6 一 BA1.5me/1+NAA0.05ml 均可作为三叶青不定芽继代培养的培养基配方.表 3 不同浓度 6 一 BA 与 NAA 组合处理对三叶青不定芽继代增殖的影响2.5 三叶青不定芽生根在试验中发现,将不定芽接种到 I/2MS+20I蔗糖+NAA0.2me/1,1015d 不定芽生根率达到98%以上 ,可作为三叶青不定芽生根配方.3 小结与讨论(1)适当浓度的 6 一 BA 和合适的光照强度有利于=n-
10、f-青腋芽的萌发,当浓度超过 1.0mtl,反而起到抑制作用,导致萌发率呈下降趋势,所以在三叶青组织培养中应控制适当的 6 一 BA 浓度,6 一 BA 浓度不宜超过 1.0me/1,并置于 23ttmol?m?s-1 光照强度下进行培养,有利于三叶青腋芽的萌发.(2)三叶青不定芽继代增殖将 6 一 BA 和 NAA 配合使用,通过不定芽基部发生的愈伤上新生芽可达到增殖的目的,虽然 MS+6 一 BA2.0me/1+NAA0.2me/tM+6 一 BA2.0me/1+NAA0.1ml 或MS+6 一 BA1.5l+NAA0.05ml 均达到较好的不定芽增殖效果,但从增殖系数看,MS 外加单一激素 6 一 BA2.0me/1 不定芽平均增殖系数也可达到4.135,因此我们认为 MS+6 一 BA2.0Jng/l+NAA0.2m 域 MS 外加单一激素 6 一 BA2.0me/1 可作为三叶青不定芽继代培养较适宜的培养基配方.参考文献:1刘世彪,陶民 ,姜业芳,等.五柱绞股蓝的组织培养和快速繁殖.植物生理学通讯.2007,43(3):308.2凌征拄,贾文流 ,余丽莹.等.红大戟的组织培养及植株再生.中草药.2005,36(10):1555 1557.3黄衡宇.药用植物青叶胆的组织培养.中草药.2005,36(2):261265.?23?
