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1、项目一 酵母细胞的固定化制备与应用实训过程 实验方法:海藻酸钠作载体包埋酵母细胞。一、 实验准备器材:烧杯、量筒、锥形瓶、玻璃棒、电子天平、水浴锅、艾式发酵管。药品:葡萄糖、海藻酸钠、无水氯化钙、干酵母。(二)制备固定化酵母细胞1、酵母细胞的活化: 过程 称取 1g 干酵母,放入 50ml 的小烧杯中,加入蒸馏水 10ml。用玻璃棒搅拌,使酵母细胞混合均匀,成糊状,放置 1h 左右,使其活化。2、配置物质的量浓度为 0.05mol/L 的 CaCl2 溶液: 过程称取无水 CaCl2 0.83g,放入 200ml 的烧杯中,加入 150ml 的蒸馏水,使其充分溶解,待用。艾艾式发酵管10ml
2、蒸馏水经 1h 活化的酵母 3、配制海藻酸钠溶液: 过程称取 0.7g 海藻酸钠,放入 50ml 小烧杯中,加入 10ml 水,用水浴锅加热,边加热边搅拌,将海藻酸钠调成糊状,直至完全溶化,用蒸馏水定容至 10ml。4、海藻酸钠溶液和酵母细胞混合 过程将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温,加入以活化的酵母细胞,进行充分搅拌,再转移至注射器中。(5 )固定化酵母细胞 过程以恒定的速度缓慢的将注射器中的溶液滴加到配制好的 CaCl2 溶液中,将形成的凝胶珠在 CaCl2 溶液中浸泡 30min 左右。0.83 CaCl2固体氯化钙溶液0.7g 海藻酸钠 水浴加热成糊状充分搅拌浸泡 30min准备清洗打
3、珠 (三)用固定化酵母细胞发酵1、过程将固定化酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗 23 次,洗去凝胶珠表面多余的电解质溶液,刚形成的凝胶珠应在 CaCl2 溶液中浸泡一段时间,以便形成稳定的结构。检验凝胶珠的质量是否合格,可以使用下列方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压,如果凝胶珠不容易破裂,没有液体流出,就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠,如果凝胶珠很容易弹起,也能表明制备的凝胶珠是成功的。将 150ml 质量分数为 10的葡萄糖溶液转移至 200ml 的锥形瓶中,再加入固定好的酵母细胞,置于25C 下发酵 24h。实验结果经过 24h 的发酵图示:产生气泡(Co 2) 。图示中产生气泡(Co 2) ,发酵实验成功。检测凝胶珠的质量清洗,除去富余电解质葡萄糖溶液-发酵厌氧发酵装置-观察现象 产生气泡