《医学硕士毕业论文答辩学术课题研究开题报告PPT模板》由会员分享，可在线阅读，更多相关《医学硕士毕业论文答辩学术课题研究开题报告PPT模板（32页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、医学毕业论文答辩,研 究 生：* 导 师：*教授,Genistein后处理介导大鼠海马CA1区 eNOS/Nrf2/HO-1信号通路及其神经保护作用,2018,MEDICAL THESIS DEFENSE,研究的背景及意义,材料与方法,实验结果与讨论,1,2,3,目录,CONTENTS,总 结,不足与展望,致 谢,4,5,6,第一部分 研究的背景及意义,PART 01,01,研究的背景及意义,对缺血性脑中风发病机制及防治的研究已成为医学界关注的重点,缺血大脑迅速获得血液供应是阻止缺血性神经元损伤的首要措施，然而，大量的血液迅速再灌注又进一步加重缺血组织的损伤-即缺血再灌注损伤,氧化应激和炎症是
2、缺血再灌注损伤病理生理机制的重要组成部分。脑缺血再灌注早期即有大量活性氧产生，并迅速启动损伤级联，加剧了初始损害最终导致神经元不可逆的损伤。因此，再灌注早期阻断氧化应激损伤是有效降低迟发性神经元死亡的关键,研究的背景及意义,那么，Genistein postconditioning(GPC，即缺血后给予Genistein)是否能通过eNOS/Nrf2/ARE信号通路降低氧化应激，从而发挥抗缺血性神经元损伤的作用？目前尚未见报道,本研究采用四动脉结扎(4-VO)全脑缺血模型，观察GPC对缺血性神经元的保护作用，并探讨其可能的分子机制，为临床防治缺血性脑中风提供理论依据,研究的背景及意义,第二部分
3、 材料与方法,PART 02,02,大鼠脑立体定位仪 大鼠脑微量注射泵 冰冻切片机 激光扫描共聚焦显微镜 酶标仪 电泳设备 摇床 Morris水迷宫 超低温冰箱等,组织裂解液 BCA蛋白浓度测定试剂盒 eNOS、p-eNOS、 Nrf2、HO-1一抗及其相应的二抗 NBT/BCIP显色液 NeuN、4-HNE、8-OHdG一抗及对应的荧光二抗 TUNEL试剂盒,材料与方法,SPF级成年雄性SD大鼠,随机分组及4-VO模型,材料与方法,再灌注5d检测 海马CA1区神经元 的凋亡及存活,实验方法及检测指标,再灌注30min, 6h,1d,3d 观察 p-eNOS, Nrf2, HO-1蛋白表达,免
4、疫荧光 染色法,蛋白免疫 印迹技术,TUNEL染色 及NeuN染色,再灌注3d观察 海马CA1区神 经元8-OHdG, 4-HNE, Nrf2, HO-1蛋白的 表达及定位,Morris水迷宫,再灌注7-9d， 检测大鼠的空间 学习和记忆能力,材料与方法,数据整理后，应用SigmaStat3.5统计软件进行统计学分析。所有计量资料数值以均数标准差表示，采用单因素方差分析(ANOVA)，多个实验组与一个对照组比较用最小显著差法(LSD)，各实验组之间比较采用q检验(Newman-keuls test)，P 0.05为差异有统计学意义,材料与方法,第三部分 实验结果与讨论,PART 03,03,图
5、1、 NeuN及TUNEL免疫荧光染色观察再灌注5d大鼠海马CA1区神经元的存活及凋亡,A,B,C,实验结果与讨论,图A：NeuN (红色) 染色 ：生存的神经元；TUNEL (绿色)染色：凋亡样神经元；图B：海马CA1区1mm 长度内NeuN 阳性神经元数量统计图；图C：海马CA1区1mm长度内 TUNEL阳性神经元数量统计图; *P0.05 vs. I/R 组， #P0.05 vs. GPC 组，n=5; 40, bar = 50m,小结 1 Genistein后处理对缺血性神经元损伤具有保护作用，eNOS激酶抑制剂L-NAME减弱了该作用，说明eNOS可能参与了此保护作用,Geniste
6、in后处理是否诱导eNOS激活（磷酸化）,实验结果与讨论,图2 GPC对大鼠海马CA1区神经元eNOS、p-eNOS蛋白表达的影响,图A：再灌注不同时间点p-eNOS、eNOS蛋白的表达；Sh：Sham组；R：再灌注；： I/R组；： GPC组；GPC: Genistein后处理；图B： p-eNOS蛋白表达统计图： n=4； *p0.05 vs. I/R组,A,B,实验结果与讨论,A,B,实验结果与讨论,图3 L-NAME对再灌注3d大鼠海马CA1区神经元 eNOS磷酸化水平的影响,图A：各实验组再灌注3 d p-eNOS蛋白表达；图B：各实验组再灌注3 d p-eNOS蛋白表达统计图，n=
7、5，*p0.05 VS. I/R 组；#p0.05 VS. Vehicle2 组,小结 2 Genistein后处理可诱导全脑缺血大鼠海马CA1区eNOS磷酸化水平升高，eNOS激酶抑制剂L-NAME可有效降低GPC诱导的eNOS磷酸化水平。 结果揭示：eNOS磷酸化水平升高参与了Genistein的神经保护作用,Genistein后处理是否能有效降低缺血再灌注后神经元的氧化应激损伤呢,实验结果与讨论,图4 全脑缺血再灌注3 d，各实验组大鼠海马CA1区 4-HNE及8-OHdG免疫荧光染色,A,图A：绿色: NeuN； 红色: 4-HNE； 图B：红色: DAPI； 绿色: 8-OHdG；n
8、=4-5； 40； bar =50 m,实验结果与讨论,小结 3 GPC能有效降低氧化应激损伤；eNOS激酶抑制剂L-NAME废除了此神经保护作用,Nrf2/ARE信号是生物体内抗氧化应激反应最重要的内源性防御系统。那么，GPC是否通过eNOS诱导了此信号通路,实验结果与讨论,C,图5 A-C GPC促进大鼠海马CA1区Nrf2蛋白表达,图A： 再灌注不同时间点核内Nrf2蛋白表达；图B：再灌注不同时间点核内Nrf2蛋白表达统计图，n=4，*p0.05 vs. I/R组；图C：再灌注3d 各实验组Nrf2 蛋白的表达及统计图；*p0.001 vs. I/R组， #p0.001 vs.Vehic
9、le2 组,A,实验结果与讨论,图5 D 免疫荧光染色法观察大鼠再灌注3d海马CA1区 神经元内Nrf2 的表达及定位,绿色：Nrf2 ；红色: NeuN； 黄色：二者的共定位；40； bar =30m,L-NAME,实验结果与讨论,图6 大鼠再灌注3d海马CA1区神经元内HO-1蛋白表达及其与Nrf2的共定位,图A-B： HO-1蛋白表达及其统计图； 图C： HO-1与Nrf2蛋白的共定位，*p0.05 VS. I/R 组； #p0.05 VS. vehicle2组；绿色：Nrf2； 红色：HO-1；蓝色：DAPI ；合成图为三者的共定位； 40； n=4-5； bar = 50m,实验结果
10、与讨论,小结 4,实验结果与讨论,海马是学习和记忆的重要部位，而海马CA1区是缺血最敏感的区域。那么，GPC是否能改善大鼠缺血后空间学习记忆能力,GPC可显著增加海马CA1区神经元胞核中Nrf2蛋白的表达并引起下游靶基因HO-1的表达，而L-NAME阻断了此作用。 此结果进一步揭示GPC通过eNOS诱导了Nrf2/HO-1抗氧化信号通路，从而阻断了缺血再灌注后迟发性神经元损伤,图7 GPC对大鼠缺血后空间学习和记忆能力的影响,图A-B： 潜伏实验和探索实验统计图；n=5；*p0.05 vs.I/R组；#p0.05 vs.GPC 组. 图C-D： 潜伏实验和探索实验大鼠游泳路程轨迹图,D,C,实
11、验结果与讨论,小结 5 GPC能有效的改善大鼠缺血后的空间学习和记忆能力,实验结果与讨论,第四部分 总 结,PART 04,04,总结,第五部分 不足与展望,PART 05,05,不足与展望,第四部分 致 谢,PART 04,04,实验和论文的最终完成是我的导师*教授精心指导的结果。谨借此机会，向我敬爱的恩师表示最衷心的感谢！ 感谢河北联合大学研究生学院、基础医学院病理教研室以及形态中心的各位老师所给予我的指导、关心与包容！ 感谢在学习及生活中曾经与我朝夕相处、共同努力、不懈追求的同学和朋友们！ 感谢我的父母、亲人和工作单位对我的支持与鼓励，正是他们的理解和关怀使我顺利的完成学业,致谢,医学毕业论文答辩,研 究 生：* 导 师：*教授,Genistein后处理介导大鼠海马CA1区 eNOS/Nrf2/HO-1信号通路及其神经保护作用,2018,MEDICAL THESIS DEFENSE
