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1、 燕山大学课 程 设 计 说 明 书卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟影响的设计学院（系）： 年级 专业： 0 学 号： 学生 ： 指导 教师： 教师 职称： 燕山大学课程设计（论文）任务书院（系）： 基层教学单位： 学 号学生专业（班级）设计题目卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟的影响设计主要容1.卵丘细胞存在对猪卵母细胞成熟的影响2.卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响设计要求1.提出设计方案前应充分查阅各种文献资料，2.要有明确设计的目的,设计合理的操作方式3.设计出合理的测定指标4.设计的容要与题目基本一致5.设计总结与分析工作量1.至少阅读15篇以上的相关科技文献2.设计文字至少在15000字
2、以上工作计划12.28-12.31 查阅资料1.1-1.3 整理文献1.4-1.8 设计方案1.9-1.11 撰写说明书1.12 检查容准备答辩参考资料1 大元. 受精生物学M. 科学, 2000, 51: 147-148.2 王海, 曾申明, 朱士恩. 培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响J. 中国畜牧杂志, 2002, 38: 15-16.3 钱云, 丁家桐, 红林. 卵母细胞成熟的形态学特征及其调控J. 国外畜牧科技, 2001, 26: 26-30.指导教师签字基层教学单位主任签字说明：学生、指导教师、基层教学单位各一份。年 月 日 燕山大学课程设计成绩评定表设计者:
3、 学号: 设计题目: 说明书成绩评定（满分100分）： 得分设计容的切题程度：满分20分 （ ）设计容立题合理性：满分10分 （ ）设计容的规程度：满分10分 （ ）设计书前后容完整：满分20分 （ ）设计说明说排版成绩：满分20分 （ ）设计说明书的工作量：满分10分 （ ）设计过程平时成绩： 满分10分 （ ）总分成绩： 指导教师： 年 月 日答辩成绩评定：（满分100分） 得分仪表成绩：满分20分 （ ）口语表达：满分20分 （ ）幻灯质量：满分20分 （ ）设计分析：满分40分 （ ） 总分： 教师： 年 月 日设计撰写成绩（70%）答辩成绩（30%）合计教师签字： 年 月 日2010
4、-2011 秋季学期生物工程专业课程设计结题论文卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟影响的设计学院（系）： 年级 专业： 学 号： 学生 ： 指导 教师： 教师 职称： 摘 要卵丘细胞是影响卵母细胞成熟的重要因素，尤其是包裹在卵母细胞周围的卵丘细胞。本设计主要探讨卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟的影响。设计容主要分为两部分：卵丘细胞存在对猪卵母细胞体外成熟影响的设计；卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟影响的设计。第一部分设计拟定探索出卵丘细胞的存在能够提高卵母细胞体外培养成熟；第二部分设计是在第一部分的基础上分析卵丘细胞层数对母细胞成熟的影响。通过本次设计，拟定探讨卵丘细胞的存在和不同形态对猪卵母细胞的成熟
5、率的影响。为提高卵母细胞的质量，使体外受精、细胞核移植、转基因及胚胎干细胞等技术研究的顺利进行，而作为这些研究基础环节的卵母细胞体外成熟技术尤为重要。 关键词：卵丘细胞；猪卵母细胞；体外成熟word格式. 目 录第一部分 文献综述11.哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展11.1卵母细胞体成熟的生理机理11.2卵母细胞体外成熟的机理12. 影响猪卵母细胞体外成熟的因素22.1影响猪卵母细胞体外成熟的生理性因素22.1.1 卵巢来源猪的年龄、品种及健康状况22.1.2所采集卵巢所处的性周期22.1.3采集卵巢离体时间及保存温度32.1.4采集卵母细胞的方法32.2影响猪卵母细胞体外成熟的物理性因素3
6、2.2.1 体外成熟培养条件42.2.2体外成熟培养时间42.2.3体外成熟培养方式42.3影响猪卵母细胞体外成熟的化学性因素42.3.1成熟培养基42.3.2激素52.3.3血清52.3.4卵泡液62.3.5细胞生长因子63.卵丘细胞与卵母细胞关系的研究进展73.1卵丘细胞与卵母细胞在卵母细胞成熟过程中的结构与功能联系73.2卵丘扩展对卵母细胞体外成熟的影响83.3卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响93.4去除卵丘细胞的卵母细胞在体外成熟过程中的超微结构变化10第二部分 课程设计部分111.实验材料111.1 卵巢111.2 实验用的仪器111.3 实验试剂122.方法122.1 卵丘-卵
7、母细胞复合体（COCs）的收集122.2猪卵母细胞的分级122.3卵母细胞的成熟培养132.4各组卵母细胞的成熟观察133. 设计133.1卵丘细胞存在对卵母细胞体外成熟的影响133.2卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响134.分析与总结144.1卵丘细胞存在对卵母细胞体外成熟的影响144.2卵丘细胞层数对卵母细胞体外成熟的影响145.设计体会15参考文献16第一部分 文献综述1.哺乳动物卵母细胞体外成熟研究进展1.1卵母细胞体成熟的生理机理卵母细胞成熟是指卵母细胞恢复和完成第一次减数分裂，进入并停滞于第二次减数分裂中期，此间伴随着胞浆成熟，即卵母细胞的成熟包括其核成熟和胞浆成熟两个方面v。
8、核成熟是核膜破裂，同源染色体分离和排出第一极体；胞浆成熟是胞浆各种蛋白组成达到一定水平及线粒体的有效重排。1.2卵母细胞体外成熟的机理卵母细胞体外成熟（IVM）是指在体外人工给定的条件下，哺乳动物次级卵母细胞经过一系列的生长发育最终形成有受精能力的成熟卵母细胞的过程。卵母细胞的体外成熟包括细胞核的成熟、细胞质的成熟、卵丘细胞的成熟、透明带的成熟以及其卵丘-卵母细胞复合体的发育成熟等一系列复杂的变化过程，主要表现在细胞核成熟和细胞质成熟两个方面。在形态学方面表现为纺锤体形成，核仁致密化，染色质高度浓缩成染色体，第一极体释放，细胞器重组，卵丘细胞扩展、膨胀和透明带软化等一系列生理变化vii。细胞核
9、成熟即卵母细胞恢复减数分裂，发生生发泡破裂(genninal vesiclebreakdown，GVBD)并发育到第一次减数分裂中期；与此同时，卵母细胞进一步跨越第一次减数分裂中期，排出第一极体(第一极体含有极微量的细胞质，不久就退化)并停止于第二次减数分裂的中期，直到受精(或激活)后才完成第二次减数分裂并排出第二极体。细胞质的成熟包括细胞器的变化和细胞基质的变化，皮质颗粒在胞质合成后，逐渐迁移到质膜下的皮质区。高尔基复合体最初位于核的周围，成熟过程中移向皮质，皮质颗粒完全形成后，高尔复合体在皮质中消失。发育早期的线粒体为圆形或椭圆形等，主要分布于皮质部，卵母细胞成熟后，线粒体又移向核周围，形
10、成幼稚型线粒体。随着卵母细胞的成熟，粗面质网减少，而滑面质网增多，到成熟晚期，滑面质网变得很少。胞质成熟一个非常重要的特点是积累一些稳定的mRNA，并在卵母细胞成熟到一定阶段进行蛋白质翻译。有些细胞质成熟过程依赖于细胞核成熟。 透明带软化也是卵母细胞成熟的标志。透明带是一层糖蛋白膜，受精时可以结合并诱导精子发生顶体反应，并阻止多精受精。在卵母细胞的成熟过程中，有很多化学物质及因子参与反应，因此，只有当体外成熟条件与体卵母细胞发育所需要的环境非常接近时，才能获得较高的成熟率，从而为进一步的科研工作提供优质大量成熟的卵母细胞。2. 影响猪卵母细胞体外成熟的因素2.1影响猪卵母细胞体外成熟的生理性因
11、素2.1.1 卵巢来源猪的年龄、品种及健康状况同一种动物在不同年龄段其卵母细胞在体外成熟的情况也有所不同。从初情期前的青年母猪卵巢中获得的猪卵母细胞经过体外成熟培养后可得到IVP 后代，但是，成功的效率不如经产母猪卵巢体外成熟的卵母细胞。不同的国家和地区之间，猪的品种必定存在着遗传因素、饲养环境和气候条件等等的因素而带来品质上的差异，从而影响猪卵母细胞的质量进而对体外成熟培养也产生一定的影响。而即使是从同一品种和统一地区的猪种所获得的卵母细胞进行体外培养，其培养效果也会因猪的健康情况和卵巢质量等的影响而有很大的不同，比如，处在育龄盛期的健康母猪，其卵巢的体积大，表面卵泡多而且直径在3-6mm
12、的卵泡相对比例就会较高，抽得的卵母细胞形态完好，裸卵少，相对体外成熟培养效果也好。反之，取自仔猪、处女猪、老母猪及老弱病残猪的卵母细胞的体外成熟培养效果则较差。2.1.2所采集卵巢所处的性周期所采集的卵巢所处的性周期同样影响卵母细胞体外成熟培养结果，根据采集卵巢所处的性周期，将其分为卵泡期和黄体期，再将黄体期卵巢分为有黄体期卵巢和无黄体期卵巢。无黄体期卵巢上的卵母细胞比黄体期卵巢上卵母细胞成熟效果要好。亚利等认为猪卵泡期卵母细胞的培养效果要高于黄体期，但差异不显著。辉等研究表明，在牛卵母细胞的体外成熟培养中，有着同样的结果，即卵泡期卵母细胞的体外成熟培养结果要高于黄体期xxvi。因此，卵巢所处性周期不同，卵泡的能量物质、激素浓度等也会随之而发生变化，进而影响了体外成熟培养的结果。2.1.3采集卵巢离体时间及保存温度 一般而言，卵巢离体的时间要求在24h ，时间越短，所获得的卵母细胞的质量越好，体外成熟培养的效果也越好。文国艺等xxvii研究认为，猪卵巢离体时间越短，其卵母细胞的卵裂率越高，并且随着离体时间的延长而降低。相对于其他哺乳动物而言，猪卵母细胞对温度的敏感度较高，较高或较低都会直接影响到体外成熟的效果，一般来讲，猪卵巢的保存温度在2835，文国艺等研究表明，当卵巢的保存温度低于25，猪卵母细胞体外成熟收到明显的影响并进而影响到受精的
