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1、第5章 食用菌菌种生产1、目的清楚菌种类型、作用及各制种环节所需的相应设备。掌握各级菌种的培育技术，知道为何及如何对菌种进行保藏和复壮。2、重点与难点重点：菌种分离；母种、原种、栽培种的培育。难点：孢子分离菌种左右着产品的质量及产量。要获得高产优质的食用菌产品，必须有标准化纯度高的优质菌种。在相同栽培条件下，良种比一般品种可增产三成以上，甚至成倍增长。掌握菌种培育技术是成功从事食用菌生产的关键。第一节 菌种的概述一、菌种的概念 菌种的优劣主要取决于菌株原有的特性及制种技术的高低。菌种是特殊生产资料，西方国家都有菌种法，生产菌种的单位会受到很多法律的约束，对生产设施、科研设备，操作人员的技术水平
2、要求很高。 我国菌种市场一直未受到法律的有效制约。1996年7月农业部颁布了食用菌菌种暂行管理办法，虽为时十年之久，基本处于菌种质量难把关，菌种技术难规范、菌种市场难管理的状态中。值得高兴的是2006年6月1日农业部颁布并开始实施了食用菌菌种管理办法，虽然在今后的执行中还会存在很多问题，但终归是有法可依了。菌种生产经销混乱的原因有三：技术比较简单、成本低、利润丰厚。因此吸引了很多无营业执照、无生产许可证、无合格技术人员，设备简陋，手工作坊式生产的单位或个人烟熏火燎的操起了菌种生产生意。不管或根本不懂菌种优良性是否降低甚至丧失，使大量名不符实的菌种或劣质菌种被应用到生产中，导致食用菌产量、质量低
3、劣，生产效益不高，甚至毁灭性的失败。给菇农造成了巨大的经济损失，严重挫伤了食用菌生产的积极性。食用菌的菌种如同庄稼的种子。食用菌的孢子是传宗接代的个体，但在人工栽培时，直接用孢子播种很难成功，而是用其生长在培养基内的菌丝体作为“种子”的。经人工培养，扩大繁殖后用于生产的纯次生菌丝体，称为食用菌的菌种。 菌种基本要求：实行纯培养，不含任何杂菌。 菌种来源：自然选择，育种技术，野生菌驯化。得到优良菌株后再进行扩大繁殖，共生产所需。 1 / 15二、菌种类型 按使用目的分为保藏菌种、实验菌种、生产菌种；按物理性状分为固体菌种和液体菌种；按级别分为一级种、二级种和三级种。 （一）菌种的分级1、一级种（
4、母种）用孢子分离、组织分离或基质分离法首次得到的纯菌丝体，称为母种。因用试管斜面培养基培育，又是进行菌种扩大的基础种，故又称为试管种或一级种。特点：菌丝弱、量少、不能直接栽培，必须经驯化和扩大才能用于生产。 2、原种将母种扩大至大口瓶、较粗放的液体或固体培养基形成的菌种，成为原种。也称二级种。作用：扩大栽培种特点：菌丝较多而壮、适应性较强3、栽培种将原种移扩至菌种袋或瓶中的粗放培养基上，培养成的菌丝体，称为栽培种。也叫三级种、袋装种或生产种。作用：用于栽培（不能再扩繁菌种，易致退化）特点：菌丝更多、更健壮、适应性更强总生产：子实体母种原种栽培种栽培母种、原种、栽培种都是具有统一血缘关系的祖孙三
5、代，品性相同，只是越来越多，越来越健壮。菌种生产就是从母种开始，到栽培种为止。若受设备或技术条件限制，可买现成的母种或原种进行繁衍。 （二）状态不同的菌种 1、固体菌种用固体培养基培养的菌种为固体菌种。实际生产中最为常见，设备、工艺、技术要求等较简单。但菌龄长，菌龄不一致，发酵率低等。2、液体菌种采用液体培养基培养的菌种，菌丝体在液体中呈絮状或球状。工艺、设备、技术要求较高。液体菌种平均制种时间为3天左右，而固体菌种1级到3级的转代培养一般需23个月，液体菌种培养时间是固体菌种的1/10。液体菌种具有生产周期短、发酵率高、菌龄一致、成本低、接种方便等固体菌种所不可比拟的优势，更有利于食用菌生产
6、标准化、工厂化、周年化生产，是菌种生产的一个方向。目前液体菌种生产主要有两种，一种是液体菌种深层发酵培养（种于罐培养），一种是摇瓶培养。前者需要的设备复杂、投资大、无菌操作严格，适用于科研机构和大型食用菌菌种厂。后者比较简单，但生产量少，适合农村和小规模的食用菌菌种厂。三、菌种生产程序无论哪种类型的菌种，其生产程序都是一样的，主要是：制培养基灭菌接种培养。其设备也因各生产步骤的所需而不同。第二节 菌种生产主要设备一、配料设备（一）原料处理设备切片机（将木材切成小木片）粉碎机）过筛机（晒出木屑中的块状木等杂物）（二）原料配制、分装设备搅拌机（将各原料及水分混合、搅拌均匀）装瓶机（将原料装于菌种瓶
7、）装袋机（将培养料装入塑料膜制的菌种袋）现已有装瓶装袋两用机械。二、灭菌设备因培养菌种的容器、培养基等物品都要经过高温蒸煮，所以最有效的工具是高压锅或常压锅。这些设备，大家在实验中已经用过，知道了它们的功能和用法。三、接种设备接种是将菌种接入培养基的过程必须在无菌环境中进行无菌操作。接种室和接种箱等是进行接种的场所，和外界空间隔绝，防止空气流动，经过一定的消毒措施后，室内就可达到无菌状态，防止接种时污染杂菌。若传入杂菌，就会前功尽弃。能提供无菌空间的设备有：（一）接种箱（严密）用法：清洁、放所需物品药喷、熏紫外灯30分钟。（使用前后用2%来苏擦净，箱温勿超30）特点：结构简单，造价低廉，消毒彻
8、底，移动方便。但箱内容量小、操作不便，但工效低。（二）接种室（无菌操作房） 规格：79m2，高2.22.5m2，其中缓冲间23m2、接种间56m2。要求：严密、6个面平滑、两门错开、平拉式、顶有紫外灯。特点：工效高、造价高用法：物放缓冲间一消毒、开紫外灯一穿拖鞋、2%来苏水浸手2min一移物于接种间，喷5%石碳酸，退至缓冲间510min 完后喷5%石碳酸、开紫外灯。（问题：为何不直接放物于缓冲间？）接种箱及接种室经常用石灰水等碱性消毒剂擦拭，以改变经常熏蒸造成的酸性环境，保证消毒效果。（三）超净工作台使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器。特点：操作舒、工效高用法：预开机30min（置洁净处
9、，定期清洗） （四）接种工具要求：导热好、冷却快种类：环、针，铲、耙、钩、匙、镊、刀四、菌种培养设备（一）培养箱培养少量菌种的恒温电器。一般在2040任意调节。用法：打开电源（红灯亮）旋至所需温度，待温度表达到所需温度时定温（反旋至红灯灭、绿灯即亮时止）菌种长好关闭电源（二）培养室 培养大量菌种的恒温房。培养室最重要的是要恒温、恒湿、无尘且空气流通。温度应维持在25左右，相对湿度应在50%60%。培养室内有培养架、紫外线灯。进入培养室最好穿干净拖鞋或穿一次性鞋套。要求：光暗、密闭，好、通风性强；能升温，降温；有培养架、空调机。大小根据生产规模而定。五、菌种保藏设备 一般用冰箱保藏母种，大量的原
10、种及栽培种可暂时放置于菌种贮存室。菌种贮存场所应具备远离污染源及有毒药物、清洁、低温（48）、干燥、通风、遮光等条件。在存放菌种之前，应进行消毒杀虫处理，为防杂菌污染，地面可经常撒石灰粉。原料库配料间灭菌间门口晒料场接种间缓冲间栽培场办公室培养间六、菌种厂的布局菌种厂的布局应根据菌种生产流程而进行合理的设置，使各环节成为自然衔接的流水生产线，以便减少污染率，提高生产效率。第三节 菌种培养基人工配制的，供食用菌生长繁殖的营养基质，称为培养基。培养基不合适，容易导致菌种退化，失去优良特性。有无好种在于选，有了好种在于养。养种的首要环节是制培养基。 一、概述（一）要求营养种类、营养比例、水分及PH值
11、适宜；持无菌状态。（二）类型 常用于培养基配制的琼脂具有96以上融化、40以下凝固；能反复凝、融； 透明度好，粘着力强；不被微生物分解利用等特点。是制备固化培养基不可缺少的一种理想凝固剂。天然培养基与半合成培养基具有营养丰富、原料来源广泛、价格低廉等优点，在生产实践中被广泛采用。 液体培养基的养料分布均匀，菌丝生长快，需特殊设备及较高的技术条件，适于机械化、工厂化生产。但菌种极易老化和自溶，目前食用菌生产仍以固体菌种为主。斜面及平板培养基常用于母种培养、分离、保藏等。二、各级菌种的培养基（一）母种培养基1、通用配方（PDA）马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂1520g，水1000m1。PDA培
12、养基适于培养绝大多数食用菌母种，是生产中广泛使用的。2、配制过程 （二）原种和栽培种培养基原种和栽培种的培育方法基本相同，只是在接种时接的菌种级别不一样。两菌种培养基的配方可以相同，也可有所区别，由于栽培种经过了母种及原种两次的驯化，其培养基可比原种培养基更粗放些。1、配方与配制（1）颗粒培养基（麦粒、玉米粒等）配方：粮食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸钙0.5%配制将洗净的粮食粒洗净，用1%石灰水泡胀，文火煮沸1520min（熟而不烂，勿破皮），捞出晾至无明水后拌入余料。原种多使用颗粒培养基。（2）棉籽壳麦麸培养基 配方：棉籽壳87%，麦麸10%，白糖1%，石灰1%，过磷酸钙1%。配制将棉籽壳
13、、麦麸混合为主料，余料溶解于少量水后浇入主料中。边加清水边翻拌至含水量达60%65%（紧握料的指缝中有水泌出而不下滴）。2、调pH与分装一般用石灰或过磷酸钙调pH至8.0左右（特殊要求除外）。原种培养基装入菌种瓶（或其他大口瓶），装量约占瓶高的1/2（非颗粒培养基可装至瓶肩，用锥形棒打一料孔），瓶口擦净，堵棉塞后外包牛皮纸或双层报纸。栽培种培养基一般装入聚丙烯菌种袋，上端套颈圈后如同瓶口包扎法。两端开口的菌种袋可将两端扎活结。要求装地外紧内松，培养料需紧贴瓶壁或袋壁。松散的培养料会导致菌丝断裂及影响对养分、水分的吸收。三、培养基的灭菌配制的培养基应随即灭菌，以防杂菌滋生，使其腐败变质。母种培养
14、基多采用高压蒸汽灭菌。若无较大高压锅，原种、栽培种培养基可采用常压灭菌。灭菌温度及灭菌时间因培养基不同而不同。（一）母种培养基的高压蒸汽灭菌1、灭菌及摆斜面排净冷气后，通常在103kpa（1kg/cm2）压力下，温度约达121，灭菌时间为2030min 自然降压至“0”略开锅盖，约60摆斜面（约占管长的1/2，温度低盖毛巾，以免形成冷凝水。2、无菌检验将斜面培养基放于30左右条件下空白培养23天，若无杂菌生长，方可用其接种。（二）原种、栽培种培养基的灭菌原种栽培种培养基的容器大、装量多，应增加灭菌压力及灭菌时间。若采用高压蒸汽灭菌，一般在152kpa压力（1.5kg/cm2）、温度约128.1
15、条件下，保持灭菌时间12h。若采用常压灭菌，需保持最高温度10h左右，再闷1天或1晚。要求攻头、控中、保尾。第四节 菌种的接种将少量菌种移接于新培养基中的过程，称为接种。接种成功的关键是无菌操作。在移接过程中必须十分谨慎，严防杂菌侵入。 一、无菌操作 （一）概念在严格消毒灭菌条件下，进行的接种操作。（二）要求接种空间、接种工具、操作者的双手都要彻底消毒灭菌二、母种的接种 简便分离法 1、组织分离（无性繁殖） 将子实体、菌核、菌索等一小块组织放于斜面培养基上，使其萌发为纯菌丝的方法，称为组织分离。该法具有简便、易成功、能保持原菌种性状等优点，但重复多易退化，应与孢子分离交替进行。组织分离法适用于绝大多数食用菌
