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1、水蛭对热刺激后血管壁增厚的干预 作用【摘要】目的探讨水蛭对热刺激后动 脉管壁增厚的干预效果。方法使用局部热刺激兔耳，温度为(43 土)C,每次3h，每天 1次，共做3次。模型组分别于造模后1周、 2周、4周时取材；水蛭组实验前 3天及实 验后一直用水蛭灌胃，/(kg d),分别于造 模后1周、2周及4周时取材。采用光学显 微镜及图像分析仪进行形态学观察。结果 模型组热刺激后动脉中膜成分增殖并突入 血管腔内，造成管腔变狭。造模处平滑肌细胞层数及中膜厚度增加。 水蛭组与模型组 相比，增殖程度减小，各项观测指标均有不 同程度的变化，但统计学分析差异无显着性。 结论/(kg - d)剂量的水蛭对热刺激
2、后血管 壁增厚的干预效果不理想。【关键词】 动脉；狭窄；水蛭；形态学Abstract 】 Objective This study was designed to build a new experimental model of proliferation of arterial smooth muscle cells(SMC).Methods The central artery of the rabbit ear was heated by(43 士 ) C for 3 hours a day , and for three examined the morphological chan
3、ges of the arterials by light microscopy and digital planimetry , 3 days , 1 week , 2 weeks , and 4 weeks after experiment. Hirudo powder was administered 3 days before heating ， and rabbits were examined 4 weeks after As the increasing of the time , the proliferation of SMGncreased and extended to
4、the lumine of the artery ， but the internal elastic membrane was not disrupted. So ， the lumina stenosis occuerd. Hirudo powder caused the proliferation of SMC to decrease.Although the lumina become smaller , the effect is not From the research results above, we can draw the conclusion that heat can
5、 induce arterial SMC to proliferate , and then decrease the area of the artery lumina. The model is available. Heat can activate autocrine growth of the local SMC , and alter the structures and function of vascular wall. originated from the host. Hirudo powder has a slight effect on decreacing SMC p
6、roliferaton , because it may not play a part in the relavent mechanism of heat.【Key words 】artery ; stenosis ; Hirudo powder; morphology水蛭是应用已久的活血祛瘀类药物，味咸 苦，性平、有小毒，归肝经。其主要功效为 破血逐瘀。临床广泛应用于心脑血栓性疾病 及瘀血经闭的治疗中，亦可用于治疗生殖系统疾病如精不液化等。本实验研究水蛭对家 兔热刺激后血管壁增厚的干预作用， 现报告 如下。1实验材料实验动物 中国家兔48只，体重，雄性， 由湖南中医学院实验动物中心提供。合
7、格证 号为湘医动字第20-003号。药物与试剂 水蛭购自湖南长沙九芝堂药 店，产地为山东，宽体金线蛭，生产日期为 2005年1月。仪器GSY型恒温水浴锅（北京医疗器械 厂）；数字彩色图像分析仪（美国Optimas 公司）；Olympus BH 2显微镜；局部加热 器。2实验方法实验动物分组48只家兔随机分为左耳模 型组和右耳模型组，每组 24只。一只耳朵 造模，另一只耳朵为假处理。再将上述两组 动物分别随机纳入6组，使每组含有8只动物，即左、右耳造模各 4只。模型组分为3 个，水蛭灌胃组为3个，分别在热刺激后 3 天、1周、2周、4周时处死取材。造模及灌胃法的实施 从耳根部起至耳尖 部，测量兔
8、耳中央动脉的长度，选取中央2cm 的长度作为受试部位。将加热器置于受试部 位，以胶布固定，使之紧贴皮肤。加热器为 厚的铁皮制成的小圆匣，直径 2cm,高；侧 面开2个小孔，分别接入水管和出水管。热 水流速为156160ml/min ,流入前温度为 (43 土)C,流出后温度为41 C42C。假处 理组仅给予同样的器具操做，温度与室温一 致，时间均为每次3h,每天1次，连续做3 次。水蛭组热刺激前3天及热刺激后一直给 予水蛭粉灌胃。/(kg d),分2次于上、下 午灌胃。每次剂量溶于 3ml蒸储水中，灌入 后再灌2ml蒸储水，以使胃管壁不残留药末。 所有动物均以普通兔饲料喂养。标本的采集及处理按
9、预定日期空气栓塞 法处死动物，石蜡切片法，用地依红染弹性纤维，再用Harris苏木素染细胞核，最后 用伊红染胶原纤维及细胞质。观测指标均为光镜下观测1 （1）内弹 性膜的完整性：在10X 40倍放大的条件下， 观察所有切片内弹性膜是否有断裂。（2）血管腔面积的测定：10X 10倍放大条件下，使 用图像分析仪进行测量， 标本选取及计算法 同上。（3）中膜厚度的测量：10X40倍放大 条件下，线型测微尺进行测量。选取中膜最 厚处为中心点，然后从中心点开始，将动脉 横截面等距离分成五段。分别测出5个均分 点处的中膜厚度，取均值。标本选取及计算 法同上。（4）血管壁平滑肌细胞层的计数： 10X 10倍
10、放大条件下，在上述5个点分别测 量平滑肌细胞层数，取均值。标本选取及计 算法同上。3统计学方法所有数据以均数土标准差（x 土 s）表示。多 组均数比较进行方差齐性检查，方差齐采用 方差分析、方差不齐采用 tD检验，两组均 数比较采用t检验。所有数据经软件进行处 理。4结果一般情况观察实验后模型组兔耳局部轻 度发红，持续2035min,对照组无变化。 所有动物耳部皮肤无溃烂及肿胀。兔子毛发 有光泽，活动、进食及二便均未见异常。无 生病及中途死亡发生。血管相关性指标的观察 结果见表1、2、3。模型组中膜有不同程度的增生。 所有受检标 本均未见内弹性膜断裂。 热刺激后3天可见 局部内弹性膜厚度，向管
11、腔内突入；1周后， 模型组的局部中膜增厚，增生物主要由VSMC 及胶原纤维构成。2周、4周时局部中膜继 续增厚，管腔进一步缩小。表1家兔不同时 间管腔面积测量注：与同期假处理组相比，*P;与模型组28 天相比，# P;与水蛭组3天相比， P;与 水蛭对照组28天相比，淤？表2家兔不同 时间血管中膜厚度测量注：与同期假处理组相比，*P;与模型组28 天相比，# P;与水蛭组3天相比， P;与 水蛭对照组28天相比，淤？模型组与同期假处理组相比，管腔明显缩 窄。模型组4周后管腔面积明显 3、7天组， 见表1;假处理组内弹性膜光滑完整，局部 中膜无增厚，管腔面积间相比差异无显着性， 见表1。模型组中
12、膜厚度随动物热刺激后生存时间 的延长而增加，提示损伤后管壁的厚度在一 定时间内有增加的趋势见表 2。平滑肌细胞 的层数随动物热刺激后生存时间延长而增 加，提示热刺激后平滑肌细胞在 28天内始 终保持增殖状态，见表 3。表3家兔不同时 间血管壁平滑肌层数测量注：与同期假处理组相比，*P;与模型组28 天相比，# P;与模型组14天相比， P;与水蛭对照组28天相比，淤P;与水蛭组 3 天相比，水蛭组各项指标的变化趋势与模型组类似， 但变化幅度相对较小，与同期模型组相比， 统计学差异无显着性。提示/kg水蛭对模型 的干预效果不理想。5讨论水蛭是应用已久的活血祛瘀类药物，味咸 苦、性平、有小毒，归肝
13、经。其主要功效为 破血逐瘀，并可堕胎。临床广泛应用于心脑 血栓性疾病及瘀血经闭的治疗中，亦可用于治疗生殖系统疾病如精不液化等。本研究使用兔耳皮肤局部热刺激法，造成兔耳中央动脉中膜平滑肌细胞增殖， 管腔狭窄。水蛭对此病理变化的干预效果较 差，除了药物剂量和制剂的问题，可能与其 所含成分有关。水蛭分离出的活性成分大致 可分为两大类：一类直接作用于凝血系统的 成分，包括凝血酶抑制剂，以及其他抑制血液凝固的物质，如水蛭素(Hirudin);第二 类是其他蛋白酶抑制剂及其他活性成分，如溶纤素(Hementerin)等2。水蛭素是水 蛭的主要活性成分，是目前已知的最强的凝 血酶抑制剂。水蛭素可与凝血酶形成
14、复合物， 阻断凝血酶的蛋白质水解功能，不仅阻止了 纤维蛋白凝块形成，而且阻止凝血酶催化的 其他凝血反应：如对凝血因子V、皿的激活 以及凝血酶诱导的血小板聚集和释放。因此,水蛭的主要作用为抗血栓，表现为大大降低血小板和纤维蛋白形成的凝块，而不改变血 小板数量和纤维蛋白含量:3。家兔股动脉形成粥样斑块后，应用气囊法 形成术后，立即给予肝素和水蛭素，结果水 蛭素组的再狭窄明显降低，疗效优于肝素组，表明水蛭具有一定的抗平滑肌细胞增殖的 作用，但是该作用的发挥机理可能与其抗血 栓作用关系密切。由于热刺激后局部血管壁 未见血小板聚积和血栓形成，所以我们推测 管壁的增厚与血小板和血栓的关系不大。热应激激活血
15、管局部的自/旁分泌性增殖。研究表明：急性热应激能使血中血管紧张素n 明显升高:4。由于血管平滑肌细胞具有分 泌血管紧张素原的功能，且含有血管紧张素 转换酶，所以我们推测热刺激可使受热局部 平滑肌细胞分泌过多的血管紧张素，通过自/旁分泌途径直接作用于平滑肌细胞；也可通过间接作用激活其他生长因子，如PDGF-A、ET 1、FGF等，共同作用于平滑 肌，促进其增殖及合成基质:5 。此外，当 局部热刺激时，滋养血管平滑肌交感神经受 热刺激，紧张度降低:5,可以引起滋养血 管扩张，血流量增加:6。同时，由于所支 配的动脉受热扩张，局部血管内压力升高， 平滑肌舒张，动脉壁变薄，会使滋养血管受 到中膜和外膜
16、的挤压作用而扭曲:7,管腔 缩窄，血流减慢，血流量降低。后者的作用 抵消并大于前者的作用，故使中膜血液供应 量降低，造成中膜缺血缺氧。缺氧可以诱发 平滑肌增殖:8,缺血可以促进新内膜的产 生。由于水蛭并不能作用于上述病理环节， 因此对热刺激后引起的动脉管壁狭窄的干 预作用较差。【参考文献】1张均田.现代药理实验方法.北京：北 京医科大学、中国协和医科大学联合出版社， 1998, 1268-1269.2李艳玲，黄荣清，崔玉芳.水蛭的研究概 况及展望.科学技术与工程，2004 , 4(3): 239-243.3汪钟，郑植荃.现代血栓病学.北京： 北京医科大学、中国协和医科大学联合出版 社，1997, 499-503.4陈忠，李书珍，朱剑琴.急性热应激小 鼠血浆心钠素、血管紧张素及其体液Na+/K
