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1、亚砷酸钠对血红素加氧酶 目的 观察不同暴露剂量和时间下，亚砷酸钠（NaAsO2）对体外培养的牛主动脉血管内皮细胞（BAEC）中血红素加氧酶-1(HO-1)的诱导作用。方法 分别在015mol/L NaAsO2暴露024h收集培养的BAEC细胞蛋白提取液中，用蛋白印迹(western blot）法检测HO-1蛋白的诱导产生量。结果 015mol/L NaAsO2暴露能够显著诱导BAEC细胞HO-1蛋白产生增加，并且分别具有剂量-反应和时间-反应相关关系；25mol/L NaAsO2暴露即可显著诱导产生HO-1蛋白。结论 HO-1蛋白的诱导表明砷介导的一种细胞应激反应；HO-1蛋白可以作为无机砷暴
2、露的敏感性生物标志物之一，有利于深入研究无机砷暴露的生物剂量反应。亚砷酸钠长期慢性砷中毒可以引起砷性皮肤损伤、外周血管和心血管疾病以及皮肤癌和多种内脏癌1。血红素加氧酶(HO）是血红素降解的限速酶。其同工酶HO-1对于氧化应激十分敏感，能够被多种刺激和应激因素所广泛诱导2。该诱导作用被认为是机体对各种氧化应激刺激的一种适应性保护反应。而无机砷暴露能够引起多种培养细胞、以及人类和实验动物体内的氧化应激水平提高3。本研究应用体外培养的牛主动脉血管内皮细胞（BAEC),探讨亚砷酸钠（NaAsO2）对HO-1的诱导作用。1材料与方法11主要试剂及仪器亚砷酸钠（NaAsO2，日本Wako公司）；胎牛血清
3、培养液（DMEM-F12，美国Sigma公司）；成纤维细胞生长因子（美国Proprotech公司）；抗HO-1抗体（美国Sigma公司）；CO2细胞培养箱（日本Kendro公司）；低温离心机（日本Sakuma公司）；电泳仪与转膜装置（日本Atto公司）。12细胞培养BAEC细胞（日本Dainippon制药公司），按Michel法4改良后培养。采用DMEM-F12培养基，添加成分包括10胎牛血清，100U/ml青霉素和100g/ml链霉素，10U/ml肝素和5ng/ml成纤维细胞生长因子。37,5%CO2常规培养。025%胰蛋白酶乙二胺四乙醇二钠盐（EDTA）用于细胞传代。第47代细胞用于后续实
4、验。80融合后的细胞，用无血清DMEM-F12培养基处理1216h用于正式实验。13细胞染毒BAEC细胞用0,25,5，10，15mol/L NaAsO2暴露6h，测定细胞内HO-1蛋白表达；分别用25和10mol/L NaAsO2暴露0,2，6，12，24h,测定细胞内HO-1蛋白表达。14HO-1蛋白的蛋白印迹(western blot)分析BAEC细胞暴露于不同剂量和或时间的NaAsO2后进行western blot分析5。十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯胺凝胶的浓度为12%，蛋白进样量为20g。特异性一次抗体为抗HO-1抗体（11000稀释）。自显影胶片扫描后用Adobe photos
5、hop 701软件处理输出，并应用图像分析软件ImageJ进行定量分析。各条带数值均与空白对照组比，计算蛋白相对水平。15统计分析采用SPSS100统计软件进行单因素方差分析。2结果21不同剂量NaAsO2暴露诱导HO-1蛋白的表达（图1）25，5，10，15mol/L NaAsO2暴露6h，均能够显著诱导BAEC细胞HO-1蛋白产生增加，并且具有剂量-反应关系（P图1不同剂量NaAsO2暴露诱导HO-1蛋白的表达（略）22不同时间NaAsO2暴露诱导HO-1蛋白的表达（图2）25和10mol/L NaAsO2暴露2h开始出现HO-1蛋白的诱导，6h的诱导作用十分明显，并可持续24h;25和10mol/L NaAsO2暴露均具有时间-反应关系(P图2不同时间NaAsO2暴露诱导HO-1蛋白的表达（略）
