《生物：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案(2)(新人教版选修1)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案(2)(新人教版选修1)（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1专题五 DNA 和蛋白质技术课题 3 血红蛋白的提取和分离高中生物选修 1编号：14 编写人：杨凤莉 审核人：高二备课组 编写时间：2014.6.30班级 姓名 学习目标：本课题尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法，电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。重难点： 凝胶色谱法的原理和方法，样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【基础梳理】一、凝胶色谱法 1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。2、原理：（1）由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。（2）当 不同的蛋白质通过凝胶时，相
2、对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。二、缓冲溶液1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液 pH 的影响，维持pH 。2、配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同 pH 范围内使用的缓冲液。三、电泳 1、概念：指 在电厂的作用下发生 的过程。2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基2团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身
3、的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的 分离。4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。四、实验操作1、样品处理:通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。(1)红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中没有 ，表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋 白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除 去 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。2、粗分离：即透析(1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 。(2)目的：将 的杂质除去。(3)原理：透析袋能使小分子
4、自由进出，而将大分子物质保留在袋内。3、纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：(1)凝胶色谱柱的制作。 (2)凝胶色谱柱的装填材料：本实验使用的是 。方法：凝胶用 充分溶胀后。配成 ，一次性 倒人色谱柱内。不能有 存在；不能发生 流干露出凝胶颗粒的现象。(3)样品的加入和洗脱3a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的 缓慢下降到与 平齐，关闭出口。b、加样：用 小心地将 1mL 透析后的样品加到 的顶端，注意不要破坏 。c、加样后：打开下端出口，使样品渗入 内。洗脱：加入 ，打开下端出口，进行 。4、纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是 。五、操作提示1、红细
5、胞的洗 涤： 、 与 十分重要。 过少，无法除去血浆蛋白； 过高和 过长会使 等一同沉淀，达不到分离效果。2、色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在 中膨胀，可以将加入其中的 用 加热，加速膨胀。3、凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的 ，降低 。4、蛋白质的分离：如果红色区带 地移动，说明色谱柱制作成功。【探究归纳】一、人们用鸡的红细胞提取 DNA，而用人成熟的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?二、洗涤红细胞时为什么不能用蒸馏水代替生理盐水?三、在血红蛋白释放过程中。加入蒸馏水和甲苯的目的是什么?四、凝胶色谱法的原理归纳4【提能演练】1、凝胶色谱分离
6、法分离蛋白质时， 凝胶的种类较多 ，但其作用的共同点是（ ）A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C、将酶或纽胞固定在凝胶中 D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度2、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是 ( )A、层析柱高 B、层析柱的直径 C、缓冲溶液 D、样品的分布 3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是 ( )A、蛋白质分子所带的电荷 B、蛋白质分子的形状 C、蛋白质分子的相对分子质量 D、缓冲溶液的 pH4、为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确
7、操作是（ ）A、要在采血容器中预先加人抗凝血剂柠檬酸钠 B、取血回来后，马上进行高速长时问离心 C、将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D、重复洗涤直到上清液呈红色为止5、下面说法不正确的是 ( )A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液 pH 的影响，维持pH 基本不变 B、缓冲溶液通常由 12 种缓冲剂溶解于水中配制而成C、电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程D、透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内6、蛋白质的提取和分离分为哪几步 ( )A、样品处理、凝胶色谱操作、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 B、样品处理、凝胶色谱操作、纯化C 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D、样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定7、洗涤红细胞时，离心所采用的方法是（ ）A、低速长时间离心 B 低速短时间离心 C 高速长时间离心 D、高速短时间离心8、凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶(Sephadex G 一 75)，5其中 G、75 的含义为 ( )A、G 表示凝胶的使用量，75 表示加 25 g 水 B、G 表示凝胶的交联程度， 75 表示需加热到 75C、G 表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围，75 表示每克凝胶膨胀时吸水 7.5gD、 G 表示凝胶的膨胀体积,75 表示每克凝胶膨胀时体积可达 75cm3
