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1、白木香种子超低温保存技术规程1 范围本标准规定了白木香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。本标准适用于白木香种子的超低温长期贮藏。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.6 农作物种子检验规程 水分测定GB/T 3543.7 农作物种子检验规程 其他项目检验3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1白木香
2、Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg.为瑞香科（Thymelaeaceae）沉香属（Aquilaria Lam.）常绿乔木，高515 m。叶革质，圆形、椭圆形至长圆形或近倒卵形，伞形花序。渐危种，国家级重点保护野生植物。该植物老茎受伤后所积得的树脂为中国药典收载的名贵药沉香，用于治疗胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，肾虚气逆喘急。3.2白木香果实 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg. fruits果实为蒴果，其蒴果果梗短，卵球形，幼时绿色，长2 cm3 cm，直径约2 cm，顶端具短尖头，基部渐狭，密被黄色短柔毛，2瓣裂，2室，每室具有1粒种子。
3、3.3白木香种子 Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg. seeds白木香的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子褐色、卵球形，长约1 cm，宽约5.5 mm，疏被柔毛，基部具有附属体，附属体长约1.5 cm，上端宽扁，宽约4 mm，下端成柄状。3.4种子超低温保存 seed of cryopreservation 指将经过前处理的白木香种子置于液氮（-196）中保存。4 种子的选择4.1 果实采收5月底至6月中旬，当果皮颜色由绿转为黄白，果实自然开裂，种子呈棕褐色时即可采收, 去除果皮和附属体，取出种子。4.2 种子选择挑选发育饱满、均匀、健康的种子，置
4、于4冰箱中保存备用（存放时间不超过15 d）。5 种子前处理5.1 生活力检测参照GB/T 3543.7中的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法检测种子生活力。随机抽取30粒种子，剥去外层种皮，沿种脊小心将种子分成2 爿后放培养皿内，内侧面向下，滴入TTC溶液浸没种子，室温(25)避光放置4 h后观察染色结果。5.2 生活力计算直接用肉眼对染色结果进行观察鉴定。凡胚及胚乳全部染成有光泽的鲜红色，且组织状态正常的，为有活力的种子；否则为无生活力的种子。计算：生活力=有活力的种子数/总的种子数100%待保存的白木香种子生活力应85%。5.3 含水量范围用尼龙网袋包裹白木香种子，置于盛有变色硅胶
5、的干燥器内，硅胶与种子的体积比为5000:1，室温条件下干燥处理2432 h，在干燥过程中定期测定种子含水量，将种子含水量由35%45%降至11%13%。参照GB/T 3543.6中的高恒温烘干法（130烘干1h）测定种子含水量（W0），W0=（鲜重-绝干重）/鲜重100%。6 种子保存量白木香种子保存量不少于240粒，以便后期的活力检测使用。7 种子冷冻方式白木香种子超低温保存的冷冻方式为直接冷冻法，即将待保存的白木香种子放入5 mL冻存管中（每管20粒种子），迅速投入液氮中保存。8 恢复培养8.1 种子解冻处理液氮中冻存24 h后取出冻存管，取出2个冻存管，立即放入40 水浴中快速解冻2
6、min。8.2 冻后种子生活力检测取出1管解冻后的种子，参照5.15.2生活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测。当种子生活力80%时视为保存成功。8.3 恢复培养将剩下1管解冻后的白木香种子，播种到带有无菌滤纸的带盖发芽盒中，温度25 30 ，湿度70% 85%条件下培养，出芽周期大概20d。附录TTC的配制和保存方法精密称取TTC 1.00 g，溶于100 mL磷酸盐缓冲液中，制成浓度为1%的TTC溶液，调pH至6.57.5，置棕色瓶内4 冰箱备用。磷酸缓冲液配置方法：溶液I：9.08g磷酸二氢钾溶于1 L无菌水中；溶液II：35.81 g磷酸二氢钠溶于1 L无菌水中；I：II=2：3的比例混合制成磷酸盐缓冲液） 4
