《保健用品毒理学评价程序与检验方法——小鼠精子畸形试验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《保健用品毒理学评价程序与检验方法——小鼠精子畸形试验（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、DB22/T 396.82017 1 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第 8 部分： 小鼠精子畸形试验 警示使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能得安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施。并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了保健用品毒理学精子畸形评价方法。 本标准适用于保健用品毒理学精子畸形检验方法。 2 精子畸形试验 2.1 实验动物 健康成年雄性小鼠，周龄为7 周12 周，体重25 g35 g，一般每组至少5 只。试验前在实验动 物房至少适应3 天5 天。 2.2 仪器和试剂 2.2.1 仪器 2.2.1.1 解剖器械。 2.
2、2.1.2 电子天平。 2.2.1.3 离心机。 2.2.1.4 冰箱。 2.2.2 试剂 2.2.2.1 0.1 %秋水仙素 置于棕色瓶中，冰箱保存。 2.2.2.2 60 %冰乙酸 取60 ml冰乙酸(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。 2.2.2.3 1 %柠檬酸三钠 取1 g柠檬酸三钠(分析纯)，加蒸馏水至100 ml。 2.2.2.4 固定液 甲醇：冰乙酸=3:1，现用现配。 2.2.2.5 磷酸盐缓冲液(pH 7.4) 磷酸氢二钠溶液(1/15 mol/L):磷酸氢二钠（Na2HPO4 ,分析纯）9.47 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。 DB22/T 396.82017 2 磷
3、酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)：磷酸氢二钾溶液（KH2PO4 , 分析纯）9.07 g溶于 1000 ml 蒸馏水中。 取磷酸二氢钠 (1/15 mol/L)：80 ml与磷酸氢二钾溶液(1/15 mol/L)20 ml 混合，调pH至7.4。 2.2.2.6 Giemsa 染液 称取Giemsa 染液3.8 g，加入375 ml甲醇(分析纯)研磨，待完全溶解后再加入125 ml甘油。置于37 恒温箱保温48 h振摇数次。过滤两周后用。 2.2.2.7 Giemsa 应用液 取一份 Giemsa 染液与 9 份 磷酸盐缓冲液混合而成，现用现配。 2.3 剂量选择和动物分组 设1/2、1/
4、5、1/10、和1/20 LD50剂量组以及阳性对照组和阴性对照组。阳性对照组腹腔注射环磷酰 胺，剂量为40 mg/kg体重。阴性对照组为溶剂对照。 2.4 染毒方式 经皮给予受试物，连续5 d，每天一次。动物处死前3 h5 h腹腔注射秋水仙素4 mg/kg6 mg/kg 体 重(注射体积：10 ml/kg体重6 mg/kg 体重 )。秋水仙素宜现用现配。 2.5 试验方法 试验步骤： a) 于染毒后 4 周用颈椎脱臼的方式处死动物，剖腹，取出附睾； b) 将附睾放入盛有 2 ml 生理盐水的小平皿中，用眼科剪刀剪碎； c) 以四层擦镜纸过滤，滤液涂片，自然干燥； d) 将玻片置甲醇中固定 5
5、 min，用 2.5 %伊红染色 1 h，封片。 在显微镜（4010）下计数2000 个精子中畸变的精子数，精子畸形，主要表现在头部，其次为尾 部，畸形类型可分为无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜 的坐标数，以备查询。以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。判断双头，双尾畸形时，要注意 与二条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。 3 结果评价 每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行参数统计比较， 精子畸形阳性的标准是， 畸形率至少为 阴性对照组的倍量或经统计有显著性意义， 并有剂量反应关系 （一般阴性对照组的精子异常率为0.8% 3.4%）。 _
