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1、1,4 菌种保藏的原理和方法,菌种保藏原理及条件 菌种保藏的方法 菌种保藏的注意事项 菌种保藏机构,2,一、菌种保藏原理,原理： 根据菌种的生理生化特性，人为创造条件使菌体的代谢活动处于休眠的状态。 条件： 挑取优良纯种，最好是休眠体（孢子、芽孢等） 创造一个最有利于休眠的环境条件，如：降低培养基营养成分、低温、干燥、隔氧及添加保护剂等方法。,3,二、菌种保藏的方法,斜面保藏法 穿刺保藏法 固体曲保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法,4,原理：低温 方法： 将培养好的斜面菌种，置于4-5冰箱保存，定期移植到新的斜面培养基上继续保藏。 一般保存期3-6
2、个月。 注意事项: 冰箱的温度； 培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。 优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。 缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌几率增加。 适用菌种：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌等短期保藏,（一）斜面保藏法,5,（二）穿刺保藏法,原理：低温、缺氧 保藏期： 4-5冰箱 保存期6-12个月 适用菌种：各种好气性细菌 液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气 液体石蜡保藏法 （在斜面菌种上加入灭菌后的液体石蜡） 适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。,6,（三）固体曲保藏法,适用菌种：产孢子的真菌 该法麸皮、大米、小米或麦
3、粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢子）后加以保存。 注意：控制适当的水分。 保存期：1-3年,7,（四）沙土管干燥保藏法,原理：低温、寡营养 保藏期：4-5 冰箱 保存期1-2年。 适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产芽孢的细菌。 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质， 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。,8,（五）真空冷冻干燥保藏法,原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整，然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。 步骤： 安瓿瓶的处理：灭菌 保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷冻干燥对微生物引起的冻
4、结损伤。 常采用脱脂牛奶或血清。 菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； 冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 以下）使之速冻，在低温下用真空泵抽干） 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ，保藏5-10年。,9,（五）真空冷冻干燥保藏法,影响保藏效果的因素: 菌种、菌龄和样品中的含水量。 适用菌种：适用于各种微生物。 特点：保藏期长、变异小、适用范围广，较理想保藏方法。,10,（六）液氮保藏法,原理：低温 悬浮介质： 10%甘油或5%的二甲亚砜 机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞。 甘油般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。 适用菌种：适用于所有微生物、动植
5、物细胞保藏。 保藏期：置液氮内（-196 ），保存5-10年。 特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价值高、容易变异，或其他方法不能长期保存的菌种,11,（七）悬液保藏法,原理：寡营养保存，将菌种悬于不含养分的溶液中。 适用菌种：丝状真菌、酵母状真菌及肠道科细菌。 保藏期：10 或室温保藏（18-20 ） 1年以上,12,（八）低温保藏法,方法：在封密性能好的螺口小管中，加入1-2ml菌液，封口后直接放入低温冰箱中保藏。 保藏期：-20 保藏期1年左右。,13,三、菌种保藏的注意事项,1 菌种在保藏前所处状态 休眠体如孢子或芽胞 培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能衰退） 培养温
6、度 一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种进行保藏效果好,14,三、菌种保藏的注意事项,2 菌种保藏所用基质 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营养成分贫乏些较好； 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一些有毒物质； 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易形成有毒物质。,15,三、菌种保藏的注意事项,3 操作过程对细胞结构的损伤 冷冻干燥时，冻结速度缓慢易导致细胞内形成较大的冰晶，对细胞结构造成损伤； 真空干燥程度影响细胞结构，加入保护剂为了减轻冷冻干燥所引起的细胞结构破坏。,16,四、菌种保藏机构,普通微生物菌种保藏管理中心（） 农业微生物菌种保藏管理中心（） 工业微生物菌种保藏管理中心（） 医学微生物菌种保藏管理中心（） 中国抗生素菌种保藏管理中心（） 兽医微生物菌种保藏管理中心（） 林业微生物菌种保藏管理中心（） 中国典型培养物保藏管理中心（）,17,谢谢,
