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1、外周血细胞形态学检验,1,1.血涂片的制备：手工推片法 2.血涂片的染色：瑞氏染色法 3.红细胞的形态检查,2,将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛，特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别诊断具有重要价值。,血涂片（blood smear）的制备,3,1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。,3.使用时切勿用手触及玻片表面。,载玻片的清洁,血涂片的制备,2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。,4,手工推片法,灰白层涂片法,血涂片的制备方法,血涂片的制备,薄血涂片法,厚血涂片法,自动血液涂片法,5,手持玻片推制血膜
2、,推片,用推片从血滴前方接触血滴,推片角度,吸附血液成一线,推完血片，迅速干燥,手工薄血推片法,6,厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。,良好血涂片的标准,血涂片的制备,7,血滴越大，推片角度越大，速度越快，血液粘度越高，则血膜越厚。 血滴越小，推片角度越小，速度越慢，血液粘度越低，则血膜越薄。,如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜的厚薄合适？,对于严重贫血患者，应如何推制血片？,影响血膜厚薄的因素,血涂片的制备,8,角度大, 速度快, 太厚, 太短,推制适当的血膜,推片不光滑，呈毛刷状,用力不均，呈搓板状,血量过多，无尾,玻片油腻，有空泡,9,1.
3、灰白层涂片法,抗凝血离心，取灰白层涂片。,用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑狼疮细胞(LEC)检查。,其他方法,血涂片的制备,2.厚血涂片法,用于疟原虫、微丝蚴的检查,10,血涂片的染色,染色的目的是使细胞膜、细胞浆、胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定的颜色，以便于显微镜下观察与识别。,11,一、瑞氏染色法（Wrights stain）,二、吉姆萨染色法（Giemsas stain）,三、瑞氏-吉姆萨复合染色法,血涂片的常用染色方法,对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。,对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄生虫着色较好。,取二者之长，染色效果好。,12,瑞氏染色法,染料：酸性染料伊红和碱性
4、染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天青。 溶剂：甲醇。溶解 + 固定。 磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.46.8,13,染色原理,1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。 2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。 3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染成紫红色，称为中性物质。,14,pH对细胞染色的影响,在酸性环境中染色偏红；在碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸盐缓冲液，使染色环境维持在6.46.8之间，以达到满意的染色效果。,15,1.用玻璃笔在血膜两端划线。,2.瑞氏染液覆盖血膜
5、，染 0.51min。,3.加等量或稍多的缓冲液，混匀， 染510min。,4.流水冲去染液，干燥后镜检。,染色步骤,瑞氏染色法,16,正常血膜外观为淡紫红色。,镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红色，细胞核染紫红色。,染色结果,瑞氏染色法,17,5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水冲洗。,1.血膜正面朝上，干透后再染色。,2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。,3.染色过程中防止蒸发沉淀。,4.冲洗时应以流水冲洗，冲洗时间不能太久。,注意事项,瑞氏染色法,6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与 缓冲液的混合液。,18,质量控制,瑞氏染色
6、法,1载玻片要清洁。 2制备良好的血涂片。 3选择抗凝剂。 4处理白细胞浓度较低的标本。 5血细胞比容与涂片关系。 6新配置染液的处理。 7染色过深、过浅的处理。,19,红细胞形态检查,在贫血或其他血液系统疾病时红细胞除有数量变化外，往往伴有形态改变，表现在红细胞大小、形状、染色性质和内涵物的异常。因此，红细胞形态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的临床价值。,20,红细胞形态检查方法,低倍镜： 油镜：,制备血涂片,染色,镜检,检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀， 红细胞紧密排列但不重叠。,估计细胞分布和染色情况，浏览全片是否存在异常细胞。,观察红细胞形态。,21,正常红细胞形态,双凹圆盘形，淡
7、桔红色，中央1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红细胞直径为6.77.7m，平均直径7.2m左右，厚约2m。无核，胞质内无异常结构。除健康人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和部分白血病。,22,正常红细胞形态,23,异常红细胞形态,红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞,24,红细胞大小异常,1小红细胞( microcyte )：直径6m。血片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心淡染区消失。,25,
8、小红细胞( microcyte ),26,红细胞大小异常,2大红细胞( macrocyte)：直径10m。最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼细胞性贫血（MA）。也可见于溶血性贫血（HA）、骨髓增生异常综合症（MDS）。 3巨红细胞(megalocyte)：直径15m。常见于巨幼细胞性贫血（MA）和骨髓增生异常综合症（MDS）。,27,大红细胞 巨红细胞,28,红细胞大小异常,4红细胞大小不均(anisocytosis)：指红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。,29,红细胞大小不均,30,红细胞大小异常,小红细胞( mic
9、rocyte ) 大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte) 红细胞大小不均(anisocytosis),31,红细胞形状异常,1球形红细胞(spherocyte)：直径小于正常，厚度增加大于2m。无中心淡染区。常见于遗传性球形红细胞增多症（HS）和伴有球形细胞增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。,32,球形红细胞,33,红细胞形状异常,2椭圆形红细胞（elliptocyte）：细胞呈卵圆形、杆状，长度可大于宽度34倍。这类红细胞成熟后在高渗、等渗、低渗及正常血清内，其椭圆形保持不变。常见于遗传性椭圆形红细胞增多症（HE），可高达25%75%（正常人为1%）。也见
10、于巨幼细胞贫血。,34,椭圆形红细胞,35,红细胞形状异常,3靶形红细胞（target cell）：红细胞中心部位染色较深，其周围为苍白区域，而细胞边缘又深染，形如射击之靶。常见于各种低色素贫血（主要是地中海贫血，珠蛋白生成障碍性贫血）。可能因HbA含量贫乏而又分布不均所致。应注意与在血涂片制作中未及时固定而引起的改变相区别。,36,靶形红细胞,37,红细胞形状异常,4口形红细胞（stomatocyte）：红细胞中央苍白区呈扁平状，颇似张开的嘴巴或鱼口。血涂片中口形红细胞增多，见于遗传性口形红细胞增多症（HST），常10%。也可见于酒精中毒、小儿消化系统疾病引起的贫血等。,38,口形红细胞,3
11、9,红细胞形状异常,5镰形红细胞（sickle cell）：呈狭长形，形如镰刀，两端尖锐，正常情况下少见。主要见于HbS病，是由于红细胞内存在异常HbS所致。在缺氧的情况下，异常HbS溶解度降低，形成狭长的结晶体，使红细胞变形。,40,镰形红细胞,41,红细胞形状异常,6棘形红细胞（acanthocyte）：红细胞表面有针状或指状突起，间距不规则，突起的长度和宽度可不一。在-脂蛋白缺乏症病人的血涂片中出现较多。也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症、溶性性贫血及重金属中毒。应与皱缩红细胞区别。,42,红细胞形状异常,7皱缩红细胞：也称钝锯齿形红细胞（echinocyte），主要由于高渗、
12、制片不当等原因造成，红细胞周边呈钝锯齿状排列紧密，大小相等，长短一致。,43,皱缩红细胞,44,红细胞形状异常,8泪滴形红细胞（tear drop cell）：形如泪滴或梨状，正常人偶见。多见于骨髓纤维化。,45,泪滴形红细胞,46,红细胞形状异常,9裂片细胞（schistocyte）：为红细胞碎片或不完整的红细胞，系红细胞通过管腔狭小的微血管受牵拉、挤压所致。有各种形态如刺形、盔形、三角形及扭转形等。正常人血片中裂片红细胞2%。增多见于弥散性血管内凝血（DIC）、微血管病性溶血性贫血（MHA）。,47,红细胞形状异常,10红细胞形态不整（poikilocyte）：指红细胞形态发生无规律的明显
13、改变。如泪滴状、梨形、棍棒形及新月形。最常见于具有巨幼细胞性贫血（MA）。可能是由于贫血严重而造血原料不足，在骨髓内粗制滥造所致。也可能是红细胞脆性较大，在推片时碎裂所致 。,48,红细胞形态不整,49,红细胞形状异常,球形红细胞椭圆形红细胞 靶形红细胞口形红细胞 镰形红细胞棘形红细胞 皱缩红细胞泪滴形红细胞 裂片细胞红细胞形态不整,50,血红蛋白充盈度与着色异常,1.低色素性(hypochromic)：红细胞的生理性中心淡染区扩大,染色淡薄，甚至为环形红细胞，提示血红蛋白含量明显减少，常见于缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白合成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血（SA）和某些血红蛋白病。,51,低色素性
14、(hypochromic),52,血红蛋白充盈度与着色异常,2高色素性（hyperchromic）：红细胞的生理性中心淡染区消失，整个红细胞着色较深，而且胞体也大，区别于球形红细胞，MCH增高。最常见于巨幼红细胞性贫血（MA）。,53,高色素性（hyperchromic）,54,血红蛋白充盈度与着色异常,3嗜多色性（polychromic）：属于尚未成熟的红细胞，呈淡灰蓝色或灰红色，胞体大，相当于活体染色的网织红细胞。由于胞质中含有多少不等嗜碱性物质RNA与血红蛋白并存，因此呈嗜多色性。嗜多色性红细胞增多提示骨髓增生活跃，见于急性失血性贫血和溶血性贫血。,55,嗜多色性（polychromic
15、）,56,血红蛋白充盈度与着色异常,4细胞着色不一（anisochromia）：红细胞着色不一致，血红蛋白充盈度偏离较大，如同时出现低色素性和正常色素性红细胞，常见于铁粒幼细胞性贫血（SA） 。,57,血红蛋白充盈度与着色异常,低色素性(hypochromic) 高色素性（hyperchromic） 细胞着色不一（anisochromia） 嗜多色性（polychromic）,58,红细胞内出现异常结构,1嗜碱性点彩红细胞（basophilic stippling cell）：简称点彩红细胞。在瑞氏染色条件下，胞质内出现嗜碱性灰蓝色点状物的红细胞。属于未完全红细胞，其颗粒大小不一、数量不等。重
16、金属中毒者增多，常作为铅中毒的诊断筛选试验。,59,嗜碱性点彩红细胞,60,红细胞内出现异常结构,2豪焦小体（howell-jollys body）：又称染色质小体。位于成熟或幼红细胞的胞质中，圆形，有12m大小，染成紫红色，有1至多个，是核的残余物。常见于巨幼细胞贫血、溶血性贫血、脾切除后和白血病。,61,豪焦小体,62,红细胞内出现异常结构,3卡波环（Cabot ring）：胞质内变性脂蛋白所致。位于成熟或幼稚红细胞的胞质中，呈圆形或8字形的细线圈状结构。见于脾切除后或巨幼细胞性贫血。常与豪周小体并存 。,63,卡波环,64,红细胞内出现异常结构,4寄生虫。如疟原虫的环状体。,65,红细胞内出现异常结构,嗜碱性点彩红细胞 豪焦小体 卡波环 寄生虫,66,红细胞排列异常,1红细胞缗钱状形成（rouleaux formation）：当血浆纤维蛋白原和球蛋白含量增高时，可使红细胞表面负电荷降低，减
